叶绿素a测定

实验三 富营养化湖中藻量的测定（叶绿素a法）

一、实验目的

富营养化湖由于水体受到污染，尤以氮磷为甚，致使其中的藻类旺盛生长。此类水体中代表藻类的叶绿素a浓度常大于10微克/升。

本实验通过测定不同水体中藻类叶绿素a浓度，以考查其富营养化情况。 二、器材与用品

1、分光光度计（波长选择大于750nm，精度为0.5－2nm）。 2、比色杯（1cm；4cm）。 3、台式离心机（3500r/min）

4、离心管（15ml具刻度和塞子）；冰箱 5、匀浆器或小研钵。

6、蔡氏滤器；滤膜（0.45微克，直径47mm）。 7、真空泵（最大压力不超过300kpa）。

8、MgCO3悬液：lg MgCO3细粉悬于100ml蒸馏水中。 9、90％的丙酮溶液：90份丙酮＋10份蒸馏水。 10、水样：两种不同污染程度的湖水水样各2L. 三、方法和步骤

1、按浮游植物采样方法，湖泊、水库采样500ml，池塘300ml。采样点及采水时间同“浮游植物”。

2、清洗玻璃仪器：整个实验中所使用的玻璃仪器应全部用洗涤剂清洗干净，尤其应避免酸性条件下而引起的叶绿素a分解。 3、过滤水样；在蔡氏滤器上装好滤膜，每种测定水样取50－500ml减压过滤。待水样剩余若干毫升之前加入0.

叶绿素a与叶绿素b含量的测定

叶绿素a与叶绿素 含量的测定 叶绿素 与叶绿素b含量的测定 与叶绿素

叶绿素a与叶绿素b含量的测定

实验目的和意义 叶绿素a与叶绿素b是高等植物叶绿体色素的重 要组分，约占到叶绿体色素总量的75%左右。 叶绿素在光合作用中起到吸收光能、传递光能 的作用(少量的叶绿素a还具有光能转换的作用), 因此叶绿素的含量与植物的光合速率密切相关， 在一定范围内，光合速率随叶绿素含量的增加 而升高。另外，叶绿素的含量是植物生长状态 的一个反映，一些环境因素如干旱、盐渍、低 温、大气污染、元素缺乏都可以影响叶绿素的 含量与组成，并因之影响植物的光合速率。因 此叶绿素含量a与叶绿素b含量的测定对植物的 光合生理与逆境生理具有重要意义。

叶绿素a与叶绿素b含量的测定

实验原理 叶绿素提取液中同时含有叶绿素a和叶绿素b, 二者的吸收光谱虽有不同，但又存在着明显的 重叠，在不分离叶绿素a和叶绿素b的情况下同 时测定叶绿素a和叶绿素b的浓度，可分别测定 在663nm和645nm(分别是叶绿素a和叶绿素b 在红光区的吸收峰)的光吸收，然后根据 Lambert-Beer定律，计算出提取液中叶绿素a和 叶绿素b的浓度。 A663=82.04Ca+9.2

叶绿素含量的测定

一、原理

根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。

根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A＝αCL

式中：α比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。

如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。 已知叶绿素a、叶绿素b的80%丙酮溶液在红外区的最大吸收峰分别位于663、645nm处。已知在波长663nm下叶绿素a、叶绿素b在该溶液中的吸光系数的分别为82.04和9.27；在波长645nm处的吸光系数分别为16.75和45.60。根据加和性原

叶绿素含量的测定

一、 实验目的

1. 了解分光光度计的工作原理； 2. 掌握不同型号分光光度计的操作方计；

3. 通过本实验的学习掌握叶绿素含量测定的一种常见的方法------分光光度

法。

二、 实验原理

叶绿素是脂溶性色素，主要存在于以叶绿体为首的色素体中。在活体中，叶绿素与脂蛋白结合并受到还原系统的保护，对氧和光是稳定的。

叶绿素的80%丙酮提取液在波长663nm，645nm有吸收峰，叶绿素a和叶绿素b的浓度符合以下公式：

Ca=0.0127A663-0.00259A645

Cb=0.0229A645-0.00467A663 浓度单位是：g/L

Ca=12.7A663-2.59A645

Cb=22.9A645-4.67A663 浓度单位是：mg/L

叶绿素总浓度为： CT=Ca+Cb 若以试液中色素含量来表示，则

C(mg/L)?提取液总体积(ml)叶绿素含量（mg/g鲜样）?

样品重(g)?1000

三、 仪器、试剂和材料 1. 仪器

紫外-可见分光光度计、研体、25ml容量瓶、玻璃漏斗、玻璃棒、皮头滴管 2. 试剂

丙酮（分析纯）、85%丙酮、

植物体叶绿素荧光测定仪的原理与使用方法

【实验目的】

? 了解目前在光合作用研究中先进的叶绿素荧光技术，了解便携式叶绿素荧光仪测定

植物光合作用叶绿素荧光参数的基本原理和仪器的使用方法。

? 老师演示和学生分组利用便携式叶绿素荧光仪(PAM2100)测定实验植物的叶绿素荧

光基本参数 (Fo, Fm, Fv/Fm, Fm’, Fo’, Yield, ETR, PAR, qP, qN等)。 ? 了解荧光仪的广泛应用 【实验原理】

仪器介绍和工作原理

叶绿素荧光（Chlorophyll Fluorescence）的产生

? 传统的光合作用测定是通过测量植物光合作用时CO2的消耗或干物质积累计算出

来。叶绿素荧光分析技术通过测量叶绿素荧光量准确获得光合作用量及相关的植物生长潜能数据。

? 叶绿素荧光动力学技术在测定叶片光合作用过程中光系统对光能的吸收、传递、耗

散、分配等方面具有独特的作用，与“表观性”的气体交换指标相比，叶绿素荧光参数更具有反映“内在性”特点。

? 本实验以调制式叶绿素荧光仪PAM-2100（WALZ）为例，测定植物叶绿素荧光主

要参数。植物叶片的生长状况不同，所处位置的不同，光照不同，叶绿素荧光参数数值也会有所不同，所以不同叶片之

全球及中国叶绿素测定仪行业现状调研及未来发展趋势分析报告（2017-2022）

报告编号：2058091

叶绿素测定仪全球及中国叶绿素测定仪行业现状调研及未来发展趋势分析报告（2017-2022）

行业市场研究属于企业战略研究范畴，作为当前应用最为广泛的咨询服务，其研究成果以报告形式呈现，通常包含以下内容：

一份专业的叶绿素测定仪行业研究报告（2017年叶绿素测定仪发展现状及市场前景趋势分析），注重指导企业或投资者了解叶绿素测定仪行业整体发展态势及经济运行状

况，旨在为企业或投资者提供方向性的思路和参考。

一份有价值的叶绿素测定仪行业研究报告，可以完成对叶绿素测定仪行业系统、完整的调研分析工作，使决策者在阅读完行业研究报告后，能够清楚地了解叶绿素测定仪

行业市场现状和发展前景趋势，确保了决策方向的正确性和科学性。

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业发展趋势。

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叶绿素的提取、分离

一 、实验目的

1. 掌握从植物叶中提取叶绿素的方法。

2. 了解纸层层析的原理，掌握纸层析的一般操作和定性鉴定方法。 二、实验原理

1. 叶绿素提取原理：叶绿素等是脂溶性的有机分子，根据相似相溶的原理，叶绿体中含有叶绿体色素（叶绿素a和b、胡萝卜素及叶黄素）等色素分子溶于有机溶剂而不溶于有极性的水。故在研磨和收集叶绿色素时要用丙酮或乙醇等有机溶剂提取而不用水。

2. 色素分离的原理：纸层析是用滤纸作为载体的一种色层分析法，其原理主要是利用混合物中各组分在；流动相和固定相的分配比（溶解度）的不同而使之分离。滤纸上吸附的水为固定相（滤纸纤维常能吸20%左右的水），有机溶剂如乙醇等为流动相，色素提取液为层析试样。把试样点在滤纸的滤液细线位置上，当流动相溶剂在滤纸的毛细管的作用下，连续不断地沿着滤纸前进通过滤液细线时，试样中各组份便随着流动相溶剂向前移动，并在流动相和固定相溶剂之间连续一次有一次的分配。结果分配比比较大的物质移动速度较快，移动距离较远；分配比较小的物质移动较慢，移动距离较近，试样中各组分分别聚集在滤纸的不同的位置上，从而达到分离的目的。

剪纸形状 滤液基线

毛细管点样

三 、仪器和药品

薄层

Gene Company Limited

基因有限公司

叶绿素荧光研究背景知识介绍

前言

近些年来，叶绿素荧光技术已经逐渐成为植物生理生态研究的热门方向。荧光数据是植物光合性能方面的必要研究内容。目前这种趋势由于叶绿素荧光检测仪的改进而得到发展。然而荧光理论和数据解释仍然比较复杂。就我们所了解的情况来看，目前许多研究者对荧光理论不是很清楚，仪器应用仅仅限于简单的数据说明的基础上，本文在此基础上，目的在于简单明晰地介绍相关理论和研究要点，以求简单明确地使用叶绿素荧光检测设备，充分分析实验数据，重点在于植物生理生态学技术的应用和限制。

荧光测量基础

植物叶片所吸收的光的能量有三个走向：光合驱动、热能、叶绿素荧光。三个过程之间存在竞争，其中任何一个效率的增加都将造成另外两个产量的下降。因此，测量叶绿素荧光产量，我们可以获得光化学过程与热耗散的效率的变化信息。尽管叶绿素荧光的总量很小(一般仅占叶片吸收光能总量的1-2%)，测量却非常简单。荧光光谱不同于吸收光谱，其波长更长，因此荧光测量可以通过把叶片经过给定波长的光线的照射，同时测量发射光中波长较长的部分光线的量来实现。有一点需要注意的是，这种测量永远是相对的，因为光线不可避免会有损失。因此，所有

XXXX有限公司

新项目方法验证能力确认报告

项目名称： 项目负责人： 项目审核人： 项目批准人： 批准日期：

年 月 日

水质 叶绿素a的测定 分光光度法

HJ 897-2017

HJ 897-2017方法验证能力确认报告

水质 叶绿素a的测定 分光光度法

HJ 897-2017 方法验证能力确认报告

1.方法依据及适用范围

本方法依据《水质 叶绿素a的测定 分光光度法》（HJ 897-2017）。 本方法适用于适用于地表水中叶绿素 a 的测定。

本方法测定丙酮提取液中叶绿素 a 的检出限为 0.04 mg/L。当取样体积为 200 ml，丙酮提取液体积为 10 ml 时，本方法的检出限为 2 μg/L，测定下限为 8 μg/L。

警告：丙酮对人体健康有一定危害，操作时应在通风橱中进行，佩戴防护器具，避免接触皮肤和衣物。 2.方法原理及干扰

将一定量样品用滤膜过滤截留藻类，研磨破碎藻类细胞，用丙酮溶液提取叶绿素，离心分离后分别于 750 nm、664 nm、647 nm 和 630 nm 波长处测定提取液吸光度，根据公式计算水中叶绿素 a 的浓度。 3.主要仪器、设备及试剂

除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯

实验二 叶绿素的提取和分离

一、 实验目的

从富含叶绿素的菠菜叶片中提取叶绿素，并在薄层层析板上点样使叶绿素显示不同颜色。 二、 实验原理

要求同学们先查询资料，了解叶绿素相关知识，实验课上老师讲解。

三、 实验材料、器具

研钵、托盘天平、分液漏斗、干燥锥形瓶、毛细管、薄层层析板、饱和NaCl溶液、无水Na2SO4 四、 实验步骤 1、叶绿素的提取

在中放入几片(约5g)菠菜叶(新鲜的或冷冻的都可以．如果是冷冻的，解冻后包在纸中轻压吸左水分)。加入10mL2:1石油醚和丙酮混合液，适当研磨。将提取液用滴管转移至分液漏斗中，加入10mL饱和NaCl溶液(防止生成乳浊液)除去水溶性物质，分去H2O层，再用蒸馏水洗涤两次。将有机层转入干燥的小锥形瓶中，加2g无水Na2SO4，通风处理。处理后的液体倾至另一锥形瓶中(如溶液颜色太浅，可在通风柜中适当蒸发浓缩)。 2、点样

用一根内径 1mm的毛细管，吸取适量提取液，轻轻地点在距薄板一端1cm

处，平行点两点，两点相距1cm左右。若一次点样不够，可待样品溶剂挥发后．再在原处点第二次，但点样斑点直径不得越过2mm。 3、展开

先在小烧杯中放入展开剂[用石油醚和丙酮按3：1的比例进行混合作为展开