大肠杆菌生化实验

大肠杆菌及其检验

大肠杆菌的生物学特性

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简介：

大肠埃希氏菌习惯称为大肠杆菌，分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属，并且大肠杆菌株ATCC 11775是该属的模式菌种。 附：肠杆菌科各属

大肠杆菌的不同菌株间DNA相关性为80%，而与同科的志贺氏菌属（除鲍氏志贺氏菌外）的DNA相关性可达80-87%。

大肠杆菌为人和动物肠道中的常居菌，一般多不致病，在一定条件下可引起肠道外感染。

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形态与染色

大小0.4～0.7×1～3um,无芽胞,大多数菌株有动力。

有普通菌毛与性菌毛，有些菌株有多糖类包膜，革兰氏阴性杆菌。 附：有动力是什么意思？请看动力试验。

革兰氏阴性杆菌是什么意思？请看革兰氏染色介绍。 大肠杆菌扫描电镜照片 大肠杆菌透射电镜照片 大肠杆菌分裂照片

最新： 大肠杆菌革兰氏染色照片

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培养特性

由于此菌合成代谢能力强，在含无机盐、胺盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。

最适生长温度为37℃，在42-44℃条件下仍能生长，生长温度范围为15-46℃。

在普通营养琼脂上生长表现3种菌落形态：

1

（1）光滑型： 菌落边缘整齐，表面有光泽、湿润、光滑、呈

大肠菌群测定的操作细则

大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。 食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。 1 设备和材料 1.1 温箱：36±1℃。 1.2 冰箱:0～4℃。

1.3 恒温水浴 :44.5±0.5℃。 1.4 天平。 1.5 显微镜。 1.6 均质器或乳钵。 1.7 平皿:直径为90mm。 1.8 试管。 1.9 吸管。

1.10 广口瓶或三角烧瓶:容量为500mL。 1.11 玻璃珠:直径约5mm。 1.12 载玻片。 1.13 酒精灯。 1.14 试管架。 2 培养基和试剂

2.1 乳糖胆盐发酵管:按GB 4789.28中4.9规定。 2.2 伊红美蓝琼脂平板:按GB 4789.28中4.25规定。

2.3 乳糖发酵管:按GB 4789.28中4.10规定。 2.4 EC 肉汤:按GB 4789.28中4.11规定。

2.5 磷酸盐缓冲稀释液:按GB 4789.28中3.22规定。 2.6 生理盐水。

篇一：实验1 大肠杆菌的培养和分离实验教学提纲

实验1 大肠杆菌的培养和分离教学提纲

实验目的

1. 进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。

2. 进行大肠杆菌的分离，用固体培养基进行细菌的划线培养。

3. 说明大肠杆菌的培养条件和操作要求的原理。

实验材料

1. 配制LB液体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，加水50mL溶解。

2. 配制LB固体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，琼脂1g，加水50mL溶解（配制LB固体培养基是用来倒平板和倒试管斜面）。

实验步骤

1. 培养基灭菌。

在两个150mL的三角瓶中分别装入50mL LB液体培养基和50mL LB固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜(一种塑料薄膜，中间有小孔的滤膜。既可以通气，又不使细菌进入。)。将培养皿用牛皮纸包好，放入高压灭菌锅中，1kg压力灭菌15min（有压力时开始计时）。 同时将需要灭菌使用的培养皿、试管、三角瓶等和所用器械（接种环、镊子等）等一块灭菌。

2. 倒平板，倒斜面。

灭菌后。待高压锅压力与大气压相同时，打开锅盖，将有培养基的三角瓶、试管、培养皿等放在灭菌后的超净工作台上。

超净工作台操作：打超净工作台的紫外

大肠杆菌培养操作规程

一、 目的及适用范围

制订本规程的目的为规范大肠杆菌总RNA的制备，保证为诊断试剂产品提供质量可控的质控品及标准品基质。本规程适用于南京实验室提取大肠杆菌总RNA的操作。依照本操作规程，每次可提前大约提取基质液原液2.7ml。

二、 常规时间安排 预计安排 步骤 耗材准备 PBS储存液配置 第一天 培养基配制 灭菌 领取菌种 菌种复苏 第二天 接种 分装培养 RNA完全提取根据需求，自行安排。

三、 培养用耗材准备

1、 锥形瓶、双层铝箔、棉绳

2、 包扎一盒1ml的枪头，50ml康宁冻存管

四、 培养基配制(早上)

培养基应现配现用，每次配置350ml，一次性使用完毕。

1、 按下表称取物资配置LB培养基到500ml锥形瓶中： 例如：配制350mlLB培养基配方如下：[配置双份] 蛋白胨 成分名称 TRYPTONE 称取质量 3.5g 钠 3.5g YEAST XTRACT 1.75g 补足350ml 氯化酵母提取物 去离子水 耗时评估 20min 40min 20min 3h 10min 9h 40min 13h 2、 用双层铝箔和棉绳对锥形瓶进行封口，摇晃锥形瓶以使各物质迅速、均匀、

完全、溶解。待灭

维普资讯

畜牧兽压杂志

第 2卷】

第3 期

20 0 2年

肉鸡大肠杆菌病的诊治姚忠会(南省文山州农业学校 .南文山云云 630 ) 60 0

中图分类号：5 . 1 8 8 3

文献标识码： B

文章编号：0 4 6 0 (0 Z 0 0 30 1 0— 7 4 Z 0 ) 30 4 1

Z0 0 1年 3月，山县城郊某鸡场 2 0文 0 0多只 3 0

糖、麦芽糖、甘露醇，三糖铁产酸产气、不产生 H:不 s,液化明胶，尿素酶阴性，不利用拘木酸盐，基质试验阳性， .试验阳性， P试验阴性。 M R. V3 3动物试验 .

日龄艾维因肉鸡发生以呼吸困难、喘鸣、下痢为主要症状的疫情，日死亡 1 0多只。经诊断为大肠杆菌病现报道如下：

1发病情况该鸡群在 3 0日龄时发病病鸡主要表现精神萎顿，畏寒，挤堆，翅下垂，呼吸困难，喘鸣，食废绝，饮部分鸡拉灰黄色或灰绿色稀便。发病后 3d开始出现死 亡 .日死亡 1每 O多只， d时间就已死亡 8 1 5 0几只，且

用 2 4h普通肉汤培养物，腔接种 5只小白鼠，腹 同时用灭菌肉汤接种 2只小白鼠作为对照，剂量均为00 . Zm]只种后 4/接 8 h内， 5只试验小白鼠均死亡，

2只对照小白鼠均健活；剖检可见死亡鼠心外膜有点

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第 2卷】

第3 期

20 0 2年

肉鸡大肠杆菌病的诊治姚忠会(南省文山州农业学校 .南文山云云 630 ) 60 0

中图分类号：5 . 1 8 8 3

文献标识码： B

文章编号：0 4 6 0 (0 Z 0 0 30 1 0— 7 4 Z 0 ) 30 4 1

Z0 0 1年 3月，山县城郊某鸡场 2 0文 0 0多只 3 0

糖、麦芽糖、甘露醇，三糖铁产酸产气、不产生 H:不 s,液化明胶，尿素酶阴性，不利用拘木酸盐，基质试验阳性， .试验阳性， P试验阴性。 M R. V3 3动物试验 .

日龄艾维因肉鸡发生以呼吸困难、喘鸣、下痢为主要症状的疫情，日死亡 1 0多只。经诊断为大肠杆菌病现报道如下：

1发病情况该鸡群在 3 0日龄时发病病鸡主要表现精神萎顿，畏寒，挤堆，翅下垂，呼吸困难，喘鸣，食废绝，饮部分鸡拉灰黄色或灰绿色稀便。发病后 3d开始出现死 亡 .日死亡 1每 O多只， d时间就已死亡 8 1 5 0几只，且

用 2 4h普通肉汤培养物，腔接种 5只小白鼠，腹 同时用灭菌肉汤接种 2只小白鼠作为对照，剂量均为00 . Zm]只种后 4/接 8 h内， 5只试验小白鼠均死亡，

2只对照小白鼠均健活；剖检可见死亡鼠心外膜有点

雏鸡大肠杆菌病的诊治

一、流行病学调查

2000年11月，某养鸡场从外地某孵化场购入雏鸡12000只，网上育雏。1日龄时接种马立克氏病疫苗，7日龄接种鸡新城疫Ⅰ系弱毒疫苗。育雏舍用百毒杀消毒，饲喂自配混合饲料，并在饲料中拌入0.02%呋喃唑酮，并用0.02%高锰酸钾饮水。10日龄时，雏鸡开始发病，并出现死亡，至15日龄时，共发病4230只，死亡1458只，发病率为32.3%，死亡率为12.2%。

二、临诊症状

病雏鸡精神萎靡，食欲下降，饮欲增加，翅膀下垂，呆立，不愿走动，闭目昏睡，有的尖叫不安，卧地不起；排灰白色水样便，泄殖孔周围羽毛污秽，沾满粪便，有的泄殖腔红肿外翻；有的死于脐炎；少数病雏鸡还出现转圈、扭颈等神经症状，最后衰竭而死。

三、病理变化

剖检病鸡30只，多数鸡营养不良、消瘦，腹腔中积有半透明黄色液体；心包膜混浊增厚，心包积液增多；肝稍肿、质脆，并有灰白色或黄白色坏死灶；肺淤血水肿，气囊混浊；肠管内充满气体，肠上皮脱落，粘膜呈条片状出血，肠内容物呈灰白色或黄白色水样粘液，有的肠管与腹膜粘连在一起；卵黄膜薄而易碎，卵黄呈干酪样或变为黄棕色水样的残留卵黄。

四、实验室检验

1.涂片镜检：取病死雏鸡肝、心血、脾、肾直接涂片，革兰氏染色，镜检见两端钝圆、单

感受态制备

A 大肠杆菌感受态的制备（CaCl2法）（《水稻NR和NIR基因启动子的克隆及功能验证》第38页）

1 材料、设备及试剂

1.1 材料

大肠杆菌DH5α、BL21、Rossette、JM109菌株

1.2试剂

LB液体培养基：

蛋白胨 10g/L

酵母提取物 5g/L

NaCl 10g/L

NaOH（1mol/L） 1mL/L

400mL 0.1M/L预冷的 CaCl2溶液（高温高压灭菌）

50%甘油

75%酒精

95%酒精

液氮

1.3 实验设备

接种环、酒精灯，打火机，75%酒精，95%酒精，50mL灭菌三角瓶4个，250mL灭菌的三角瓶4个，移液抢（5mL、200μL，1000μL），灭菌的枪头（5mL、200μL，1000μL），离心管（1.5mL，50mL）恒温摇床,灭菌锅，紫外分光光度计，超净工作台，制冰机，冰盒，高速冷冻离心机。

2 实验步骤

1、从新鲜培养的大肠杆菌DH5α平板上挑取一个单菌落，接种于5mL新鲜LB培液体养基中，于37℃，200rpm振荡培养过夜。

2、培养1

感受态制备

A 大肠杆菌感受态的制备（CaCl2法）（《水稻NR和NIR基因启动子的克隆及功能验证》第38页）

1 材料、设备及试剂

1.1 材料

大肠杆菌DH5α、BL21、Rossette、JM109菌株

1.2试剂

LB液体培养基：

蛋白胨 10g/L

酵母提取物 5g/L

NaCl 10g/L

NaOH（1mol/L） 1mL/L

400mL 0.1M/L预冷的 CaCl2溶液（高温高压灭菌）

50%甘油

75%酒精

95%酒精

液氮

1.3 实验设备

接种环、酒精灯，打火机，75%酒精，95%酒精，50mL灭菌三角瓶4个，250mL灭菌的三角瓶4个，移液抢（5mL、200μL，1000μL），灭菌的枪头（5mL、200μL，1000μL），离心管（1.5mL，50mL）恒温摇床,灭菌锅，紫外分光光度计，超净工作台，制冰机，冰盒，高速冷冻离心机。

2 实验步骤

1、从新鲜培养的大肠杆菌DH5α平板上挑取一个单菌落，接种于5mL新鲜LB培液体养基中，于37℃，200rpm振荡培养过夜。

2、培养1

高中生物实验

生物实验技能考核教案

题 目 《大肠杆菌的分离和培养》教案 学 院___ 化学和生命科学学院 班 级___ 生物科学102班 __ _ _ 姓 名___ 杜艳花__ ___ _ _ 学 号联系电话_ _18758912261（612261） 指导老师 张萍华

日期： 2013 年 7

月 4 日

高中生物实验

《大肠杆菌的分离与培养》教案

一、实验教材分析

本节内容选自浙科版生物选修1第1部分实验1大肠杆菌的分离和培养。本次课程主要包括了本次实验的目的、大肠杆菌的特点、无菌操作和灭菌的方法、仪器设备和实验材料、实验步骤等内容。在前一节介绍了实验室规则和生物技术概况的基础上，进行具体的实验操作。并且经过生物必修三册书本的学习，学生已经掌握了一定的细菌的相关知识，并对一些特殊细菌的筛选和鉴别有了一定的了解。故本次实验教学既是对学生前面学的理论知识的深化，同时也为学生将要学到的分离以尿素为氮源的微生物等内容奠定了比较重要的基础。因此，本节课起着承前启后的重要作用。