sgRNA设计的例子

SgRNA设计方法

SgRNA（small guide RNA简称），是CRISPR基因敲除敲入系统中重要的组成部分，早先发现的guide RNA，由两部分组成—tracRNA和crRNA, 两部分融合表达后，即sgRNA也能很好的行使guide的功能，与cas9蛋白结合，引导cas9酶靶向基因组DNA进行剪切。

SgRNA脱靶问题一直备受关注，如何设计特异性好的靶点成为大家关注的焦点，很多实验室开发了不同的设计软件，大体原则如下：

（1）对于sgRNA的长度，一般应为20 nt左右； （2）对于sgRNA序列的碱基组成，可选3'末端含GG的sgRNA，同时sgRNA种子序列尽量避免以4个以上的T结尾，GC%含量最佳为40%~60%；

（3）sgRNA的种子序列与脱靶位点的匹配数尽可能低 （4）如果构建U6或T7启动子驱动sgRNA的表达载体，需考虑sgRNA的5' 碱基为G或GG，以提高其转录效率； （5）对于sgRNA靶向基因的结合位置，如需造成基因移码突变，需尽量靠近基因编码区的ATG下游，最好位于第一或第二外显子；

（6）检查sgRNA靶向结合位点基因组序列是否存在SNPs； （7）如采用Cas9单切口酶，设计paired-gRNA需

篇一：关于名人追逐梦想 的小故事

关于名人追逐梦想 的小故事

范仲淹“划粥割齑（jīu）”

“先天下之忧而忧，后天下之乐而乐”的范仲淹年少求学时，由于家贫，他的生活十分艰苦。每天晚上，他用糙米煮好一盆稀饭，等第二天早晨凝成冻后，用刀划成四块，早上吃二块，晚上再吃二块，这就是“划粥”。没有菜，就切一些腌菜下饭，这就是“断齑”。生活如此艰苦，但他毫无怨言，专心于自己的读书学习。“断齑划粥”的典故即由此而来。

范仲淹的艰苦生活，被当地留守官的儿子知道后，深为同情，便从家里送来了好菜好饭，范仲淹表示感谢，收下了饭菜。几天之后，留守的儿子来看范仲淹之时，看见自己送给他的饭菜还在那里，都已经坏了，大惑不解。范仲淹解释说：“您赠我好饭菜，实在感激不尽，但我平时吃稀粥惯了，并不觉得怎样苦。现在我如果贪食这些东西，吃好的食物惯了，我将来怎么办呢？”留守的儿子回家后，将范仲淹的话如实告诉了他父亲。他父亲夸奖说：“真是一个有志气的孩子，日后必定大有作为呀！”后来范仲淹终于成为宋代著名的文学家、政治家、军事家。

2、莱特兄弟的飞翔之梦

一百多年前，一位穷苦的牧羊人带着两个幼小的儿子替别人放羊为生。

有一天，他们赶着羊来到一个山坡上，一群大雁鸣叫着从他们头顶飞过，并很快消失在远方。

篇一：工作态度案例

用“服从”提升你的成功指数

我的朋友晓军是某公司部门经理，他对“服从”有着深刻的理解。他说：“上下级的关系就是命令与执行的关系。如果只有命令，没有服从命令的下属，不仅仅会让工作陷于被动，而且可能被老板解雇！”简而言之，老板需要的是服从命令的执行者，而非自我感觉良好、我

行我素的人！

大多数老板非常熟悉自己公司以及公司在市场的表现，从某种角度上讲，他们可能比基层管理者敏感一些，下达的指令往往具有前瞻性。许多人认为自己的老板是“自大狂”，殊不知由于他们眼界不宽，自己其实已经陷入偏执的怪圈！在我看来，服从命令、积极地贯彻执行老板的意志是职场中重要的能力，那些成功者，往往都是坚决的执

行者！

人生结果=思维方式×热情×能力

能力极为平凡的人，怎样才能取得不平凡的成功？下列简单的方

程式，可以解答这个问题。

人生的结果=思维方式×热情×能力。

所谓“能力”，是指人的才能、健康状况以及适应性等，基本由先天决定。“热情”是指工作热情，对工作努力的程度，这可以由自

己决定。

对“能力”和“热情”，分别可以从最低0分到最高100分做出

评价。在工作中，这两者是相乘的关系。

因此，一个人即使没有杰出的才能，但他知道自身的缺点，为了弥补不足，他比谁都努力，有燃烧般的工作热

普通话 - 轻声

轻声是指在普通话的词和句子中，有些音节因受前后音节的影响而失去了原有的声调，从而变成了一种软而轻的调子。例如：爸爸（bà·ba）、点心（diǎn·xin）等，这类词中第二个音节的声调在实际读音中变得轻软模糊，便属于轻声。

轻声在普通话中具有区分词性和区别词义的作用，如：兄弟（xiōng·di），指弟弟；兄弟（xiōng dì），指“指哥俩”。利害（lì·hai），指“厉害”、“程度很深”，是形容词或副词，如“疼得很厉害”；利害（lìhài），指益处或害处，是名词，如“你应该明白这件事的利害所在”。

轻声是由于音节读音弱化，在音高、音长等方面产生的一种音变现象，可视为特殊的变调，不是一个独立的调类。但是，轻声音节除了调值明显改变、音长变短而外，音强亦有所减弱，往往还引起了音色的某些改变，如韵母的发音变得比较含混，主要元音的舌位向舌面、央、中方向移动，不送气的清塞音、清塞擦音声母浊化等。如“哥哥”

（gē·ge）一词中，第二个音节念作轻声，其声母由清塞音变成了相对应的浊塞音，韵母由舌面、后、半高、不圆唇元音变成了舌面、央、中、中圆唇元音。

轻声的读法，一般来说是在阴平、阳平、去声后面读的调子比前一个音节要低，其调值可大致描述为短促

Hereditas (Beijing) 2015年11月, 37(11): 1125―1136 www.chinagene.cn

综 述 CRISPR/Cas9系统中sgRNA设计与脱靶效应评估

谢胜松1，张懿2，张利生1，李广磊1，赵长志1，倪攀1，赵书红1

1. 华中农业大学，农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室，武汉 430070； 2. 中国人民解放军第161医院妇产科，武汉 430010

摘要： 基于CRISPR/Cas9系统介导的第三代基因组编辑技术，已成功应用于动物、植物和微生物等诸多物种

的基因组改造。如何提高CRISPR/Cas9技术的基因组编辑效率和最大限度降低脱靶风险一直是本领域的研究热点，而使用高效且特异的sgRNA(Small guide RNA)是基因组改造成功的关键性因素之一。目前，已有多款针对CRISPR/Cas9技术的sgRNA设计和/或脱靶效应评估软件，但不同的软件各有优缺点。本文重点对16款sgRNA 设计和脱靶效应评估在线和单机版软件的特点进行了阐述，通过制定38项评估指标对不同软件进行了比较分析，最后对11种用于检测基因组编辑效率和脱靶的实验方法，以及如何筛选高效且特异的sgRNA进行了归纳总结

拉丁方实验设计例子

【篇一：拉丁方实验设计例子】

一、拉丁方格二、标准拉丁方格 三、n阶拉丁方格的个数 四、正交拉丁方格 五、拉丁方格在安排试验中的应用 六、几点说明 七、拉丁方试验的直观分析 八、拉丁方试验的方差分析 一、拉丁方格 1.定义：用 列的方阵，使每行每列中每个字母都只能出现一次， 这样的方阵叫r阶拉丁方或rr拉丁方。

2.n阶拉丁方格 二、标准拉丁方格1。定义：方格的第一行和第一列按拉丁字母 顺序排列。

44标准拉丁方有4个abcd abcd abcd abcd badc badc bcda bdac cdba cdab cdab cabd dcab dcba dabc dcba （ii）（iii） （iv） 三、n阶拉丁方格的个数 一、方法：每个拉丁方格可用标准拉丁方格 对行号或列号随机化排列方法得到其它符 合要求的拉丁方格 二、操作： 1.选中一个标准拉丁方格，编上行号或列号 2.固定行号，列号用不同排列得到。有n!种 3.固定第二步得到的n!个方格的列号及第一 行行号其它行用不同排列生成(n-1)!方格 三、n阶拉丁方格的个数 4.计算总数s (n-1)!k为标准拉丁方格个数 三、实例： 3!=576三、3阶拉丁方格的个数:

受贿的典型例子

【篇一：受贿的典型例子】

这是一道待解决的难题您的回答被采纳后将获得系统奖励20（财富值+经验值）+难题奖励20（财富值+经验值）

【篇二：受贿的典型例子】

作为全国第一个因腐败案“落马”的在任省级组织部部长，中共江苏省委原常委、组织部部长徐国健在江苏乃至全国都引起了不小的震动。

２００５年１２月３０日，根据最高人民法院的指定，徐国健涉嫌受贿案由福建省厦门市中级人民法院审理。２００６年１月１９日，厦门市中级人民法院以受贿罪判处被告人徐国健死刑，缓期两年执行，剥夺政治权利终身，并处没收个人全部财产。

２００４年５月３０日，徐国健作为江苏省委常委、组织部部长最后一次公开亮相。当天，中共江苏省委第十届委员会第七次全体会议在南京召开，徐国健出现在大会主席台上。６月４日，徐国健原计划列席一个会议，但会议开幕后，他的秘书却怎么也联系不上他。６月５日，中共江苏省委向全省各市发布了徐国健被中央纪律检查委员会“双规”的内部通知。６月３０日，经中共中央批准，徐国健的中共江苏省委常委、委员职务被免去。 案发交通厅

徐国健1992年任中共江苏盐城市委书记，1995年任江苏省委组织部部长。2004年被双规时，徐国健已年届六旬。

徐国健的落网与江苏省交通厅

顺序结构程序设计

1、已知三角形的底边为20，高为10，求其面积。 main() {float a,h,s; a=20;

h=10;

s=1.0/2*a*h; /*1.0/2不能写作1/2*/ printf(\}

2、从键盘输入三角形的底边及高的长度，求其面积。 main() {float a,h,s;

scanf(\

s=1.0/2*a*h; /*1.0/2不能写作1/2*/ printf(\}

3、已知圆的半径为10，求圆的面积。 解法1：

#define PI 3.14159 main() {float r,s;

r=10; s=PI*r*r;

printf(\}

解法2：

#include #define PI 3.14159 main() {float r,s; r=10;

s=PI*pow(r,2); printf(\}

4、从键盘输入圆的半径值，求圆的面积。 #define PI 3.14159 main() {float r,s;

scanf(\ s=PI*r*r;

printf(\

}

5、从键盘输入球体的半径，求其体积和表面积。 解法1：

#define PI 3.1

篇一：欣赏他人的文章也是一种美

不想写东西时，一个人喜欢在杂文、散文、现代诗，这几个栏目里走走、转转、看看，看到美文、看到写出自己心声的文章就跟上一贴。尤其看到美好的小诗，能引起心中的共鸣，心脏就跳得快点，心情就波动会，稍平静了继续“走”，有时稍不留意，时间就过去几个小时，真是不用买票就到处游呀、很惬意。

每个栏目每天都有好文、好诗，有时进入他人写的文章，欣赏他人用朴实的话语叙述出动人的故事，心中有一种共鸣，自己写不出来，他人能表达出来，这也是一种美的享受。

昨天进入一个编辑的文集，点开一看，那么多“红”飘在上面，真的很羡慕，我认真看着每一首诗、每一篇文章，人家确实文笔细腻，同样要表达的内容，所用的词不一样，所用的手法不一样，所以人家的新颖，人家的耐人回味。

篇二：《欣赏他人》教学设计

欣赏他人

【活动理念】

在积极心理学中，欣赏美是24种优秀品质之一，是指能够对美的敬畏、欣赏和领会：在生命中的一切一切，从大自然、艺术以至日常生活的体验，都可以注意到和欣赏到美丽、优秀和富有技巧之处。

小学三年级的学生正处于初步形成人生观和世界观的关键期。心理学研究发现在3-5年级中，随着小学生年级的升高，学生对学习的重视和学习压力增加，在竞争与合作的情境中，学生的嫉妒心有所

篇一：团队合作故事

团队合作故事

1．美国加利福尼亚大学的学者做了这样一个实验：把6只猴子分别关在3

间空房子里，每间2只，房子里分别放着一定数量的食物，但放的位置高度不一

样。第一间房子的食物就放在地上，第二间房子的食物分别从易到难悬挂在不同

高度的适当位置上，第三间房子的食物悬挂在房顶。

数日后，他们发现第一间房子的猴子一死一伤，伤的缺了耳朵断了腿，奄奄

一息。第三间房子的猴子也死了。只有第二间房子的猴子活的好好的。

究其原因，第一间房子的猴子一进房间就看到了地上的食物，于是，为了争

夺唾手可得的食物而大动干戈，结果伤的伤，死的死。 第三间房子的猴子虽做了努力，但食物太高，难度过大，够不着，被活活饿死了。

只有第二间房子的两只猴子先是凭着自己的本能蹦跳取食。最后，随着悬挂食物

的高度增加，难度增大，两只猴子只有协作才能取得食物。于是，一只猴子托起

另一只猴子跳起取食。这样，每天都能取得够吃的食物，很好的活了下来。

2. 黑熊和棕熊喜食蜂蜜，都以养蜂为生。它们各有一个蜂箱，养着同样多

的蜜蜂。有一天它们决定比赛看谁的蜜蜂产的蜜多。

黑熊想，蜜的产量取决于蜜蜂每天对花的“访问量”。于是它买来了一套昂贵

的测量蜜蜂访问量的绩效管理系统。同时，黑熊还设立了奖项，奖励访问量最高