293t细胞培养基

Hela细胞传代培养操作步骤

1．观察培养基是否正常，细胞状态如何，细胞密度如何，决定是否传代。观察时拧紧盖子。 2．加热PBS、versene、培养基，(提前做好) 瓶子不要倒着放，不要让液体接触到瓶塞。

3．打开超净台（先开风机，后开照明），用75%乙醇清洁台面，点燃酒精灯。不要把废液缸拿出去倒，如果废液太多，可以用其他容器先装废液。取小离心管一个，置于架子上。

4．取尖吸管、吸量管各一支，放置在专用的架上。放置的方式，注意吸管、吸量管前端都不要与架子接触。 5．取待传代的细胞。打开versene，用酒精灯外焰烧。烧吸管时距离酒精灯心远些，不要把渣滓带进去。把试剂拿入台子的时候，尽量平稳，不要让试剂碰到瓶口。

6．用吸量管吸取旧的培养基，置离心管中，吸量管加入versene，然后将versene瓶收起来。（加versene主要是为了将旧培养基洗去）。在离心管中间部分将液体加入。吸液体和加液体时都不要对着细胞。 7．打开胰酶，然后将versene弃掉。换新管，用尖吸管吸取适量胰酶加入。加胰酶后，尽快放平，使细胞消化时间一致。

8．将细胞放入37度孵箱。放孵箱2min, 收胰酶，打开PBS. 之后拿出来镜下随时观察。使用二次消化法，去除容器中

AEP对LPS诱导的Raw264.7细胞炎症模型抗炎实验

一、试剂与仪器 （一）细胞系 RAW264.7。 （二）试剂 胎牛血清

DMEM HyClone，美国 10000 U/mL 青霉素/链霉素Gibco，美国

DMSO Sigma，美国 lipopolsaccharide Sigma，美国 甲基四唑蓝(MTT) Sigma，美国 对氨基苯磺酸 Sigma，美国 N-α-萘乙二胺 Sigma，美国 （三）仪器 超净台 酶标仪

CO2恒温细胞培养箱 显微镜 离心机

（四）供试品配置

LPS 溶液配置：称取 LPS 粉末 5 mg，溶于 1 mL DMSO 中，得 5 mg/mL 母液。用时将母液用培养基稀释至 2 μg/mL（DMSO＜0.1%）。

MTT 溶液配置：称取 MTT 50 mg，溶于 10 mL PBS

实验室sop

Car-T细胞培养标准操作流程

1 目的：保证Car-T细胞制备和培养符合要求。

2 范围：适用于符合实验的要求患者外周血制备和培养

3 责任人：实验员人、临床相关人员。

4 内容

4.1耗材：50ml离心管，10ml移液管，5ml移液管，75cm2培养瓶，150 cm2培养瓶，EP管，1.8ml冻存管

4.2试剂：X-VIVO 15TM，PBS缓冲液，75%医用酒精，人淋巴细胞分离液，CD3/CD28免疫磁珠，IL-2，注射用人血白蛋白。

4.3环境：

4.3.1外周血分离，培养应在恒温恒湿的万级层流室内进行，开放操作必须在百级生物安全柜内进行。

4.3.2实验人员应提前对净化室和生物安全柜进行杀菌消毒，紫外线照射时间 不少于30min，消毒消毒后，净化空调开启时间不少于30min，生物安全柜运行稳定后方可操作。

4.4操作：

4.4.1采集接收外周血

4.4.1.1患者符合治疗方案，各项检测符合要求，采集患者外周血60-80ml。

4.4.1.2接收外周血并填写《外周血采集交接记录》，核对外周血患者相关信息，及相应检测报告，报告由医院提供，至少包括：HBsAg，HCVAb，HIVAb，Anti-TP，ALT。

4.4.2操作前准备

4.4.2.1净化室，生

欢迎阅读细胞培养基质量标准及检验方法

中国医药生物技术协会

二0一一年四月

编写说明

一、根据中国医药生物技术协会2010年9月20日组织召开的《动物细胞培养基生产管理

称取每升标示量的实验室样品，置于1000ml烧杯中，加水950ml，搅拌至溶解，补加水至1000ml,搅拌均匀。按中华人民共和国药典2010年版三部附录ⅤA进行。

2.3干燥减量的测定

按中华人民共和国药典2010年版三部附录ⅦL干燥失重测定法进行。

2.4渗透压的测定

欢迎阅读

称取每升标示量的实验室样品，置于1000ml烧杯中，加水950ml，搅拌至溶解，补加水至1000ml,搅拌均匀。按中华人民共和国药典2010年版三部附录ⅤH渗透压摩尔浓度测定法进行。

取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的5%。

2.5细菌内毒素的测定

按中华人民共和国药典2010年版三部附录ⅫE细菌内毒素检查法中的凝胶法进行。

2.6

2.7

2.7.1

72h，养

；

，混

150代。

4)细胞培养液：按产品使用说明书要求配制；

3)胰蛋白酶溶液：称取胰蛋白酶（1:250）2.5g，精确至0.01g，加1000ml平衡盐溶液，混匀、测pH值，用1mol/LNaOH或1mol/L

欢迎阅读细胞培养基质量标准及检验方法

中国医药生物技术协会

二0一一年四月

编写说明

一、根据中国医药生物技术协会2010年9月20日组织召开的《动物细胞培养基生产管理

称取每升标示量的实验室样品，置于1000ml烧杯中，加水950ml，搅拌至溶解，补加水至1000ml,搅拌均匀。按中华人民共和国药典2010年版三部附录ⅤA进行。

2.3干燥减量的测定

按中华人民共和国药典2010年版三部附录ⅦL干燥失重测定法进行。

2.4渗透压的测定

欢迎阅读

称取每升标示量的实验室样品，置于1000ml烧杯中，加水950ml，搅拌至溶解，补加水至1000ml,搅拌均匀。按中华人民共和国药典2010年版三部附录ⅤH渗透压摩尔浓度测定法进行。

取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的5%。

2.5细菌内毒素的测定

按中华人民共和国药典2010年版三部附录ⅫE细菌内毒素检查法中的凝胶法进行。

2.6

2.7

2.7.1

72h，养

；

，混

150代。

4)细胞培养液：按产品使用说明书要求配制；

3)胰蛋白酶溶液：称取胰蛋白酶（1:250）2.5g，精确至0.01g，加1000ml平衡盐溶液，混匀、测pH值，用1mol/LNaOH或1mol/L

DMEM是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，是在MEM培养基的基础上研制的。分为高糖型（低于4500mg/L）和低糖型(低于1000mg/L)。高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长，适于生长较快、附着较困难肿瘤细胞等。

基本简介

DMEM是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，是在MEM培养基的基础上研制的。与MEM比较增加了各种成分用量，同时又分为高糖型（低于4500mg/L）和低糖型(低于1000mg/L)。高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长，适于生长较快、附着较困难肿瘤细胞等。

主要特点

（1）氨基酸含量为依格尔培养基的2倍，且含有非必需氨基酸，如甘氨酸等； （2）维生素含量为依格尔培养基的4倍； （3）含有糖酵解途径中的重要物质——丙酮酸； （4）含有微量的铁离子。

主要成分

DMEM(A) 细胞培养基（粉末型）成分

序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 化合物名称 无水氯化钙 .2H 2 O 硝酸铁 .9H 2 O 氯化钾 无水硫酸镁 氯化钠 无水磷酸二氢钠 丁二酸 丁二酸钠 L-盐酸精氨酸 L-盐酸胱氨酸 甘氨酸 L-盐酸组氨酸 L-异亮氨酸 L-亮氨酸 含量 (mg/L) 265.00

DMEM是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，是在MEM培养基的基础上研制的。分为高糖型（低于4500mg/L）和低糖型(低于1000mg/L)。高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长，适于生长较快、附着较困难肿瘤细胞等。

基本简介

DMEM是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，是在MEM培养基的基础上研制的。与MEM比较增加了各种成分用量，同时又分为高糖型（低于4500mg/L）和低糖型(低于1000mg/L)。高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长，适于生长较快、附着较困难肿瘤细胞等。

主要特点

（1）氨基酸含量为依格尔培养基的2倍，且含有非必需氨基酸，如甘氨酸等； （2）维生素含量为依格尔培养基的4倍； （3）含有糖酵解途径中的重要物质——丙酮酸； （4）含有微量的铁离子。

主要成分

DMEM(A) 细胞培养基（粉末型）成分

序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 化合物名称 无水氯化钙 .2H 2 O 硝酸铁 .9H 2 O 氯化钾 无水硫酸镁 氯化钠 无水磷酸二氢钠 丁二酸 丁二酸钠 L-盐酸精氨酸 L-盐酸胱氨酸 甘氨酸 L-盐酸组氨酸 L-异亮氨酸 L-亮氨酸 含量 (mg/L) 265.00

麦康凯琼脂

麦康凯可能是世界上常用的一种鉴别培养基，它主要通过乳糖发酵鉴别肠道致病菌，还能抑制革兰氏阳性菌生长，发酵乳糖的细菌能使培养基变红，这是因为细菌发酵乳糖产酸而使培养基的PH值变成酸性的。不发酵乳糖的细菌没有颜色的变化。

麦康凯抑制阳性菌的生长，是因为其中加了结晶紫。 MACCONKEY AGAR

MacConkey agar is probably the most popular solid differential medium in the world. It is mainly used in identification of lactose fermenting, Gram-negative enteric pathogens and for inhibiting growth of Gram-positive organisms. Bacterial colonies that can ferment lactose turn the medium red. This red color is due to the pH indicators response to the acidic environment cre

——从最基础的地方教起,一步一步详细介绍细胞培养技术,非常好的开门教程

细胞培养从头学

——从最基础的地方教起，一步一步详细介绍细胞培养技术，非常好的开门教程

常用设备

准备室的设备：

单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。

培养室的设备：

液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、CO2孵箱（孵育培养物）、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱（放置serum和培养用液）。

无菌操作

无菌室的灭菌：

1.定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5％过氧乙酸擦拭。

2.CO2孵箱（培养箱）灭菌：先用3‰新洁尔灭擦拭，然后用75％酒精擦拭或者0.5％过氧乙酸，再用紫外灯照射

3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟

4.实验后灭菌：用75％酒精（3‰新洁尔

麦康凯琼脂

麦康凯可能是世界上常用的一种鉴别培养基，它主要通过乳糖发酵鉴别肠道致病菌，还能抑制革兰氏阳性菌生长，发酵乳糖的细菌能使培养基变红，这是因为细菌发酵乳糖产酸而使培养基的PH值变成酸性的。不发酵乳糖的细菌没有颜色的变化。

麦康凯抑制阳性菌的生长，是因为其中加了结晶紫。 MACCONKEY AGAR

MacConkey agar is probably the most popular solid differential medium in the world. It is mainly used in identification of lactose fermenting, Gram-negative enteric pathogens and for inhibiting growth of Gram-positive organisms. Bacterial colonies that can ferment lactose turn the medium red. This red color is due to the pH indicators response to the acidic environment cre