细胞克隆形成实验结果分析

细胞克隆形成实验

当单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体，成为集落或克隆。每个克隆含有50以上的细胞，大小在0.3-1.0mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力。各种理化因素可能导致细胞的克隆形成能力发生改变。通过一定的实验方法可以对细胞的克隆形成能力进行检测。

细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大：

一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形成率弱，转化细胞系强；正常细胞克隆形成率弱，肿瘤细胞强。

实验方法：

平板集落形成实验、软琼脂集落形成实验

(a) 平板集落形成实验：本法适用于贴壁生长的细胞和正常培养的细胞

(b) 软琼脂集落形成实验：本法适用于非锚着依赖性生长的细胞，如骨髓造血干细胞、肿瘤细胞株、转化细胞系。

平板克隆形成实验基本步骤：

1、取对数生长期的各组细胞，分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，并把细胞悬浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中备用。

2、将细胞悬液作梯度倍数稀

细胞克隆形成实验

当单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体，成为集落或克隆。每个克隆含有50以上的细胞，大小在0.3-1.0mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力。各种理化因素可能导致细胞的克隆形成能力发生改变。通过一定的实验方法可以对细胞的克隆形成能力进行检测。

细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大：

一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形成率弱，转化细胞系强；正常细胞克隆形成率弱，肿瘤细胞强。

实验方法：

平板集落形成实验、软琼脂集落形成实验

(a) 平板集落形成实验：本法适用于贴壁生长的细胞和正常培养的细胞

(b) 软琼脂集落形成实验：本法适用于非锚着依赖性生长的细胞，如骨髓造血干细胞、肿瘤细胞株、转化细胞系。

平板克隆形成实验基本步骤：

1、取对数生长期的各组细胞，分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，并把细胞悬浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中备用。

2、将细胞悬液作梯度倍数稀

红细胞血型不规则抗体是导致免疫性溶血性输血反应、新生儿溶血病、自身免疫性溶血性贫血等的原因,平常多在ABO正反定型不符、交叉配血异常、新生儿溶血、溶血性贫血时经血型血清学试验被发现。对以往的不规则抗体检测情况进行分析,可以大致了解本地区人群中的不规则抗体分布特点,为今后的血型血清学和输血工作提供帮助与参考。

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中国实验诊断学

20年 5 07月第 l卷 1

第5期

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6 3 — 8— -—

[] 5孙

芾，林

宏，王厚芳，呼吸系统感染性疾病快速诊断技术等.

[] 6赵林清，渊，钱王之棵， .等呼吸道合胞病毒检测方法比较[] J.临床儿科杂志， O,1 1: . 2 32 () 2 O 3

的应用[]现代检验医学杂志， 0,94: . J. 2 41()1 0 3

(收稿日期：06 8 0 20—0—1)文章编号：07 2720 )一08—0 10—4 8(Of 7 63 2

红细胞血型不规则抗体检测结果分析关亮，郑朝晖(台州市中心血站，浙江台州 380) 1 0 0

红细胞血型不规则抗体是导致免疫性溶血性输

13操作方法 .

盐水法、球蛋白法、抗吸收放散试

血反应、新生儿溶血病、自身免疫性溶血性贫血等的原因

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红细胞冷凝集对不同类型血细胞分析仪检测结果的影响分析

作者：陈燕 许立新

来源：《中外医学研究》2015年第17期

【摘要】 目的：分析红细胞冷凝集对不同类型血细胞分析仪检测结果的影响。方法：选取笔者所在医院2013年9月-2014年8月红细胞冷凝集标本40份，应用Sysmex-1800、BC-5300型血细胞分析仪检测，比较分析37 ℃水浴前后的检测结果。结果：BC-5300仪器37 ℃水浴前红细胞冷凝集标本WBC、PLT、HCT指标均显著低于37 ℃水浴后，差异均有统计学意义（P0.05）；Sysmex-1800仪器37 ℃水浴前红细胞冷凝集标本WBC、RBC、HCT、MPV指标均显著低于37 ℃水浴后，差异均有统计学意义（P0.05）；37 ℃水浴后检测结果均恢复正常。Sysmex-1800仪器37 ℃水浴后红细胞冷凝集标本WBC、HCT、MCHC指标与BC-5300仪器比较差异均有统计学意义（P0.05）。结论：红细胞冷凝集对不同类型血细胞分析仪检测结果均出现一定程度的影响，红细胞冷凝集标本需置入37 ℃水浴将冷凝集消除后再次检测。 【关键词】

常用分子克隆实验方法I

一、植物总DNA的小量提取

方法1：提取吸附法。无须巯基乙醇、氯仿等有毒物质，产物无须Rnase处理。

(1) 充分研磨。称取约0.2克植物组织，加入液氮充分研磨3-5min，稍后加约1ml溶液

A，继续研磨至略粘稠的组织匀浆，用大口1ml吸头将所有溶液移至1.5ml离心管中，55℃水浴30min；

(2) 高速离心去杂质。10,000rpm离心5min，取约600ul上清至新1.5ml离心管； (3) 核酸吸附。往上清液中加入1倍的异丙醇，轻轻混匀，再加入总体积1/4已混匀的

溶液B，静置3min;

(4) 低速离心沉淀。5000rpm离心1min，轻轻倒掉上清，并用吸水纸轻吸离心管口，

再用移液枪吸走大部分残余液体；

(5) 75%乙醇清洗。加入1ml75%乙醇，5000rpm离心30s，轻轻倒掉上清，用吸水纸稍

吸离心管口。重复该步骤一次，再5000rpm离心30s，然后用移液枪吸走管底的残液，晾干5min；

(6) 核酸洗脱。加入约55ul TE（PH8.0）至管底，轻轻重悬硅土，静置3min，10,000rpm

离心1min，用小枪头轻轻吸取出50ul管底溶液，冷藏。

方法2：CTAB法，此为在经典方法基础上，经过摸

整个基因克隆实验规程

完整

Document serial number【KK89K-LLS98YT-SS8CB-SSUT-SST108】

一、组织总RNA 的提取

相关试剂：T rizol；氯仿；苯酚；异丙醇；75%乙醇；RNase-free水

相关仪器：制冰机；液氮&研钵/生物样品研磨仪；高速离心机；移液器（1ml、200μl、

100μl/50μl）；涡旋振荡仪；恒温金属浴。

相关耗材：解剖工具，冰盒，离心管，离心管架，吸头（1ml，200μl/300μl），一次性手套，实验手套。

实验步骤

1.取暂养草鱼，冰上放置一段时间，然后解剖，剪取肠道50~100mg，放入研钵中，加入液氮迅

速研磨，然后加入1ml 预冷TRIzol试剂，充分研磨至无颗粒物存在。

2.转移到离心管中，室温放置5min，使细胞充分裂解；

3.按1ml Trizol加入200μl氯仿，盖上盖子，迅速充分摇匀15s，然后室温放置3min；

4.4℃，,12000g 离心15min；

此时混合物分为三层，下层红色的苯酚氯仿层，中间层和上层无色水相；RNA存在于无色水相中；

5.小心吸取上清液，千万不要吸取中间界面，否则有DNA污染；转移至一个新的离心管，加入等

体积的异丙醇，轻轻混匀；

6.室温放置10

Western实验步骤

1. 电泳(Electrophoresis)

（1）SDS-PAGE凝胶配制

SDS-PAGE凝胶进行配制，配方试剂去离子水，Arc-HCL(29:1)，10%APS，SDS,TEMED。 一般按分子大小配胶，现实验分离胶配12%-15%的胶，浓缩胶10%的胶。 配胶步骤：

1.清洗玻璃板，装好（注意不要漏即玻璃板要对齐）。 2.按比例配分离胶（8ml-10ml）

3.加水压胶，待分离胶凝固后（可见有分离胶与水有分隔线，一般凝固时间30分钟-1小时左右），吸走上层水面

4.按比例配浓缩胶（3ml-4ml），加入分离胶上层，插入梳子，（注意别有气泡），待凝。（如果今日不上样可以放入4°C冰箱）

注意：玻璃板要洗得干净；玻璃板要装好，不要漏；制胶过程中，一定要充分混匀，而且避免有气泡；

（2）样品处理

1.准备无菌EP管，向EP管内加入样品蛋白质体积的1/4体积的SDS缓冲液（5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液，现样品加3.5ul），之后加入相应蛋白样品（要制冰，蛋白质样品要放置在冰上），充分吹打混匀

2.100℃水浴加热5分钟，以充分变性蛋

学习目标：1.列表比较动物细胞融合与植物体细胞杂交的异同2.理解和掌握动物细胞融合的原理、过程和意义自主学习：1.动物细胞融合常探究交流知识点一.动物细胞融合课堂反馈1.下图表示

选修三学案 胶州四中高二生物

2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体

学习目标：

1.列表比较动物细胞融合与植物体细胞杂交的异同

2.理解和掌握动物细胞融合的原理、过程和意义

3.理解和掌握单克隆抗体制备的过程的步骤和应用

学习重难点：1.动物细胞融合的原理、过程和意义。2.单克隆抗体制备的过程的步骤和应用

知识回顾：1、植物体细胞杂交过程应用了那些技术?

2、植物与动物细胞结构有何区别？

自主学习：

1．动物细胞融合常用的诱导因素有、点是 。

2．制备单克隆抗体的技术流程是：用羊的红细胞对小鼠进行注射，使小鼠产生反应。然后，把

相应的 细胞和 细胞融合，再用 进行筛选，在该培养基上， 未融合的

亲本 细胞和

茶多酚的分离提取实验改进及结果分析

冯愉慷 卢羽茜 康绮云

摘要：重点介绍了以绿茶为原料提取茶多酚的实验室制法。该实验室制法在原有的金属离子沉淀法，有机溶剂直接萃取法的基础上进行改进，使之成为一个适合实验教学的实验． 关键词：茶多酚；提浸；实验室制法；

茶多酚(Tea Polyphenols，TP），是从天然植物茶叶中分离提纯的多酚类化合物的复合体，约占茶叶干重的25。其中儿茶素类在茶多酚中占比倒最大，约80% ，且抗癌防癌活性最强。儿茶素属黄烷醇类，据报道：其抗癌活性按如下次序递减；(一)表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)>(一)表儿茶素没食子酸酯(ECG)>(一)表没食子儿茶索(EGC)>(一)表儿茶索(EC)。各种儿茶索在茶多酚中所占的比倒分别为(%)[1]：EGCG 50~60，ECG 15～2O，EGClO～15，EC 4～6；它们的结构见图1。

茶多酚的提取工艺目前已有了相当的研

究，其中溶剂浸提、金属离子沉淀是研究和报道较多的提取法，近几年来还出现了一些新的方法如树脂吸附法、超临界流体萃取法、超声波浸提法及微波浸提法等。

1.传统方法回顾

1.1金属离子沉淀法

金属离子沉淀法是利用茶

茶多酚的分离提取实验改进及结果分析

冯愉慷 卢羽茜 康绮云

摘要：重点介绍了以绿茶为原料提取茶多酚的实验室制法。该实验室制法在原有的金属离子沉淀法，有机溶剂直接萃取法的基础上进行改进，使之成为一个适合实验教学的实验． 关键词：茶多酚；提浸；实验室制法；

茶多酚(Tea Polyphenols，TP），是从天然植物茶叶中分离提纯的多酚类化合物的复合体，约占茶叶干重的25。其中儿茶素类在茶多酚中占比倒最大，约80% ，且抗癌防癌活性最强。儿茶素属黄烷醇类，据报道：其抗癌活性按如下次序递减；(一)表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)>(一)表儿茶素没食子酸酯(ECG)>(一)表没食子儿茶索(EGC)>(一)表儿茶索(EC)。各种儿茶索在茶多酚中所占的比倒分别为(%)[1]：EGCG 50~60，ECG 15～2O，EGClO～15，EC 4～6；它们的结构见图1。

茶多酚的提取工艺目前已有了相当的研

究，其中溶剂浸提、金属离子沉淀是研究和报道较多的提取法，近几年来还出现了一些新的方法如树脂吸附法、超临界流体萃取法、超声波浸提法及微波浸提法等。

1.传统方法回顾

1.1金属离子沉淀法

金属离子沉淀法是利用茶