its序列鉴定真菌的原理

北 方 民 族 大 学

实 验 论 文

题 目： 利用ITS序列鉴定真菌 学 院： 生物科学与工程学院 专 业： 生物技术 班 级： 082 姓 名： 李晓飞 李 妍 吾木尔古丽

张瑞莉 陈 波 艾克拜尔

指导老师： 刘建利

完成日期：2011年5月18日——2011年6月5日

分子生物学实验 利用ITS序列鉴定真菌

利用ITS序列鉴定真菌

李晓飞 李 妍 吾木尔古丽 张瑞莉 艾克拜尔 陈 波

（北方民族大学 生物科学与工程学院 银川 750021）

摘要：采用实验室提供的两株酵母菌，活化培养后，经基因组DNA的提取及琼脂糖凝胶电泳检测，以ITS1和ITS2为引物构成的PCR反应体系对目的DNA片段（ITS1区）进行扩增，经琼脂糖凝胶电

北 方 民 族 大 学

实 验 论 文

题 目： 利用ITS序列鉴定真菌 学 院： 生物科学与工程学院 专 业： 生物技术 班 级： 082 姓 名： 李晓飞 李 妍 吾木尔古丽

张瑞莉 陈 波 艾克拜尔

指导老师： 刘建利

完成日期：2011年5月18日——2011年6月5日

分子生物学实验 利用ITS序列鉴定真菌

利用ITS序列鉴定真菌

李晓飞 李 妍 吾木尔古丽 张瑞莉 艾克拜尔 陈 波

（北方民族大学 生物科学与工程学院 银川 750021）

摘要：采用实验室提供的两株酵母菌，活化培养后，经基因组DNA的提取及琼脂糖凝胶电泳检测，以ITS1和ITS2为引物构成的PCR反应体系对目的DNA片段（ITS1区）进行扩增，经琼脂糖凝胶电

ITS1: 5’-CCGTAGGTGAACCTGCGG-3’

ITS4: 5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’ Tm 55℃ NS17: CATGTCTAAGTTTAAGCAA NS3: GCAAGTCTGGTGCCAGCAGCC NS4: CTTCCGTCAATTCCTTTAAG NS22: AATTAAGCAGACAAATCACT NS24: AAACCTTgTTACgACTTTTA

LR0R: 5’-GTACCCGCTGAACTTAAGC-3’ LR3: 5’-CCGTGTTTCAAGACGGG

LR3R: 5’-GTCTTGAAACACGGACC (complementary to RLR3R: GGTCCGTGTTTCAAGAC) LR5: 5’-TTAAAAAGCTCGTAGTTGAAC-3’ LR7: 5’-TACTACCACCAAGATCT LR12: 5’-GACTTAGAGGCGTTCAG Lr0R/LR5: Tm 50-52℃

NL1: 5’-GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG

NL1: 5′-TGCGTTGATTACGTCCCTGC (also called V9: TGCG

ITS1: 5’-CCGTAGGTGAACCTGCGG-3’

ITS4: 5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’ Tm 55℃ NS17: CATGTCTAAGTTTAAGCAA NS3: GCAAGTCTGGTGCCAGCAGCC NS4: CTTCCGTCAATTCCTTTAAG NS22: AATTAAGCAGACAAATCACT NS24: AAACCTTgTTACgACTTTTA

LR0R: 5’-GTACCCGCTGAACTTAAGC-3’ LR3: 5’-CCGTGTTTCAAGACGGG

LR3R: 5’-GTCTTGAAACACGGACC (complementary to RLR3R: GGTCCGTGTTTCAAGAC) LR5: 5’-TTAAAAAGCTCGTAGTTGAAC-3’ LR7: 5’-TACTACCACCAAGATCT LR12: 5’-GACTTAGAGGCGTTCAG Lr0R/LR5: Tm 50-52℃

NL1: 5’-GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG

NL1: 5′-TGCGTTGATTACGTCCCTGC (also called V9: TGCG

篇一：亲子鉴定原理

1.单基因遗传

单纯由某一对等位基因控制，与环境条件等无关，称为单基因遗传特征。靠这种遗传特征的检查，发现被检查者之间有与遗传规律矛盾时，便能断然否定其亲生关系。这种遗传特征包括血型，DNA多态性、染色体多态性等。 根据基因所在的染色体把单基因遗传方式分为常染色体显性遗传(Autosomal dominant inheritance，AD)、常染色体隐性遗传(Autosomal recessive inheritance，AR)和伴性遗传(Sex—linked inheritance)。因此，把单基因遗传规律又称之为单基因孟德尔方式的遗传规律。

2.复杂遗传或多基因遗传

是由若干多基因和环境等条件共同作用后形成的，称为复杂的遗传特征。身材高矮、面貌肤色等特征均属这一类。这些只能作为亲子鉴定的参考。

3.孟德尔遗传定律

孟德尔(Mendel，1865年)在研究性状遗传时，用豌豆进行杂交试验，找出了遗传规律，称为孟德尔遗传定律，有两条重要规律，即分离律和自由组合律。 1．分离律 染色体及基因在体细胞中都是成对的，体细胞通过减数分裂形成配子时，成对的基因随着染色体彼此分离，各自进入一个配子中，每个配子只含亲代一对基因中的一个，即不同遗传性状

[目的]建立ITS2区段的秤星树及其同属几种药用植物的分子鉴别方法。[方法]以秤星树等几种药用植物为材料,采用离心柱型试剂盒提取总DNA,采用一对通用引物对ITS2区段进行PCR扩增和测序;HMMer法对测序结果进行注释得到ITS2序列;MEGA软件分析,寻找差异位点,构建系统发生树。[结果]测序后注释得到的秤星树等8种冬青属药用植物ITS2比对序列为254 bp,种间存在85个差异位点。[结论]ITS2区

安徽农业科学。 unl fA h i .Si2 1 4 ( )2 8 2 8 2 8 J ra o nu o A c.02,0 5:64— 6 6,69

责任编辑

石金友

责任校对

况玲玲

基于 IS T 2序列的秤星树等冬青属 8种药用植物的分子鉴别童家 ,赘黄琼林，新业，马张晓丽，詹若挺，徐鸿华 (广中药学药院广广 50;广中 1州医大中学，东州 1 6.州医 . 0 2 0

药大学中药资源科学与工程研究中心，教育部(省部共建 )中药资源科学重点实验室，广东广州 5 o0 ) 10 6

摘要[目的]建立 IS T 2区段的秤星树及其同属几种药用植物的分子鉴别方法。[方法]以秤星树等几种药用植物为材料，用离心柱采型试剂盒提取总 D A, N采用

龙源期刊网 http://www.qikan.com.cn

茄科植物PAL基因家族的鉴定和序列分析

作者：盖江涛 陈振玺 王鹏 来源：《热带作物学报》2015年第03期

摘 要 苯丙氨酸解氨酶（PAL，phenylalanine ammonia-lyase[EC：4.3.1.24]）是植物次生代谢尤其是苯丙烷途径的关键酶，与植物抵抗病原菌入侵密切相关，具有重要的植物生理学意义；其催化产物是辣椒素等植物天然产物的前体。采用BLASTP方法，依托全基因组数据库，获得了番茄、马铃薯、本氏烟草、辣椒等4种茄科植物及杨树、拟南芥的PAL基因家族成员共27条序列，并对其进行初步的生物信息学分析、理化性质分析及结构分析。结果表明：在进化过程中，茄科植物烟草、番茄、马铃薯和辣椒的亲缘关系较近，拟南芥、杨树与茄科植物的亲缘关系较远；酸性蛋白质占96.3%，所有蛋白均为亲水性稳定蛋白、有明显跨膜现象、无信号肽；所有PAL亚细胞定位于细胞质中，具有活性位点的蛋白占96.3%。本研究结果为进一步研究茄科植物中PAL代谢机理提供理论支持。 关键词 苯丙氨酸解氨酶；PAL；基因家族；氨基酸；茄科 中图分类号 Q949.77

抗真菌

园艺博览《现代农业科技》"$$)年("月

芦荟植物内生真菌抗真菌活性的研究

尹建雯(

（"云南省疾病预防控制中心

陈有为"徐闻(杨慧敏’

,(**++；+云南大学微生物研究所；!安徽科技学院）

摘要对从芦荟中分离出的!!株内生真菌进行抗真菌活性物质筛选结果表明：’)株芦荟内生真菌对(种或多种皮肤

致病真菌，例如毛样枝孢（*"’<#.9#&,4>?&,@+#,<$.）、紧蜜单孢枝霉（/#&>#<$-<&4>@#>9’@?4>）、皮炎单孢枝霉（/#&>#<$-<&4>等具有抑制生长作用，占供试菌株的’03!5。来自中华芦荟、元江芦荟、库拉索芦荟分离获得内生真菌的抗真菌活<$&>’?,?,<,.）

性菌株比例分别为)$5、#)5和’(3)5。提示芦荟内生真菌种群可为人类寻找新的抗病原微生物活性物质提供基础条件。

关键词中华芦荟；元江芦荟；库拉索芦荟；内生真菌；抗真菌活性

由于某些植物病原真菌侵入宿主后，在特定环境和生（"$$接入0毫升-./液体培养基，置于"!,1

16SrDNA序列在微生物的分类鉴定上的应用

摘要

随着生物技术的迅速发展，16SrDNA分析技术在微生物分类鉴定及分子检测中得到广泛应用。根据16SrDNA的保守域和高变域，可以进行种属的鉴定。16SrDNA分析技术克服了传统生物培养法的限制，操作方便，检测快，准确度高且灵敏度高，已被广泛应用到菌种鉴定、群落对比分析、群落中系统发育及种群多样性的评估，是一种客观且可信度高的分类方法。 关键词

16SrDNA 微生物 分类鉴定

传统的微生物分类是根据菌落的形态特征和生理生化特性，对菌种进行纯培养分离，然后从形态学、生理生化反应特征及免疫学特性加以鉴定。但近几十年来，传统微生物分类鉴定得到了巨大的革新，许多新技术和方法在微生物分类中得到广泛应用，使微生物分类鉴定从一般表型特征的鉴定，深化到遗传特性的鉴定。

1.微生物形态比较分类法的局限性

1.1 不能正确反映微生物形态

由于微生物菌群在进行纯培养时，不可避免地会造成菌株的富集或衰减，人为地改变了原始菌群的微生物生态构成，对研究结果造成了较大的偏差①。这样在应用上就只能局限于对简单环境下的微生物的研究，而对复杂环境下的微生物不能加以有效分析，严重影响了微生物基因

真菌毒素是一些真菌， 如曲霉属、青霉属及镰孢属， 在生长过程中产生的易引起人和动物病理变化和生理变态的次级代谢产物。研究证实， 真菌毒素可以引起人类和动物的急性或慢性中毒， 可损害机体的肝脏、肾脏、神经组织、造血组织及皮肤组织等， 部分真菌毒素已被证实具有致癌、致畸、致细胞突变的“三致” 作用。据世界粮农组织(FAO) 报告， 全球每年约有25%的农作物遭受真菌及其毒素污染， 造成的经济损失每年达数千亿美元。

几种典型的真菌毒素及其危害：

迄今发现已有300 种真菌毒素， 粮食中主要真菌毒素有黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、展青霉素、单端孢霉烯族毒素、玉米赤霉烯酮、伏马毒素等。不同种类的毒素有各自的特点及危害。

（一）黄曲霉毒素（Aflatoxin, AFT）

黄曲霉毒素（AFT）是由黄曲霉和寄生曲霉所产生的一种次生代谢物，具有很强的毒性和致癌性。AFT是一类结构相似的物质，包括B1，B2，G1，G2，M1，M2，P1，R1等十七种异构体。在紫外线的照射下可发出荧光，根据荧光颜色的不同，可以把黄曲霉毒素分为B族和G族。AFT耐热，加热到280℃是才发生裂解而破坏，所以一般的烹调加工很难将其清除。AFT在中性、酸性溶液中很稳定，在PH9-10的强碱性