CYP450酶的底物

【细胞色素P450酶系与药物的代谢，李国昌，陈卫军，浦宇红】 【细胞色素P450的催化作用，张莉，李卫华】

【细胞色素P450 CYP2E1酶构型特征及其表达调控机制的研究进展，刘晨晖，乐江】 【中药对细胞色素P450调控作用的研究进展，钟育敏，吴文康】 【CYP450酶特性及其应用研究进展，《中国临床药理学与治疗学》2008年 第8期 | 李晓宇 刘皋林 上海交通大学附属第一人民医院临床药学室 上海200080】

【细胞色素P450与药物代谢的研究现状， 朱立勤； 娄建石】

【细胞色素P450酶系在药物代谢中的作用， 朱大岭； 韩维娜； 张荣】 【细胞色素P450酶系对药物生物转化的作用， 刘萍； 边强】

【苯巴比妥对鸡肝微粒体CYP450活性的影响， 杨海峰； 江善祥】 【恩诺沙星对小鼠肝微粒体细胞色素P450酶系的影响， 卢丽红】

【苯巴比妥和地塞米松对鸡细胞色素P450的诱导作用， 杨海峰； 张玲玲； 覃少华； 江善祥】

【细胞色素P450表达的诱导机制及其筛选方法的研究进展， 王青秀】 【细胞色素P450酶与合理用药， 吴伯镛】

【药物代谢中的肝细胞色素P450， 骆文香； 张银娣】 【细胞色素P450酶系与药物代谢的相互作用，

【细胞色素P450酶系与药物的代谢，李国昌，陈卫军，浦宇红】 【细胞色素P450的催化作用，张莉，李卫华】

【细胞色素P450 CYP2E1酶构型特征及其表达调控机制的研究进展，刘晨晖，乐江】 【中药对细胞色素P450调控作用的研究进展，钟育敏，吴文康】 【CYP450酶特性及其应用研究进展，《中国临床药理学与治疗学》2008年 第8期 | 李晓宇 刘皋林 上海交通大学附属第一人民医院临床药学室 上海200080】

【细胞色素P450与药物代谢的研究现状， 朱立勤； 娄建石】

【细胞色素P450酶系在药物代谢中的作用， 朱大岭； 韩维娜； 张荣】 【细胞色素P450酶系对药物生物转化的作用， 刘萍； 边强】

【苯巴比妥对鸡肝微粒体CYP450活性的影响， 杨海峰； 江善祥】 【恩诺沙星对小鼠肝微粒体细胞色素P450酶系的影响， 卢丽红】

【苯巴比妥和地塞米松对鸡细胞色素P450的诱导作用， 杨海峰； 张玲玲； 覃少华； 江善祥】

【细胞色素P450表达的诱导机制及其筛选方法的研究进展， 王青秀】 【细胞色素P450酶与合理用药， 吴伯镛】

【药物代谢中的肝细胞色素P450， 骆文香； 张银娣】 【细胞色素P450酶系与药物代谢的相互作用，

西安立科环保科技有限公司 水质大肠菌群酶底物法检测系统介绍

一、 检测用途：

酶底物法测定用途：用于检测水中总大肠菌群粪大肠菌群（耐热大肠菌群）

和大肠埃希氏菌。可用于检测水的类型：饮用水、水源水、废水、食品水、地表水、地下水、海水、瓶装水、中水、二次供水、管网水、畜牧用水、医疗用水等。

二、检测原理：

酶底物法采用 ONPG 和 MUG 两种营养指示剂，这两种试剂分别可以被大肠菌群的 β-半乳糖苷酶和大肠杆菌的 β-葡糖醛酸酶分解代谢。当大肠菌群在酶底物检测试剂中生长时，其使用 β-半乳糖苷酶分解代谢 ONPG，并使样品从无色变为黄色。大肠杆菌使用 β-葡糖醛酸酶分解代谢 MUG 时，能够发出荧光。

三、 优势特点：

酶底物法为GB5750-2006收录的用于大肠杆菌检测标准方法，酶底物法是目前水中大肠杆菌检测的最先进方法，目前在发达国家水质大肠菌群检测分别占到95%和90%的市场，以其方便快捷，假阳性低，适用大量样品快速检测等优点正逐步被国内检测部门所认可。

相对于多管发酵和滤膜法，酶底物法检测步骤大大减少，而且对实验环境要求不高，检测时间可减少到24小时，在日常水样监测及应急监测中具有很好的应用前景，可及时检测，预防，最大限度的减少

西安立科环保科技有限公司 水质大肠菌群酶底物法检测系统介绍

一、 检测用途：

酶底物法测定用途：用于检测水中总大肠菌群粪大肠菌群（耐热大肠菌群）

和大肠埃希氏菌。可用于检测水的类型：饮用水、水源水、废水、食品水、地表水、地下水、海水、瓶装水、中水、二次供水、管网水、畜牧用水、医疗用水等。

二、检测原理：

酶底物法采用 ONPG 和 MUG 两种营养指示剂，这两种试剂分别可以被大肠菌群的 β-半乳糖苷酶和大肠杆菌的 β-葡糖醛酸酶分解代谢。当大肠菌群在酶底物检测试剂中生长时，其使用 β-半乳糖苷酶分解代谢 ONPG，并使样品从无色变为黄色。大肠杆菌使用 β-葡糖醛酸酶分解代谢 MUG 时，能够发出荧光。

三、 优势特点：

酶底物法为GB5750-2006收录的用于大肠杆菌检测标准方法，酶底物法是目前水中大肠杆菌检测的最先进方法，目前在发达国家水质大肠菌群检测分别占到95%和90%的市场，以其方便快捷，假阳性低，适用大量样品快速检测等优点正逐步被国内检测部门所认可。

相对于多管发酵和滤膜法，酶底物法检测步骤大大减少，而且对实验环境要求不高，检测时间可减少到24小时，在日常水样监测及应急监测中具有很好的应用前景，可及时检测，预防，最大限度的减少

细胞色素P450亚酶CYP2D6（AMMC）活性荧光定量检测试剂盒产品说明书

（中文版）

主要用途

细胞色素P450亚酶CYP2D6（AMMC）活性荧光定量检测试剂是一种旨在通过AMMC去甲基化酶反应系统中AMMC转化为AMHC后荧光峰值的变化，即采用荧光法来测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞或组织裂解萃取液样品（动物、人体）或纯化微粒体样品细胞色素P450亚酶2D6的活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景

细胞色素P450酶是肝细胞微粒体复合功能单加氧化酶系统的总称。其分成五十多个亚酶：CYP1至CYP51。作用在于体内外源化合物（xenobiotics），包括药物、致癌剂、化学污染物的氧化代谢，即单加氧化作用（monooxygenation）和羟化作用（hydroxylation）。AMMC羟基化酶（AMMC 7-hydroxylase）的活性是细胞色素P450亚酶2D6的诊断标记，其基于AMMC羟基化酶选择性催化细胞色素P450亚酶2D6的活性。人体细胞色素P450亚酶2D6（CYP2D6；EC1.14.14.1），主要表达在肝、肾、胎盘、脑

摘要

多环芳烃（polycylic aromatic hydrocarbons，PAHs）是一类典型的芳香烃类有机污染物，其种类繁多，常见的共有16种。近年来多环芳烃的污染已经引起人们的高度重视，随着对PAHs 微生物降解研究的深入，已经发现大量在耗氧条件下对四环以下PAHs有降解能力的细菌，但微生物对五环及五环以上PAHs的降解能力较低，为了提高菌群的PAHs底物范围，对其降解途径中的关键酶进行分子改造具有非常重要的意义。萘双加氧酶（Naphthalene dioxygenase，NDO）是多环芳烃降解途径中的关键酶，。本论文通过计算机模拟的方式研究不同来源的萘双加氧酶与多环芳烃的相互作用规律，考察影响其活性中心口袋大小的关键氨基酸，为使用定点突变等基因工程技术提高萘双加氧酶的降解效率提供参考。本实验从数据库下载了9种来源不同的萘双加氧酶的α 亚基氨基酸序列，采用3种方式进行同源建模，经过3种方法对模型进行评价，选取质量最好的一组模型与16个PAHs分子进行对接。通过比较这些不同菌种来源的NDO与PAHs的对接结果，寻找影响其相互作用的关键氨基酸。实验结论如下：通过同源模建及模型评价，发现工具Phyre2获得的模型质量相对较好；使用Auto

细胞色素P450酶诱导模型

摘要

细胞色素氧化酶P450是人体内一类参与内源性和外源性化合物代谢的重要代谢酶，代谢活化许多药物，前致癌物，前毒物，和质变剂。大约有60%的药物主要依赖细胞色素氧化酶P450的代谢作用清除的。

本文主要建立了细胞色素P450酶的诱导模型，有望为研究新药提供参考。

建立化合物对细胞色素P450酶的诱导的模型时，我们选择了利福平,奥美拉挫和苯巴比妥分别作为1A2,3A4和2B6酶的诱导剂。此模型使用肝细胞来建立的，化合物加入到细胞培养液中，通过LC-MS来从测定代谢产物的变化。同时,我们进行了基因水平的检测,在基因水平上我们检测了化合物对细胞的诱导作用.通过此模型，我们可以直接从LC-MS测定的代谢产物的多少来确定未知的化合物是否对细胞色素CYP450是否有诱导作用。由实验得知，利福平,奥美拉挫和苯巴比妥对1A2,3A4和2B6的诱导能力很强，都超过20倍。

1/7

前言

细胞色素P450(cytochrome,CYP450)是一类以还原态与CO结合后在450

实验26 过氧化氢酶活力的测定（必修）

[目的与原理]

掌握过氧化氢酶活力的测定原理和比色测定方法，并用此方法测定水产动物血清中过氧化氢酶的活力。

血清中的过氧化氢酶（CAT）分解H2O2的反应，可通过加入钼酸铵而迅速中止，剩余的H2O2与钼酸铵产生一种淡黄色的络合物，在405nm处测定其生成量，即可计算出CAT的活力，CAT活力单位定义为：每1分钟分解1μmol的过氧化氢即为1个酶活力单位（U）。 [试剂与器材] 试剂：

1、磷酸盐缓冲液（67mmol / l，pH=7.4）：取Na2HP04 7.60g，KH2P041.82g，溶于1L蒸馏水中，调pH至7.4。

2、基质液（65μmol/ l, H2O2）：取30% H2O2 3.69 ml加pH7.4磷酸盐缓冲液至500ml。 3、钼酸铵：称取［(NH4)6Mo7O24］20.2g溶于500ml蒸馏水中。 器材：

721分光光度计 , 0.5cm比色杯，恒温水箱（37℃±0.5℃），试管 16mm×100mm，移液管，吸耳球，可调微量进样器。 [实验步骤]

1、样品测定：基质液置于37℃水浴 5 min，然后按下列步骤操作 试剂 基质液 钼酸铵 缓冲液 血清

对照管 1.0

准确称取天山云杉种子0.1 g，先加入 1 ml 预冷的50 mmol/ L的磷酸缓冲液 (pH 7.0，内含1 mmol/ L EDTA)，研磨成匀浆，然后用 4.5 ml 分两次冲洗研钵至试管中，4 ℃，10000 r/min 离心 20 min，上清液即为酶提取液，4 ℃保存用于ROS系统酶活性分析。 3 酶活性的测定

3.1 过氧化物酶 (POD，EC 1.11.1.7) 活性的测定。

按照 Chance 和 Maehly[6]的方法，并作如下修改:反应混合液为50 mmol/ L的磷酸缓冲液 (pH 7.0，内含 0.1 mmol/ L EDTA) 2.9 mL，2 % H2O2 1.0 mL，50 mmol/ L 愈创木酚1.0 mL。测定时，反应混合液先在 25 ℃ 水浴中预热，立即加入0.1 mL酶液以启动反应，以缓冲液调零，测定OD470值，每隔 30 s读数一次。取 0 — 60 s 时间段，即 1 min 反应时间来计算酶活性。以每分钟OD470增加0.01的酶量为一个酶活单位，U·g-1。

计算公式: POD活性 = ΔA470 × Vt × (0.01× t × FW × V1) -1 注: ΔA470:反应时间内

*33*年第"-期中国饲料

—*-—

纤维素酶酶活的测定方法

河南省科学院生物研究所河南省饲料产品质量监督检验站

刘德海陈小鸽

杨玉华

安明理

饲用纤维素酶在饲料工业中已普及应用，对其质量检测显得日益重要。纤维素酶是一种复合酶，按作用底物的能力划分为两部分，一部分是对棉花纤维素能起催化水解作用的酶，称为!"酶；另一部分是对羧甲基纤维素钠（#$%!&!）起水解作用的酶，称为!’酶。据此，一般采用两种测定方法，一种是适用于!(酶的!&!法，另一种是适用于!"酶的滤纸法。下面就此两种方法作一介绍。

"

!&!（羧甲基纤维素）法")"材料")")"饲用纤维素酶由河南省科学院生物研

究所提供。

")")*试剂磷酸氢二钠、

柠檬酸、羧甲基纤维素、+，,%二硝基水杨酸、氢氧化钠、酒石酸钾钠、亚硫酸钠、苯酚。")")+仪器

-*"型分光光度计、

恒温水浴锅、./0%*酸度计、

秒表。")")1

试剂配制")")1)"2/,)3柠檬酸缓冲液制取3)*45678

磷酸氢二钠液（称取-)