酵母rna的提取实验报告试剂盒

酵母RNA的提取紫外吸收法测RNA浓度实验报告

一、实验目的

1、掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法。

2、掌握紫外线（UV）吸收法测定核酸浓度的原理。 3、熟悉紫外分光光度计的使用方法。 二、实验原理

核酸是生命的最基本物质之一，广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内。对核酸的研究是更深入研究生命体的基本前提之一。研究核酸需要纯度很高的核酸，所以核酸的提取方法也就在生物学研究中相当重要。本次实验提取酵母的核糖核酸（RNA）。RNA离体后稳定性很差，含量低，所以在提取的时候就要注意防止核酸的降解和变性，防止过酸、过碱、避免剧烈搅拌，尤其重要的是防止RNA酶的作用。本实验是医药卫生领域与大工业生产的基础方法。

核酸（RNA）都是由核苷酸组成的多聚核苷酸化合物，而核苷酸是由糖、碱基和磷酸以等分子比例构成的，故测定组成核苷酸的任意一种组分即可以测定生物体内核酸的含量或者是提取出来的核酸的含量。 提取RNA的方法很多，在工业生产上常用的是稀碱法和浓盐法。前者是利用碱使细菌细胞壁溶解，是RNA释放出来，后者是在加热的条件下，利用高浓度的盐改变细胞膜的通透性，使RNA释放出来。使用浓盐法提取RNA的时候应该注意掌握温度，直接至90~100℃浸提，

E.Z.N.A. Total RNA Kit I (R6834-01 50 preps)

步骤

A． 真核细胞和组织

自己需要的材料：

β－巯基乙醇、70％乙醇（DEPC水配置）、除RNase的枪头和EP管。 材料的最佳量

想得到最佳的产量和好的Hibind RNA柱的纯化效果，选用正确的细胞和组织量是最重要的。Hibind RNA柱的最大处理量是可变的，根据细胞和组织的类型。最大的结合能力是100ug的RNA。TRK裂解缓冲液的最大裂解能力是1*107个细胞或30mg的组织。 细胞的步骤

1． 用500ul的TRK裂解缓冲液裂解细胞（≤1*107），使细胞团松散，轻轻弹EP管或者用

枪头吹旋，再用漩涡振荡混匀。

a) 使用前每1ml TRK裂解缓冲液加入20ul的β－巯基乙醇。 b) 如果是单层的组织培养细胞（成纤维细胞，内皮细胞等），可以直接在细胞培养器

里裂解细胞。完全吸去培养基后直接加TRK裂解缓冲液至细胞中。加700ul的TRK到T35细颈瓶或10cm的培养皿中，更小的培养器加500ul的TRK。将液体布满整个器皿表面，确保细胞裂解完全。将裂解产物转移至1.5mlEP管中。 c) 如果细胞是悬液培养，收集细胞（≤1,500rpm or

一、试剂盒打开后需要准备的工作

1、Proteinase K（蛋白酶K）的溶解

①取4.5ml双蒸水加入蛋白酶K粉中使其充分溶解

②将溶解好的蛋白酶K溶液分装进小离心管，每管100ul～200ul

③将分装好的Proteinase K放入-20℃冰箱中保存，使用期限为12个月 2、组织抑制剂（Inhibitor Removal buffer）的调配

加入20ml无水乙醇（absolute ethanol）颠倒混匀并在空白方框处打钩 3、洗液（wash buffer）的调配

加入80ml无水乙醇（absolute ethanol）颠倒混匀并在空白方框处打钩

二、组织DNA提取（试剂盒）

1、组织样品处理与消化

①将采集来的样品剪碎（≤0.1cm）洗净保存液。

②加入组织破解液Tissue-lysis 200ul 蛋白酶K 40ul然后放入55℃水浴锅内3

个小时使其充分消化。

2、DNA提取

①在消化好的组织样品中加入结合液binding buffer 200ul 然后放入70°水浴

锅中10分钟。

②再加异丙醇100ul 混合均匀吸取上清液放入柱体中，然后离心8000g一分钟。 ③倒掉底液，加500ul组织抑制剂Inhibitor

微生物检测试剂盒

核

酸 产品编

项目

种号 类

产品名称

方 法

规 格 价 格

SA-6131 沙门氏菌(Spp)核酸检测试剂盒

沙门氏菌 DNA

SA-6132 沙门氏菌(Spp)核酸检测试剂盒 副溶血性弧菌(VP)核酸检测试剂

SA-7051

副溶血性盒

DNA

弧菌 副溶血性弧菌(VP)核酸检测试剂

SA-7052

盒 SA-7061 霍乱弧菌(VC)核酸检测试剂盒

霍乱弧菌 DNA

SA-7062 霍乱弧菌(VC)核酸检测试剂盒 大肠杆菌(O157:H7)核酸检测试剂

SA-7071

盒

大肠杆菌 DNA

大肠杆菌(O157:H7)核酸检测试剂

SA-7072

盒

单增李斯特菌(LM)核酸检测试剂

SA-7081

单增李斯盒

DNA

特菌 单增李斯特菌(LM)核酸检测试剂

SA-7082

盒

金黄色葡萄球菌(MRSA)核酸检测

SA-7091

金黄色葡试剂盒

DNA

萄球菌 金黄色葡萄球菌(MRSA)核酸检测

SA-7092

试剂盒

口腔变形链球菌(SM)核酸检测试

SA-7111

口腔变形剂盒

DNA

链球菌 口腔变形链球菌(SM)核酸检测试

SA-7112

剂盒

幽门螺旋杆菌(HP)核酸检测试剂

SA-7121

幽门螺旋盒

DNA

杆菌 幽

实验报告

实验三 酵母RNA的提取及含量测定

一、实验目的与要求

1、了解并掌握稀碱法提取RNA的原理和方法。

2、熟悉和掌握紫外吸收法测定核酸含量原理和操作方法，

3、熟悉紫外分光光度计的基本原理和使用方法。

二、实验原理

由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也很各异。一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚法又是实验是最常用的。组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中。向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好的除去DNA和蛋白质。上述方法提取的RNA具有生物活性。工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，用这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺比较简单。浓盐法使用10%左右氯化钠溶液，90℃提取3-4h，迅速冷却，提取液经离心后, 上清液用乙醇沉淀RNA。稀碱法使用稀碱使酵母细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。

酵母含RNA达2.67-10.0%，而DNA含量仅为0.03-0.516%，为此，提取RNA多以酵母为原料。

核酸、核苷酸及其衍生物的分子结构中的嘌呤、嘧啶碱基具有共轭双健系统（-C=C一

提取RNA中所用各种试剂的作用：

1、氯仿：

氯仿是分子量比较大的有机溶剂，在提取RNA时，氯仿可以有效的使有机相和无机相迅速分离。DNA提取过程有机相中主要是酚和蛋白结合，从而使得蛋白和DNA脱离，DNA进入水相。但是在RNA的提取过程就要避免蛋白和DNA脱离，否则DNA会释放到水相。不管有酚也好，没有酚也好，氯仿本身也对蛋白有变性作用，剧烈的震荡，很容易使得DNA 的亲水基团，与水相接触。所以不要剧烈震荡。

氯仿的作用有多个方面，一是作为有机溶剂变性蛋白，使其沉淀并通过离心除去，同时也通 过变性作用抑制RNase活性；二是RNA提取试剂中通常含有苯酚（Trizol主要成分就是苯酚，很多自己配试剂提的方法也用苯酚，抽提蛋白时也会用到苯酚），苯酚微溶于水，抽提 完之后水相里有痕量的酚，如果不除去会损伤核酸，需要通过氯仿把水相里参与的苯酚抽提 掉；三是作为溶剂抽提样品中的一些脂溶性杂质（比如油脂、脂溶性色素等），起到一定除杂作用

通常氯仿里面会加少量异戊醇（1/25），减少蛋白质在变性过程中由于震荡产生的泡沫，影响后续操作。 2、

异丙醇：异丙醇的作用是通过-OH的疏水作用使得RNA 或者DNA链中的亲水基团受

生物化学实验报告

实验三酵母核糖核酸的提取及测定

一、研究背景及目的

RNA（核糖核酸）属酸性高分子化合物，是遗传信息的载体，由数量不等的核糖核苷酸通过磷酸二酯键连接而成。由于RNA在细胞内能够行使各种各样的生物功能，参与蛋白质生物合成、调控基因表达、作为核酶催化生化反应活性等，对维持生物体的正常发育有着重要作用。RNA制剂是以RNA及其衍生物为材料，经加工制成的产品，主要包括从富含RNA的生物体中的提取物、自溶物或者降解产物加工制成的各种商品。核糖核苷酸与其衍生物作为一大类RNA制剂，在生物体内有着诸多的功能，例如：ATP是细胞内的能量通用货币，cAMP作为第二信使传递胞外信号，CoⅠ、CoⅡ、CoA、FAD作为酶的辅因子在催化反应中起重要作用，UDP等作为单糖载体在糖代谢中起着重要作用等。此外，鸟苷酸（GMP）和肌苷酸（IMP）是强力助鲜剂，胞苷酸（CMP）和尿苷酸（UMP）可作为生产治疗癌症、肝炎及冠心病等药物的原料；在化妆品中加入核酸或其水解物，可促进皮肤蛋白合成，达到养护皮肤的作用；在农业上，RNA降解物具有促进作物生长增产的作用，因此RNA制剂被广泛应用于医药、食品、农业、日化、环境保护等各产业，具有广阔的商业前景，形成了一大新兴

生物化学实验报告

实验三酵母核糖核酸的提取及测定

一、研究背景及目的

RNA（核糖核酸）属酸性高分子化合物，是遗传信息的载体，由数量不等的核糖核苷酸通过磷酸二酯键连接而成。由于RNA在细胞内能够行使各种各样的生物功能，参与蛋白质生物合成、调控基因表达、作为核酶催化生化反应活性等，对维持生物体的正常发育有着重要作用。RNA制剂是以RNA及其衍生物为材料，经加工制成的产品，主要包括从富含RNA的生物体中的提取物、自溶物或者降解产物加工制成的各种商品。核糖核苷酸与其衍生物作为一大类RNA制剂，在生物体内有着诸多的功能，例如：ATP是细胞内的能量通用货币，cAMP作为第二信使传递胞外信号，CoⅠ、CoⅡ、CoA、FAD作为酶的辅因子在催化反应中起重要作用，UDP等作为单糖载体在糖代谢中起着重要作用等。此外，鸟苷酸（GMP）和肌苷酸（IMP）是强力助鲜剂，胞苷酸（CMP）和尿苷酸（UMP）可作为生产治疗癌症、肝炎及冠心病等药物的原料；在化妆品中加入核酸或其水解物，可促进皮肤蛋白合成，达到养护皮肤的作用；在农业上，RNA降解物具有促进作物生长增产的作用，因此RNA制剂被广泛应用于医药、食品、农业、日化、环境保护等各产业，具有广阔的商业前景，形成了一大新兴

产品详细说明书

小鼠IL-2定量分析酶联免疫检测试剂盒

本试剂盒仅供科研使用。用于体外定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的IL-2浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整,如有疑问请与北京博凌科为生物科技有限公司联系，我们将提供力所能及的帮助。

如您有其它需求，请登录北京博凌科为生物科技有限公司网站或致电本公司。

IL-2简介：

IL-2是一种主要由T淋巴细胞产生的多效性的细胞因子，成熟的鼠IL-2是149个氨基酸的糖蛋白，由169个氨基酸的前体蛋白通过剪切而成为成熟的蛋白。

IL-2在抗体刺激引起的不同反应阶段的T细胞，自然杀伤细胞和B细胞的细胞增殖方面起重要的作用，此外，IL-2还可调节γ干扰素、主要组织相容性抗原的表达，刺激活化的B细胞的增殖和分化，提高自然杀伤细胞的活性和抑制粒细胞/巨噬细胞的的增殖。IL-2还可诱导少胶突细胞的增殖和分化。

检测原理:

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中小鼠IL-2的浓度。小鼠IL-2捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的小鼠IL-2会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗小鼠IL-2抗体后，抗小鼠IL-2抗体与小鼠IL-2接合，形成夹心的免

基因结构和功能系列

CAT#:131039-100 低温运输，-20℃保存 即用型EMSA试剂盒 Electrophoretic Mobility Shift Assay Kit

使用手册V1.0

产品及特点 凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA-electrophoretic mobility shift assay），也称gel shift，是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通过EMSA可以研究目的蛋白和特定的DNA序列的结合情况，从而可以研究细胞内一些转录因子的激活水平。其原理如下： 本产品具有下列特点： 1. 一站式，使用方便，本试剂盒提供了进行EMSA实验的探针标记、蛋白和DNA结合以及EMSA上样液等主要试剂，使EMSA实验变得简单方便。 2. 非特异性结合低，EMSA结合缓冲液中含有poly(dI-dC)等有效成分，其中poly(dI-dC)的浓度经过优化，可以很好的消除蛋白和标记探针