现代药物活性筛选

实验计划

实验目的：采用HEK293/α1D-AR/Gα16细胞模型，通过钙流实验评价关黄柏的四个血中移行成分小檗碱、黄柏内酯、黄柏酮及木兰碱对α1D型肾上腺素能受体的阻滞作用，表征成分的抗前列腺炎潜在活性；在22RV1人前列腺癌细胞上，通过MTT及相关分子生物学分析评价以上四种血中移行成分的治疗前列腺癌活性。

第一章 关黄柏血中移行成分抗前列腺炎活性评价 1 实验材料 1.1 仪器与试剂 1.1.1 实验仪器： CO2培养箱 紫外消毒柜 倒置荧光显微镜 倒置显微镜 超微量分光光度计 离心机 干燥箱 荧光读板仪 低温离心机 生物安全柜 电子分析天平 超纯水机 离心机（小） 电泳仪 电泳成像仪 荧光PCR仪 梯度PCR仪 磁力搅拌器

SANYO 三洋 泰州安康 OLYMPUS OLYMPUS 元仪 卢湘仪 上海一恒 PerkinElmer Hettich HDL

梅特勒-托利多 优普 Thermo Bio-Rad Bio-Rad Bio-Rad Bio-Rad IKA

立式蒸汽压力灭菌器 水浴锅 流式细胞仪 1.1.2 实验材料：

上海博讯 IKA 默克密理博

HEK293/α1D-AR/Gα16稳转细胞系，22RV1人前列腺癌细胞（ATCC

2012级硕士研究生期末考题

(1) 请列举5种转基因动物可用于老年痴呆药物研究，并简要说明它们的特征和应用范围（5分）

i APP转基因小鼠：

病理特征：APP水平是正常鼠的6倍， Ab增高10-14倍，出现淀粉样血管病变，脂质氧化损伤，超氧化物歧化酶增加 。行为学特征：9-10月龄小数空间辨识能力受损。

应用范围： APP 转基因鼠可用于抗老年痴呆中药的药效评价、活性筛选以及作用机制的研究。 ii APOE小鼠

特征：该模型的转基因小鼠动脉壁损伤严重,内皮细胞出现受损、变质、脱落,细胞内连接不紧密。内皮下间隙增宽,内弹力膜破坏和消失；中膜平滑肌结构破坏,合成型平滑肌较多。

应用范围：可用于模拟小鼠老化过程中动脉粥样硬化进程，以及药物等因素对动脉粥样硬化进程的影响。

iii 神经组织特异表达CTF1转基因小鼠

特征：转入的CTF1基因在脑组织的表达水平均高于同龄对照小鼠，CTF1转基因小鼠大小脑组织基本结构形态与正常小鼠对照没有异常。

应用范围：用于研究CTF1生物学功能与老年痴呆等疾病发病机制的关系。 iv 快速老化SAM-P小鼠

特征： 老化迅速，且其海马甲醛含量随老龄化进程而增加。

应用范围：研究内源性甲醛异常蓄积与记忆衰退关

2012级硕士研究生期末考题

(1) 请列举5种转基因动物可用于老年痴呆药物研究，并简要说明它们的特征和应用范围（5分）

i APP转基因小鼠：

病理特征：APP水平是正常鼠的6倍， Ab增高10-14倍，出现淀粉样血管病变，脂质氧化损伤，超氧化物歧化酶增加 。行为学特征：9-10月龄小数空间辨识能力受损。

应用范围： APP 转基因鼠可用于抗老年痴呆中药的药效评价、活性筛选以及作用机制的研究。 ii APOE小鼠

特征：该模型的转基因小鼠动脉壁损伤严重,内皮细胞出现受损、变质、脱落,细胞内连接不紧密。内皮下间隙增宽,内弹力膜破坏和消失；中膜平滑肌结构破坏,合成型平滑肌较多。

应用范围：可用于模拟小鼠老化过程中动脉粥样硬化进程，以及药物等因素对动脉粥样硬化进程的影响。

iii 神经组织特异表达CTF1转基因小鼠

特征：转入的CTF1基因在脑组织的表达水平均高于同龄对照小鼠，CTF1转基因小鼠大小脑组织基本结构形态与正常小鼠对照没有异常。

应用范围：用于研究CTF1生物学功能与老年痴呆等疾病发病机制的关系。 iv 快速老化SAM-P小鼠

特征： 老化迅速，且其海马甲醛含量随老龄化进程而增加。

应用范围：研究内源性甲醛异常蓄积与记忆衰退关

MTT法活性筛选步骤

材料 试剂：

二甲亚砜（DMSO）分析纯 灭菌PBS, pH 7.4

MTT储存液（5mg/mL）：配制于灭菌PBS，-20摄氏度保存 工作液MTT：储存液用灭菌PBS稀释5倍使用。

MTT法筛选步骤 一、接种细胞

1. 将培养在100mm培养皿的对数生长期细胞去掉培养基，用5ml灭菌PBS洗涤一次 2. 去掉PBS，用胰酶消化制成单细胞悬液

3. 用血球计数板计数细胞悬液浓度，根据需要接种细胞量，吸取相应体积细胞悬液，用

培养液稀释至相应体积，混匀，使细胞浓度为5×104/ml.

4. 向96孔细胞培养板中每孔加入100ul细胞稀释悬液，空白组加入等量培养液，未加细

胞悬液的孔加入等量PBS缓冲液。 5. 培养板放入37℃，5% CO2培养箱中培养24h。

接种前的细胞必须状态良好，且不能太密集。否则不能接种。

接种时要不时摇晃细胞悬液，保证接种密度均匀。接种密度不均匀是造成误差的主要原因。

二、药物准备、药物处理

实验前开紫外照射细胞间、超净台及配药用离心管。 1. 待测样品用DMSO配成浓度为50mg/ml母液。

2. 用培养液将配好的50mg/ml母液稀释至100ug/ml，再用100ug/ml药物稀释成不同浓

度（

櫓櫓櫓櫓櫓櫓

编　　译

櫓櫓櫓櫓櫓櫓

走在药物发现前沿的高内涵药物筛选

陈　伟，王莉莉

（军事医学科学院毒物药物研究所，北京　１００８５０）

摘要：高内涵药物筛选已经成为药物发现领域的一个重要部分，在生物医药领域里的重要性日益突显，其广泛应用必然会为药物发现带来新的希望与突破。高内涵药物筛选方法具有许多独特的优势，它使得药物筛选更趋生物化。本文介绍了高内涵药物筛选的发展过程，及其当前和潜在的应用领域，探讨了高内涵药物筛选与其他研发技术手段之间的关系，并就其在新药发现中的作用和前景进行了阐述。

关键词：高内涵药物筛选；高通量药物筛选；药物发现；靶标评价

中图分类号：Ｒ９１４．２　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１０９７１（２００７）０３０２０４０４　　高内涵药物筛选（ｈｉｇｈｃｏｎｔｅｎｔｓｃｒｅｅｎｉｎｇ，ＨＣＳ）在药物研发后期的应用已有近１０年的历史。科技的发展又推进ＨＣＳ应用到药物研发早期，包括高通量药物筛选（ｈｉｇｈｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔｓｃｒｅｅｎｉｎｇ，ＨＴＳ）和先导化合物优化。近来，图像分析和计算机技术的进步以及系统细胞生物学的技术革新，又将ＨＣＳ的应用拓展到药物靶标确证和包括ＲＮＡ干扰（ＲＮＡｉ）筛选在内的基础生物学研究领域。当前，Ｈ

血管活性药物使用规范 概述：

一、定义：血管活性药物通过改变血管平滑肌张力，调控血压，影响心脏前负荷、后负荷，主要应用于高血压急症、休克、心力衰竭等。

二、分类：1、血管扩张剂：硝酸甘油、硝普钠、酚妥拉明等。

2、血管收缩剂：去甲肾上腺素、肾上腺素、异丙肾上腺素、多巴胺、多巴酚丁胺、阿拉明等。

三、作用机制、用途、不良反应 1、硝酸甘油

（1）作用机制：a：松弛平滑肌，特别是对血管平滑肌作用最明显，降低回心血

量和心脏前后负荷，减少心肌耗氧量。

b：扩张冠状动脉，增加缺血区血流灌注，保护缺血心肌细胞，减轻缺血损伤。 （2）用途：a：防治心绞痛、心力衰竭。

b：静脉用药可用于急性心肌梗死合并心衰。 C：用于高血压危象及难治性高血压病。

（3）不良反应：a：搏动性头痛、头晕、体位性低血压、面部皮肤发红。

b：长期应用可产生耐药性。宜间歇给药。 C：使用时注意观察患者血压情况。

2、硝普钠

（1）作用机制：选择性的直接作用于血管平滑肌，能强烈扩张动静脉，并降低

心室前后负荷。

（2）用途：a：抗高血压危象首选药。

b：顽固性心力衰竭及急性左心衰及急性心肌梗死的治疗。 c：急性肺水肿。

（3）不良反应：a：使用应密切观察血压、心

第29卷　第2期西北农林科技大学学报(自然科学版)

().29No.2Vol

56种植物抑菌活性筛选试验

冯俊涛,石勇强,张　兴

(西北农林科技大学无公害农药研究服务中心,陕西杨陵712100)

Ξ

　　[摘　要]　以小麦赤霉病菌、番茄灰霉病菌和苹果炭疽病菌为供试菌种,对56种植物的60种丙酮提取物进行了抑菌活性筛选。结果表明,芦苇、龙葵等35种提取物对至少1种病菌的菌丝生长抑制率大于60%,芦苇、胡颓子等26种提取物对苹果炭疽病菌孢子的萌发有60%以上的抑制作用;其中莴苣、苍耳、苦参、苦豆子等8种植物对供试病菌菌丝生长和苹果炭疽病菌孢子萌发的抑制作用较强,抑制效果均在80%以上,值得进一步研究开发。

[关键词]　植物源杀菌剂;抑菌作用;活性筛选

[中图分类号]　S482.2+92　　　　　　　[文献标识码]　A

[文章编号]100022782(2001)022065204

　　从植物中寻找抑菌活性物质,是开发、研制新型杀菌剂的热点之一。MaruzzellaheBalter对多种精油杀菌活性系统的测试发现,多种植物香精油能抑制真菌的生长[1],在多种植物中普遍存在的小孽碱能有效地防治马铃薯晚疫病[2],李重九等从韭菜中物[3],],经结构鉴定、人工模拟合成,成功

血管活性药物使用规范 概述：

一、定义：血管活性药物通过改变血管平滑肌张力，调控血压，影响心脏前负荷、后负荷，主要应用于高血压急症、休克、心力衰竭等。

二、分类：1、血管扩张剂：硝酸甘油、硝普钠、酚妥拉明等。

2、血管收缩剂：去甲肾上腺素、肾上腺素、异丙肾上腺素、多巴胺、多巴酚丁胺、阿拉明等。

三、作用机制、用途、不良反应 1、硝酸甘油

（1）作用机制：a：松弛平滑肌，特别是对血管平滑肌作用最明显，降低回心血

量和心脏前后负荷，减少心肌耗氧量。

b：扩张冠状动脉，增加缺血区血流灌注，保护缺血心肌细胞，减轻缺血损伤。 （2）用途：a：防治心绞痛、心力衰竭。

b：静脉用药可用于急性心肌梗死合并心衰。 C：用于高血压危象及难治性高血压病。

（3）不良反应：a：搏动性头痛、头晕、体位性低血压、面部皮肤发红。

b：长期应用可产生耐药性。宜间歇给药。 C：使用时注意观察患者血压情况。

2、硝普钠

（1）作用机制：选择性的直接作用于血管平滑肌，能强烈扩张动静脉，并降低

心室前后负荷。

（2）用途：a：抗高血压危象首选药。

b：顽固性心力衰竭及急性左心衰及急性心肌梗死的治疗。 c：急性肺水肿。

（3）不良反应：a：使用应密切观察血压、心

简答题

1.准确度、精密度、灵敏度、检测限的物理意义及之间的关系

准确度：指测量值和真实值接近的程度，测量值与真实值越接近，测量值越准确。 精密度：平行测量的各测量值之间的接近程度，各测量值之间越接近，测量的精密度越高。

灵敏度：指仪器测量最小量底物的测量能力，所测量越小，灵敏度越高。 检测限：指试样中被测物能被检测出的最低量。

准确度与精密度之间的关系：准确度高，一定精密度好；精密度高，不一定准确度好，可能存在系统误差。

灵敏度和检测限之间的关系：灵敏度高，检测限越低。 2.列举四种表征有机结构的方法

红外光谱法：根据分子内部原子之间相对振动和转动来确定有机分子结构

紫外光谱法：根据化合物吸收光谱的形状、吸收峰位置、数目、最大摩尔吸收系数进行定性

质谱：通过对谱图中各种碎片离子、亚稳离子、分子离子的化学式、M/Z、相对峰高等信息，根据各类有机化合物的分裂规律，找出个碎片离子产生的途径，从而拼凑出整个分子结构，或与已知化合物标准图谱对比进行鉴别

核磁共振法：通过谱图中化学位移值，偶合常数值、谱图峰相对强度等信息进行结构鉴定

3.最低检出限与定量限的物理意义及之间的关系

最低检出限：指产生一个能被检测出信号所需的最小浓度和含量 定量限：样品中被

陈桂庭 08333035

抗菌药物筛选的实验方法与技术

一、 实验原理

体外实验是筛选抗菌药物或测试新药抗菌性能的重要环节。药物对细菌代谢的影响、可以使细胞呼吸量减低，或酶系统受到抑制等，因而出现细菌不生长或部分抑制，可借以判断药物对细菌有无抗菌作用，或抗菌范围。

培养基是指利用人工方法将适合微生物生长繁殖成积累代谢产物的各种营养物质混合配制而成的营养基质。主要用于微生物的分离、培养、鉴定以及菌种保藏等方面。培养基一般应含有微生物生长繁殖所需要的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水等营养成分。此外，为了满有微生物生长繁殖或积累代谢产物的要求，还必须控制培养基的pH。

按培养基的物理状态，可将培养基分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基。固体培养基是指在液体培养基中加入一定量的凝固剂(常加1.5%-2%的琼脂)经融化冷凝而成。半固体培养这是指在液体培养基中加入0.8％-1％左右的琼脂，经融化冷凝而成。液体培养基是指培养基中不加凝固剂琼脂，培养基呈液体状态。

正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础。由于微生物种类及代谢类型的多样性，因而用于培养微生物培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各有差异。但一般培养基的配制程序却