细菌的染色方法

细菌的染色方法

细菌的染色方法主要有革兰氏染色,抗酸色法和特殊染色法(包括英膜染色法,芽抱染色法,鞭毛染色法 )

1.革兰氏染色法:

1)器材:金黄色葡萄球菌,大肠杆菌,结晶紫染液, 革兰氏碘液, 0.4 %复红乙醇液,接种环,酒精灯,载玻片等。

2)方法:先制片,接着染色。

( l ) 结晶紫染液染色1分钟, 水冲洗; ( 2 ) 革兰氏碘液色1分钟; 水冲洗;

( 3 ) 0.4 %复红乙醇液染色3秒钟,水冲洗,吸纸吸干后镜检。 2.抗酸染色法:

1)器材:卡介苗与大肠杆菌和葡萄球菌的混合菌液,石炭酸复红,3 % 的盐酸酒精,碱性美兰染液,接种环,酒精灯,载玻片等。 2)先制片,接着染色。 ( l )石炭酸复红染液先沸水浴1 0分钟, 滴加2一3滴覆盖菌膜染色5分钟,水冲洗;( 2 ) 3 % 的盐酸酒精脱色3 0秒钟,水冲洗;

( 3 )碱性美兰复染3 0秒钟,水冲洗, 吸水纸吸干后镜检. 3.芽抱染色法:

1)器材:破伤风杆菌厌氧培养物,5 % 孔雀绿水溶液,0.5 % 沙黄水溶液,载玻片,酒精灯等。 2)先制片,接着染色。

( l ) 加孔雀绿染液2一3滴于小试管中,并使其与菌液混合均匀,然后将试竹放厂沸水浴的烧杯中,加热染色15分

细菌的染色方法

细菌的染色方法主要有革兰氏染色,抗酸色法和特殊染色法(包括英膜染色法,芽抱染色法,鞭毛染色法 )

1.革兰氏染色法:

1)器材:金黄色葡萄球菌,大肠杆菌,结晶紫染液, 革兰氏碘液, 0.4 %复红乙醇液,接种环,酒精灯,载玻片等。

2)方法:先制片,接着染色。

( l ) 结晶紫染液染色1分钟, 水冲洗; ( 2 ) 革兰氏碘液色1分钟; 水冲洗;

( 3 ) 0.4 %复红乙醇液染色3秒钟,水冲洗,吸纸吸干后镜检。 2.抗酸染色法:

1)器材:卡介苗与大肠杆菌和葡萄球菌的混合菌液,石炭酸复红,3 % 的盐酸酒精,碱性美兰染液,接种环,酒精灯,载玻片等。 2)先制片,接着染色。 ( l )石炭酸复红染液先沸水浴1 0分钟, 滴加2一3滴覆盖菌膜染色5分钟,水冲洗;( 2 ) 3 % 的盐酸酒精脱色3 0秒钟,水冲洗;

( 3 )碱性美兰复染3 0秒钟,水冲洗, 吸水纸吸干后镜检. 3.芽抱染色法:

1)器材:破伤风杆菌厌氧培养物,5 % 孔雀绿水溶液,0.5 % 沙黄水溶液,载玻片,酒精灯等。 2)先制片,接着染色。

( l ) 加孔雀绿染液2一3滴于小试管中,并使其与菌液混合均匀,然后将试竹放厂沸水浴的烧杯中,加热染色15分

实验三 细菌的简单染色与形态观察

一、目的要求：

1. 了解并掌握细菌简单染色的机理及技术； 2. 学会用油镜观察细菌细胞的形态。 二、实验材料： 1. 菌种：枯草杆菌Bacillus subtilis、大肠杆菌Escherichia coli、金黄色葡萄球菌StapHyloccus

aureus等培养好的细菌斜面； 2. 染料：结晶紫

3. 其他：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、无菌水、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸。 三、基本原理：

染色是细菌学上一个重要而基本的操作技术。因细菌细胞小而且透明，当把细菌悬浮于水滴内，用光学显微镜时，由于菌体和背景没有显著的明暗差，因而难以看清它们的形态，更不易识别其结构，所以，用普通光学显微镜观察细菌时，往往要先将细菌进行染色，借助于颜色的反衬作用，可以更清楚地观察到细菌的形状及其细胞结构。

用于微生物染色的染料是一类苯环上带有发色基团和助色基团的有机化合物。发色基团赋予化合物的颜色特征，助色基团则给予化合物能够成盐的性质。染料通常都是盐，分酸性染料和碱性染料两大类。在微生物染色中，碱性染料较常用，如常用的美蓝、结晶紫、碱性复红、沙黄、孔雀绿等都属于碱性染料。

简单染色是利用单一染料对细菌进行染色的一种

实验三 细菌的简单染色与形态观察

一、目的要求：

1. 了解并掌握细菌简单染色的机理及技术； 2. 学会用油镜观察细菌细胞的形态。 二、实验材料： 1. 菌种：枯草杆菌Bacillus subtilis、大肠杆菌Escherichia coli、金黄色葡萄球菌StapHyloccus

aureus等培养好的细菌斜面； 2. 染料：结晶紫

3. 其他：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、无菌水、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸。 三、基本原理：

染色是细菌学上一个重要而基本的操作技术。因细菌细胞小而且透明，当把细菌悬浮于水滴内，用光学显微镜时，由于菌体和背景没有显著的明暗差，因而难以看清它们的形态，更不易识别其结构，所以，用普通光学显微镜观察细菌时，往往要先将细菌进行染色，借助于颜色的反衬作用，可以更清楚地观察到细菌的形状及其细胞结构。

用于微生物染色的染料是一类苯环上带有发色基团和助色基团的有机化合物。发色基团赋予化合物的颜色特征，助色基团则给予化合物能够成盐的性质。染料通常都是盐，分酸性染料和碱性染料两大类。在微生物染色中，碱性染料较常用，如常用的美蓝、结晶紫、碱性复红、沙黄、孔雀绿等都属于碱性染料。

简单染色是利用单一染料对细菌进行染色的一种

实验二 细菌抹片的制备及染色

一、

提前十分钟进入实验室，抄写板述。上课，点名入座。

板述内容： 一）、目的要求

1、掌握细菌抹片的制备方法 2、掌握细菌的革兰氏染色法 二）、实验内容

1、每人做一张葡萄球菌的固体抹片，用美兰染色。

2、每人做一张大肠杆菌与葡萄球菌的混合抹片，并用革兰氏法染色。 3、油镜观察自制的玻片及真菌标本片，（烟曲霉、黄曲霉、酵母菌） 4、组织抹片，并用瑞氏染色液染色（示教） 三）作业

1、叙述细菌抹片的制备方法 2、叙述革兰氏染色的方法

3、绘出细菌形态图并注明染色方法 二、

总结上次实验作业，有两个突出问题。

1、 多数同学画的是书上的细菌图，细胞臂、荚膜清晰可见，而镜检时只能看到细菌的大致形态，如大肠杆菌是一个两端钝圆的杆状轮廓，另外，镜检时菌毛和鞭毛是不能观察到的，除非用特殊的染色方法。 2、 有的同学没有用圆规画图，图片绘制得过大或过小。 三、

实验第一部分：抹片的制备

1、 实验的目的和意义

细菌细胞微小，无色而半透明，原样直接在普通光学显微镜下观察，只能大致见到其外貌，制成抹片和染色之后，则能较清楚地显示其形态和特殊构造，也可以根据不同的染色反应，作为鉴别细菌的一种依据。 2

光合细菌的培养及应用方法

光合细菌(简称PSB)是地球上最早出现具有原始光能合成体系的原核生物，是一大类在厌氧条件下进行不放氧光合作用的细菌的总称，广泛存在于地球生物圈的各处。光合细菌在水产养殖上的应用主要有以下五个方面：作为养殖水质净化剂；作为饲料添加剂；用于鱼 、虾、贝幼体的培育；作为动物性生物饵料的饵料；防治鱼病。 一、培养工具的消毒方法

1．加热消毒法：利用高温杀死微生物的方法。

（1）直接灼烧：此法可直接把微生物烧死，灭菌彻底，但只适用于小型金属或玻璃工具的消毒。 （2）煮沸消毒：一般煮沸5～10分钟，适用于小型容器、工具的消毒。 （3）烘干箱消毒：亦称为恒温干燥箱消毒法。

2．化学药品消毒法：适用在批量培养中，大型容器、工具、玻璃钢水槽和水泥池中。 （1）酒精：浓度为70％的酒精常用于中、小型容器的消毒。用纱布蘸酒精在容器、工具的表面涂抹，10分钟后，用消毒水冲洗两次即可。

（2）高锰酸钾：按300ppm配成高锰酸钾溶液，把洗刷洁净的容器、工具放在溶液中浸泡5分钟，取出，再用消毒水冲洗2次～3次即可。 二、光合细菌的培养条件

1、 营养条件

光合细菌细胞体构成元素主要有：碳、氢、氧、氮、磷、钾、钠、镁、钙、硫和

微生实验报告

姓名：王晶晖

专业年级：2011级生物技术 学号：040312011032

实验三 细菌的芽孢染色

一、实验目的

学习细菌芽孢的染色方法原理及操作步骤。 二、实验原理

芽孢是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的休眠体，通常呈球形或椭圆形。细菌的芽孢具有厚而致密的壁，透性低不易着色，若用一般的染色法只能使菌体着色而芽孢不着色（芽孢呈无色透明状）。芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色但一旦染上色后有难以脱色这一特点而设计的。所有的芽孢染色法都基于同一个原则，除了用着色力强的染料外，还需加热，以促进芽孢染色。当染芽孢时，菌体也会着色，然后水洗，芽孢染上的颜色难以渗出，而菌体会脱色，然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽孢，容易辨认。 三、实验器材

1、菌种：培养24~36h的苏云金芽孢杆菌或者枯草芽孢杆菌。 2、染色剂和试剂：5%孔雀绿水溶液，0.5%番红水溶液。

3、器材：小试管，滴管，玻片搁架，接种环，擦镜纸，镊子，显微镜等。 四、实验方法

1、涂片：按常规方法将待检细菌制成一薄的涂片。

2、晾干固定：待涂片晾干后在酒精灯火上通过2~3次。 3、染色：

（1）加染色液：加5%孔雀绿水

细菌总蛋白的提取方法

细菌总蛋白和膜蛋白提取方法

一、从新鲜样品中提取总蛋白（简易法）

1、自配裂解液（pH 8.5-9.0）：50 mM Tris-HCl，2 mM EDTA, 100 mM NaCl，0.5% Triton X-100，调pH值至8.5-9.0备用；用前加入100 μg/ml 溶菌酶，1μl/ml 的蛋白酶抑制剂PMSF。该裂解液用量为10-50ml 裂解液/1g湿菌体。

2、将40ml 菌液在12000g，4℃下离心15分钟收集菌体，沉淀用PBS悬浮洗涤2遍，沉淀加入1ml裂解液悬浮菌体。

3、超声粉碎，采用300w，10s超声/10s间隔，超声20min，反复冻融超声3次至菌液变清或者变色。

4、1000g离心去掉大碎片，上清可直接变性后PAGE电泳检测，或者用1% SDS溶液透析后冻存。

缺点：Western blotting结果表明，疏水性跨膜蛋白提取效率有限。

二、从Trizol裂解液中分离总蛋白

1、Trizol溶解的样品研磨破碎后，加氯仿分层，2-8℃下10000g离心15min，上层水相用于RNA提取，体积约为总体积的60%。

2、用乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA。每使用1ml Trizol加入0.3ml无水乙醇混匀，室温放

1 空气细菌培养的采样方法

检测空气细菌总数的细菌培养法平板暴露法。此法简便，目前大部分医疗单位采用。

在消毒处理后，操作前进行，室内面积≤30m2对角线内、中、外处设3点，内外点布位距墙壁1m处，室内面积＞30m2设4角及中央5点，4角的布点部位距墙壁1m处。基本原理是：空气中细菌等微生物可随尘粒一起下降，在室内各采样点处放好营养琼脂平板，采样高度距地面0.8～1.5m，采样时，将平板盖打开，暴露5min或10min，盖好平板。将平板置于37℃恒温箱培养48h计算菌落数。 2 细菌数的计算方法

细菌总数（cfu/m3=4500N/A×T）

式中A=平板面积（cm2） T——平板暴露时间（min） N——平均菌落数（cfu）

这个计算公式是根据在面积100cm3的培养基表面，5min内能落下的细菌相当于10L空气中含的细菌数而推算出来的。

3 空气消毒效果和污染状况的评价

空气消毒效果的比较应在消毒前后取样进行培养，如消毒后空气中细菌数明显下降，说明消毒效果好，下面规定适用GB15982——1995规定：Ⅰ类区域细菌总数≤10cfu/m3，并且未检出致病菌为消毒合格；Ⅱ类区域细菌总数≤200cfu/m3并且未检出致病菌为消毒合格；Ⅲ类区域细

1 空气细菌培养的采样方法

检测空气细菌总数的细菌培养法平板暴露法。此法简便，目前大部分医疗单位采用。

在消毒处理后，操作前进行，室内面积≤30m2对角线内、中、外处设3点，内外点布位距墙壁1m处，室内面积＞30m2设4角及中央5点，4角的布点部位距墙壁1m处。基本原理是：空气中细菌等微生物可随尘粒一起下降，在室内各采样点处放好营养琼脂平板，采样高度距地面0.8～1.5m，采样时，将平板盖打开，暴露5min或10min，盖好平板。将平板置于37℃恒温箱培养48h计算菌落数。 2 细菌数的计算方法

细菌总数（cfu/m3=4500N/A×T）

式中A=平板面积（cm2） T——平板暴露时间（min） N——平均菌落数（cfu）

这个计算公式是根据在面积100cm3的培养基表面，5min内能落下的细菌相当于10L空气中含的细菌数而推算出来的。

3 空气消毒效果和污染状况的评价

空气消毒效果的比较应在消毒前后取样进行培养，如消毒后空气中细菌数明显下降，说明消毒效果好，下面规定适用GB15982——1995规定：Ⅰ类区域细菌总数≤10cfu/m3，并且未检出致病菌为消毒合格；Ⅱ类区域细菌总数≤200cfu/m3并且未检出致病菌为消毒合格；Ⅲ类区域细