酶的提取与分离纯化

酶的分离纯化

摘要：本文概述了在实验中由于酶浓度、饱和度等不同条件下对酶进行分离纯化的适用方法。酶的分离纯化有很多种方法，在纯化的工艺上有很大的不同，不同来源的酶在分离纯化中表现出不同的洗脱特性。现有酶的分离纯化方法都是依据酶和杂蛋白在性质上的差异而建立的。

关键词：酶；分离；纯化；方法

前言：酶的分离纯化工作，是酶学研究的基础。酶的纯化过程在目前来说仍是一门实验科学。一个特定酶的提纯往往需要经过多个实验的探索才能总结出一般经验规律。酶的分离纯化又与其他蛋白质的纯化过程存在很大的差异，酶的分离纯化有其自己独有的特点：一是特定酶在细胞中的含量少，二是酶通过测定活力的方法可以加以跟踪，前者给实验带来困难，后者为实验提供了捷径。 正文：

1. 酶的分离与纯化的概念[1]

酶的分离与纯化是指将酶从细胞或其他含酶材料中提取出来，再与杂质分开，从而获得符合使用目的、有一定纯度和浓度的酶制剂的过程。

酶分离纯化的一般原则： ①防止酶变性失活

1．）酶纯化一般在低温条件下进行（0~4℃）

2.）各种溶液应该用缓冲液，PH应调到使酶最稳定的PH 3.）各种溶液中还可以加入酶保护剂

②建立一个可靠和快速的测活方法 方法专一、灵敏、精确、简便、经

黄芩苷的提取和分离纯化

姓名：黄冰专业：药化学号：2111140006

黄芩中黄芩苷的提取和精制

一、实验目的

1掌握从黄芩中提取、精制黄芩苷的原理、方法及操作要点。2掌握黄芩苷的结构鉴定原理及方法。

二、实验原理

黄芩苷为一连有葡萄糖醛酸结构的黄酮化合物, 具有一定的脂溶性, 所以在提取时可以选择一定浓度的乙醇溶液作为提取液。

黄芩苷为葡萄糖醛酸苷, 具有弱酸性, 其可在碱性溶液中溶解, 形成钠盐,在提取液中加酸酸化，使黄芩苷游离析出。利用黄芩苷能溶于碱，不溶于酸的性质使之与酸性杂质分

离，进行精制。

本实验选用了60%乙醇回流提取，酸沉、碱溶、酸沉的方法进行精制，并对精制品进行了简单的定性鉴别，没有对照品，所以没做定量实验。

三、实验材料与仪器

材料：黄芩干燥根，硅胶G薄层层析板

仪器：UV2550紫外可见分光光度计（日本岛津），Spectrum 100傅立叶红外光谱仪，旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），LXJ-Ⅱ离心沉淀机（上海医用分析仪器厂），200g摇摆式高速中药粉碎机，电子天平，循环水式真空泵，抽滤装置，圆底烧瓶（500ml），水浴锅，冷凝管，索氏提取器，层析缸

试剂：2mol/L盐酸，60%乙醇，10%氢氧化钠，乙酸乙酯，甲醇，甲酸

四、实验步骤

1 黄芩苷

大豆中β淀粉酶的提取、分离纯化、测活及固定化

组员：毛耀俊 、毕蜜春、张强、陈人良、吴剑峰、罗琼、陈金德、

漆慧娟

摘要：本文通过一定的试验方法，从大豆中提取β淀粉酶，并进行分离纯化、测活以及酶的固定化，然后对结果进行分析和讨论。 关键词：大豆、β淀粉酶、分离纯化、测活、固定化

β-淀粉酶是外切型糖化酶，它作用于淀粉时，从淀粉非还原端开始水解a-1,4-糖苷键，顺次切下麦芽糖单位，遇到α-1,6键的分支点则停止不前，因此它对淀粉的水解产物是麦芽糖及大分子的β-界限糊精，该酶作用于底物时，同时发生沃尔登转位反应（Wanlden inversion），使生成的麦芽糖的由α-型转为β-型。

β-淀粉酶广布于高等植物中（如未发芽的大麦、小麦、燕麦、大豆、甘薯等）及微生物中，可耐酸。将麦芽汁调节pH值为3.6，在0℃下可使α-淀粉酶失去活力，而余下β-淀粉酶；β-淀粉酶的唯一产物是麦芽糖，不是葡萄糖。

大豆是一年生豆科植物，呈椭圆形、球形，颜色有黄色、淡绿色、黑色等，故又有黄豆、青豆、黑豆之称。大豆最常用来做各种豆制品、压豆油、炼酱油和提炼蛋白质。豆渣或磨成粗粉的大豆也常用于禽畜饲料。大豆是豆科植物中最富有营养而又易于消化的食物，是蛋白质最丰富最廉价的来

黄芩苷的提取和分离纯化

姓名：黄冰专业：药化学号：2111140006

黄芩中黄芩苷的提取和精制

一、实验目的

1掌握从黄芩中提取、精制黄芩苷的原理、方法及操作要点。2掌握黄芩苷的结构鉴定原理及方法。

二、实验原理

黄芩苷为一连有葡萄糖醛酸结构的黄酮化合物, 具有一定的脂溶性, 所以在提取时可以选择一定浓度的乙醇溶液作为提取液。

黄芩苷为葡萄糖醛酸苷, 具有弱酸性, 其可在碱性溶液中溶解, 形成钠盐,在提取液中加酸酸化，使黄芩苷游离析出。利用黄芩苷能溶于碱，不溶于酸的性质使之与酸性杂质分

离，进行精制。

本实验选用了60%乙醇回流提取，酸沉、碱溶、酸沉的方法进行精制，并对精制品进行了简单的定性鉴别，没有对照品，所以没做定量实验。

三、实验材料与仪器

材料：黄芩干燥根，硅胶G薄层层析板

仪器：UV2550紫外可见分光光度计（日本岛津），Spectrum 100傅立叶红外光谱仪，旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），LXJ-Ⅱ离心沉淀机（上海医用分析仪器厂），200g摇摆式高速中药粉碎机，电子天平，循环水式真空泵，抽滤装置，圆底烧瓶（500ml），水浴锅，冷凝管，索氏提取器，层析缸

试剂：2mol/L盐酸，60%乙醇，10%氢氧化钠，乙酸乙酯，甲醇，甲酸

四、实验步骤

1 黄芩苷

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土壤中产淀粉酶菌株的分离、纯化鉴定及高活力淀粉酶菌株的筛选

一、 实验目的

1、 掌握从土壤中分离产淀粉酶菌株的方法 2、 掌握平板法分离与纯化微生物的技术 3、 进一步熟练和掌握无菌操作技术 二、实验原理

培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同。但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所需的C源、N源、无机盐、生长因子以及水等。从混杂微生物群体中获得只含某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离纯化。平板分离法普遍适用于微生物的分离与纯化，其基本原理是选择适合于待分离微生物的生长条件，或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其它微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。

稀释涂布法或平板法时常用的分离与纯化的方法，以淀粉作为惟一碳源的培养基培养未分离细菌，能产淀粉酶的细菌能生长，且菌落周围出现透明圈（淀粉不透明，被消化后变透明），则产淀粉酶微生物被分离出来。本实验采用透明圈检验法检测培养物中是否有产淀粉酶微生物的生长。

分离得到的单个菌落还要进行性能的筛选,分为初选和复选. 三、实验材料

样品:张

植物蛋白酶提取纯化工艺

生物工程09-2班 陈福泉 学号：3090343214

一、 实验目的

1、了解植物蛋白酶常用的提取纯化方法的基本原理和基本操作； 2、掌握双水相和反胶束萃取的原理和操作步骤； 3、掌握蛋白质含量和蛋白酶酶活的检测方法 二、 实验原理

植物蛋白酶常用的提取纯化方法有缓冲盐溶液提取、初步纯化的方法有有机溶剂法、乙醇粉法、丙酮粉法、盐析法、双水相法、反胶束萃取法等

以pH6.0的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液为提取溶剂所得酶活力较高，最佳工艺为：以pH6.0磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液25℃提取2次，料液比1∶1；应用硫酸铵盐析及透析袋透析对粗酶液进行纯化，粗酶液再以60%硫酸铵盐析24h，透析袋（14000）低温透析12h，冻干；酶学性质研究表明：生姜蛋白酶以酪蛋白为底物其最适pH值为6.0，30℃保温30min，酶活稳定。 三、 实验材料 材料与试剂

新鲜生姜、酪蛋白（化学纯）、考马斯亮蓝G-250、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、无水碳酸钠、碳酸氢钠、柠檬酸、硫酸铵、丙酮等试剂均为分析纯。

0.01%（w/v）考马斯亮蓝G-250溶液：将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50mL 90%vol乙醇中，加入85%正磷酸100

土壤中产淀粉酶菌株的分离、纯化与鉴定及高活力淀粉酶菌株的筛选

一 实验目的

1．掌握土壤中分离产淀粉酶菌株的方法。 2．进一步掌握和熟练无菌操作技术。 3．掌握分离纯化微生物的方法。

4．学习和掌握高活力淀粉酶具菌株的筛选方法及原理。 二 实验原理

在土壤中从在多种可产淀粉酶的菌种，并且芽孢杆菌是不错的菌种，因此，采集土样，对土壤中的芽孢杆菌进行分离纯化，就可得到理想菌株。在菌株的初选过程中采用涂布平板法，把配好的培养基灭菌后倒成平板，再把稀释好的土样涂布到平板上，置于适宜的条件下进行培养。24h后对其进行鉴定，鉴定的方法是在培养好的菌株上滴加碘液，周围出现透明圈的为产淀粉酶的菌株，并且透明圈与菌落直径的比值越大，说明菌种越纯或菌株的生产性能越高。然后再进行复选，复选时采用平板划线法或斜面划线法，挑取的菌落为透明圈与菌落直径比值较大的，进行多步筛选就可得到较纯的菌株。枯草芽孢杆菌能产生淀粉酶，因此昆仑生化公司淀粉酶生产车间周围采集的土壤稀释，再用涂布平板法对菌株进行初步培养，在培养出的菌落周围滴淀粉溶液，对周围出现透明圈的菌落在进行平板划线培养，在地如淀粉溶液鉴定，对周围出现透明圈的菌落进行斜面划线培养，就可得到较纯的

ww内切β 葡聚糖苷酶的分离纯化及酶学性质

第25卷第2期食品与生物技术学报Vol.25　No.2　　　　　　　　　　　　　　2006年3月Mar.　2006JournalofFoodScienceandBiotechnology文章编号:167321689(2006)0220024204　

内切β2葡聚糖苷酶的分离纯化及酶学性质

孟广荣,　杨树林3,　曾亮亮,　李新柱,　蔡凤

(南京理工大学生物工程研究所,江苏南京210094)

摘　要:利用A¨KTAUPC2900快速蛋白液相色谱系统(FPLC)从黑曲霉发酵粉中分离纯化出内

切β2葡聚糖苷酶。分离纯化后的酶比活力提高了8.1倍,回收率为7.5%。经SDS2PAGE电泳分析该内切酶的相对分子质量为26400。酶学试验研究表明:该酶的最适反应温度为55℃,最适pH为4.8,Lineweaver2Burk法求得动力学参数,Km和Vmax分别为6.×1023mg/mL、2.906×1022(mL min)/mg。并确定了FPLCL时分离效

果达到最佳。

关键词:黑曲霉;纤维素酶;内切β2葡聚糖苷酶;;中图分类号:Q814.1:A

βandPropertiesofanEndo22gluc

新疆农业大学

《酶与酶工程》

目:

名: 院: 级: 号: 绩 专题讨论综述

黑曲霉纤维素酶酶学性质的研究及其分离纯化

2013 年4月

题姓学 班学成

黑曲霉纤维素酶酶学性质的研究及其分离纯化

摘要：

从我院保藏菌株中，分离纯化出一株较纯的产酶相对较高的菌株。通过在单因素实验基础上进行正交实验，对其液态产酶的发酵条件进行研究，结果显示：氮源为1%的NH4NO3，无机盐为1%的NaCl,表面活性剂为0.05%的tween-80，接种量为3.6%，水量为1:1.5，pH6.0,发酵温度28℃，复合碳源为麸皮：酵母粉：蛋白胨=4:1:1，装料量为75g(250ml三

产淀粉酶菌株的分离纯化

一、 实验目的

1. 掌握产淀粉酶菌种的分离纯化的原理和方法技术； 2. 巩固十倍稀释法。 二、 实验原理

土壤是微生物生活的大本营，是寻找有重要应用潜力的微生物主要的菌源。因此本实验选择从土壤中分离出产淀粉酶菌种，再进行纯培养。主要运用富集培养技术，稀释涂布平板法和平板划线分离法及无菌操作技术获得我们所需要的产淀粉酶菌种。

淀粉酶作用于淀粉时，打开了淀粉分子的糖苷键，从而使淀粉失去粘性，同时使其失去了与碘的显色反应能力，不再与碘结合，从而形成透明圈。产淀粉酶菌株在选择培养基上培养后，会水解淀粉形成水解圈，加碘液染色后，水解圈尤为明显。 三、 实验材料 1. 菌种：

从自然界筛选获得的淀粉酶产生菌种 2. 土壤样品：

从栽种土豆的菜园中采集土壤样品 3. 培养基：

淀粉液体培养基（50mL）： 蛋白胨 0.5g，NaCl 0.25g，牛肉膏0.25g，可溶性淀粉 0.1g，蒸溜水 50mL。

淀粉琼脂培养基 (200mL)： 蛋白胨 2g，NaCl 1g，牛肉膏 1g，可溶性淀粉 0.4g，蒸溜水 200mL，琼脂 3-4g。

牛肉膏蛋白胨培养基 (200mL)： 蛋