细胞培养注意事项

细胞冷冻保存方法、注意事项

1、欲冷冻保存之细胞应在生长良好(log phase) 且存活率高之状态，约为80 – 90 ％致密度。

2、冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质，例如hybridoma 应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。

3、注意冷冻保护剂之品质。DMSO 应为试剂级等级，无菌且无色(以0.22 micron FGLP Telflon 过滤或是直接购买无菌产品，

如Sigma D-2650)，以5~10 ml 小体积分装，4 oC 避光保存，勿作多次解冻。Glycerol 亦应为试剂级等级，以高压蒸汽灭菌后避光保存。在开启后一年内使用，因长期储存后对细胞会有毒性。 4、冷冻保存之细胞浓度：

（1）normal human fibroblast: 1~3 x 106 cells/ml 。

（2）hybridoma: 1~3 x 106 cells/ml，细胞浓度不要太高，某些hybridoma 会因冷冻浓度太高而在解冻24 小时后死去。

（3）adherent tumor lines: 5~7 x 106，依细胞种类而异。Adenocarcinoma 解冻后须较高之浓度，而HeLa 只需1-3 x 106 cell

细胞培养

相关疾病：

每天对待细胞比孝敬爹妈还用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丢了 ，培养细胞时有哪些惨痛经验教训可以分享呢?

早走早脱身，从此专注黑生物

1. 严格无菌操作，多喷喷酒精，要是对灭菌的东西不放心，自己包自己送自己烘干。

2. 不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套。

3. 有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测。

4. 水浴锅很脏，生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏，勤换 (灭菌水加进去)。

5. 晚上离开的时候最好给细胞房照紫外，超净台是用完就开。

6. 最好的是同一时间就你一个人在用细胞房在养细胞。

非科班出身经验分享

1. 别怕浪费。枪头什么的只要有可能污染就换，如果用酒精灯就什么都稍微烤一下，别直接放到火上，离一段距离。

2. 动作要既轻柔又有力。动作太重会有一堆一堆的气泡，动作太轻就吹不下来... 刚开始的时候吹细胞太痛苦了，稍微一下就起泡。后来就是吹的时候枪里的培养基不要一次全都压出来，留一点，枪的最头部尽量深的在液面以下。

3. 离开过操作台的东西再进操作台之前一定要用酒精喷一遍，包括一切实验耗材、仪器、以及你带着手套的手。

4. 实验结束后对实验台的消毒。紫外什么的，用前用后都照个 30 分钟。

5.

AEP对LPS诱导的Raw264.7细胞炎症模型抗炎实验

一、试剂与仪器 （一）细胞系 RAW264.7。 （二）试剂 胎牛血清

DMEM HyClone，美国 10000 U/mL 青霉素/链霉素Gibco，美国

DMSO Sigma，美国 lipopolsaccharide Sigma，美国 甲基四唑蓝(MTT) Sigma，美国 对氨基苯磺酸 Sigma，美国 N-α-萘乙二胺 Sigma，美国 （三）仪器 超净台 酶标仪

CO2恒温细胞培养箱 显微镜 离心机

（四）供试品配置

LPS 溶液配置：称取 LPS 粉末 5 mg，溶于 1 mL DMSO 中，得 5 mg/mL 母液。用时将母液用培养基稀释至 2 μg/mL（DMSO＜0.1%）。

MTT 溶液配置：称取 MTT 50 mg，溶于 10 mL PBS

中科华氏代理的产品：胚胎多潜能干细胞HS系列：HS-ET-PSC-A,B,C,D 型号 内容物说明 为复合型细胞混悬液，其中包含了胚胎多潜能干细胞HS-ET-PSC-A 及胚胎神经干细胞（ZK-ET-EMM-Sub001）三种干细胞复合制剂，干移植高浓度干细胞，可迅速改善细胞数量为20000万单位。 为复合型细胞混悬液，其中包含了胚胎多潜能干细胞主要针对亚健康体征比较明显，（ZK-ET-PSC-Sub001）、胚胎造血干细胞（ZK-ET-APB-Sub001）以HS-ET-PSC-B 及胚胎神经干细胞（ZK-ET-EMM-Sub001）三种干细胞复合制剂，干或有神经性损失的人群使用。 细胞数量为15000万单位。 为复合型细胞混悬液，其中包含了胚胎多潜能干细胞HS-ET-PSC-C 主要针对亚健康体征显现，出现并伴有神经系统疾病的老年人，患者状态。 功效 主要针对亚健康状况比较严重，（ZK-ET-PSC-Sub001）、胚胎造血干细胞（ZK-ET-APB-Sub001）以处于极度临病状态，大剂量一次（ZK-ET-PSC-Sub001）、胚胎造血干细胞（ZK-ET-APB-Sub001）两身体机能缺陷，免疫力低下人群种干细胞复合制剂，干细胞数量

——从最基础的地方教起,一步一步详细介绍细胞培养技术,非常好的开门教程

细胞培养从头学

——从最基础的地方教起，一步一步详细介绍细胞培养技术，非常好的开门教程

常用设备

准备室的设备：

单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。

培养室的设备：

液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、CO2孵箱（孵育培养物）、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱（放置serum和培养用液）。

无菌操作

无菌室的灭菌：

1.定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5％过氧乙酸擦拭。

2.CO2孵箱（培养箱）灭菌：先用3‰新洁尔灭擦拭，然后用75％酒精擦拭或者0.5％过氧乙酸，再用紫外灯照射

3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟

4.实验后灭菌：用75％酒精（3‰新洁尔

资源二室四平地区二类调查注意事项

1、外业前，各组组长负责检查各项资料及工作程序准备是否齐全。各单位要与

相临单位进行接图，防止外业出现错、漏。

2、应充分收集利用局方掌握的与本次调查相关的各种资料和信息，对调查单位的情况进行充分的了解，保证工作的顺利开展。

3、样地除落入大片耕地外，其它都应现地落实。改设样地的GPS坐标值一般应为“00”点。样地地类是按中心点小班地类确定，当样地落在小班边缘时要注意地类的确定。

4、样地应进行有林地成数计算，计算过程可记录在样地最后一页（即样地位置图的背面），精确到0.1。

5、当一个乡镇内含有多个国营林场时，要注意区分。

6、各级被调查单位驻址、非林地小班的四旁树、新修建的主要道路和水渠等，调查时不要漏。部分道路和渠在卫片上分辨不清的，要现地落实，并及时修改线图。

7、林带不要含跨公路、铁路、水渠等扣面积的非林地线性小班。

8、明确小班因子借用条件。林带小班借用因子后，林带宽度仍需实测。借用的小班号在备注栏注明。

9、做样圆时，严格用皮尺实测样木距离，禁止目测。

10、能使用PDA调绘的，要注意原始数据（包括小班、样圆、样带、角规、踩点

数据）的备份，注意严格按程序要求的步骤操作，避免因操作失误引起错误。

鸡胚培养

第一节 鸡胚接种

一、鸡胚的结构

鸡胚是正在发育的活的机体，组织分化程度低，细胞代谢旺盛，适于许多人

类和动物病毒的生长增殖，是常用的病毒分离培养方法之一（衣原体、立克次体的分离亦用鸡胚）。目前，鸡胚在正粘病毒、副粘病毒、痘病毒、疱疹病毒及脑炎病毒，尤其在禽类病毒的研究上应用较多。可用于病毒的分离、鉴定，抗原和疫苗制备，以及病毒性质的研究等。虽然随着组织培养技术的不断发展，不少病毒已不再用鸡胚来分离培养，但对某些病毒来说，鸡胚仍是一种不可缺少的培养手段。鸡胚培养的优点是，来源充足，价格低廉，操作简单，无需特殊设备或条件，易感病毒谱较广，对接种的病毒不产生抗体等。当然，鸡胚培养也有其缺点，即除痘斑和鸡胚死亡是特异性感染指征外，多需用第二试验系统来测定病毒存在与否；非 SPF 鸡胚，亦可能含有对某些家禽病毒的母源抗体，甚至还可能带有鸡白痢沙门氏菌、霉形体、鸡白血病等病毒。因此，用鸡胚分离培养病毒时，必须考虑这些问题。原则上应使用非免疫蛋来孵鸡胚，最好用 SPF 鸡胚。

一般说来，孵育至 8-14 天的鸡胚最有利于病毒的生长，因为此阶段鸡胚发

育日趋完善，各种脏器均已形成，已能经受接种物的适当刺激，同时胚胎细胞幼嫩，骨胳不健全，还未长出羽毛，很利于

资源二室四平地区二类调查注意事项

1、外业前，各组组长负责检查各项资料及工作程序准备是否齐全。各单位要与

相临单位进行接图，防止外业出现错、漏。

2、应充分收集利用局方掌握的与本次调查相关的各种资料和信息，对调查单位的情况进行充分的了解，保证工作的顺利开展。

3、样地除落入大片耕地外，其它都应现地落实。改设样地的GPS坐标值一般应为“00”点。样地地类是按中心点小班地类确定，当样地落在小班边缘时要注意地类的确定。

4、样地应进行有林地成数计算，计算过程可记录在样地最后一页（即样地位置图的背面），精确到0.1。

5、当一个乡镇内含有多个国营林场时，要注意区分。

6、各级被调查单位驻址、非林地小班的四旁树、新修建的主要道路和水渠等，调查时不要漏。部分道路和渠在卫片上分辨不清的，要现地落实，并及时修改线图。

7、林带不要含跨公路、铁路、水渠等扣面积的非林地线性小班。

8、明确小班因子借用条件。林带小班借用因子后，林带宽度仍需实测。借用的小班号在备注栏注明。

9、做样圆时，严格用皮尺实测样木距离，禁止目测。

10、能使用PDA调绘的，要注意原始数据（包括小班、样圆、样带、角规、踩点

数据）的备份，注意严格按程序要求的步骤操作，避免因操作失误引起错误。

美国旅游注意事项-1

特别注意：美国禁止携带打火机入境，美国交通部将打火机列入危险品，并禁

止将打火机装入经过安检的行李中。美国运输安全管理局将处理所有带到安检点的打火机。美国运输安全管理局强烈奉劝乘客在赶往机场前，仔细详尽地检查其随身行李和托运行李中是否携带了这些违禁物品。

一.出境须知：

1. 客人在出发前往机场前，请务必仔细检查护照、签证、机票（必须有确切的

回程日期）、邀请函、出境卡等一切出境证件、资料。上述物品请随身携带，切勿放于行李箱内； 2. 如在机场领取，请仔细检查一资料上的姓名是否正确，并妥善保管上述物品。 3. 携带的可拆卸变焦镜头相机、数码相机、录像机、笔记本电脑等请务必在中

国海关办理出关申报手续，并保管好申报单，手机等小件物品不用申报。如对带出物品拿不准是否应申报时，请向海关咨询。

4. 按照现行规定，每位客人出境时可携带5000美元或等值外币。

二.搭乘国际航班须知：

1. 旅行团机票属于团体机票，按照航空公司规定团队机票不能退，不能改、不能换。

2. 行李托运：免费托运两件行李（一件行李的三边之和在158厘米以内，两件

行李的三边之和不超过273厘米，每件行李的重量不超过20公斤）。乘客携带的利器，如小刀、指甲刀等请放在

雅思考生注意事项

考生必须

? 在报名时提供身份证件（护照或者身份证）。该身份证件信息需包括证件号码、持证人签名、生日及照片。请参考《中国地区雅思考生须知》内关于身份证件的要求，在境外参加考试的考生必须出示护照。

? 在考试当日出示一张近期护照标准尺寸照片。 相片要求如下 –彩色照片 –在六个月内拍摄

–背景为白色，可以清楚显示考生全貌 –照片无污损 –对焦清晰

–由专业照片冲印店打印 –显示考生头部及肩部 –考生正面直视镜头 –表情自然 –嘴唇闭合

–眼睛睁开，清楚可见 –不戴眼镜 –照片无阴影

–面部无遮挡物，露出眼睛，耳朵和嘴唇 –在照片背面注明姓名及考号

? 如果在考试日期前考生的报名证件有所变更，请立即联系英国文化协会(在中国作为英国使/领馆文化教育处开展工作)考试部，否则考生将被取消考试资格，并不得转考、退考或退费 ? 在考试当日出示与报名时一致的身份证件，否则考生将被取消考试资格和考试成绩，并不得转

考、退考或退费。

? 准时到达考点，迟到考生将： – 无法进入考场 – 无法参加任何考试环节 – 不得转考、退考或退费

? 将携带的个人物品放置在考试教室以外，以下物品不得带入考试教室