微量凯氏定氮法测定蛋白质含量

半微量凯氏定氮法测定蛋白质含量

(一)方法原理

样品与硫酸一同加热消化, 分解有机质, 释放出的NH3 与硫酸结合成硫酸铵留在溶液中。在定氮消化瓶中,用氢氧化钠中和硫酸铵生成氢氧化铵,加热又分解NH3 ,用硼酸吸收, 用标定过的盐酸或硫酸滴定, 从而计算出总氮量, 换算为蛋白质量。

(二) 仪器、设备

1. 仪器

分析天平: 感量0.0001克；实验用粉碎机；半微量凯氏蒸馏装置；半微量滴定管, 容积10毫升；硬质凯氏烧瓶: 容积25毫升, 50毫升；锥形瓶: 容积150毫升；电炉: 600瓦。

2. 试剂

(1) 盐酸: 分析纯, 0.02mol/L, 0.05mol/L标准溶液(邻苯二甲酸氢钾法标定)；

(2) 氢氧化钠: 工业用或化学纯, 40%溶液(W/V)；

(3) 硼酸: 分析纯, 2%溶液(W/V)；

(4) 硼酸混合指示剂: 溴甲酚绿0.1克, 甲基红0.1克分别溶于95%乙醇中,混合后稀至100毫升, 将混合指示剂与2%硼酸溶液按 1:100比例混合, 用稀酸或稀碱调节PH值为

4.5, 使呈灰紫色, 此溶液放置时间不宜过长, 需在1个月之内使用；

(5) 加速剂: 五水合硫酸铜(分析纯)10克, 硫酸钾(分析纯)100克在研钵中研磨, 仔细混匀,

食品中蛋白质含量测定（凯氏定氮法）

一、目的与要求

1、学习凯氏定氮法测定蛋白质的原理。

2、掌握凯氏定氮法的操作技术，包括样品的消化处理、蒸馏、滴定及蛋白质含量计算等。

二、实验原理

蛋白质是含氮的化合物。食品与浓硫酸和催化剂共同加热消化，使蛋白质分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵，留在消化液中，然后加碱蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，再用盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量来乘以蛋白质换算系数，即得蛋白质含量。

因为食品中除蛋白质外，还含有其它含氮物质，所以此蛋白质称为粗蛋白。

三、仪器与试剂

硫酸铜（CuSO4·5H20）硫酸钾硫酸（密度为1.8419g/L）硼酸溶液（20g/L）

氢氧化钠溶液（400g/L）0.01mol/L盐酸标准滴定溶液。

混合指示试剂：0.1%甲基红乙溶液液1份，与0.1%溴甲酚绿乙醇溶液5份临用时混合。

微量定氮蒸馏装置：如图3- 所示。Array图3- 微量凯氏定氮装置

1、电炉；

2、水蒸气发生器（2L平底烧瓶）；

3、螺旋夹a；

4、小漏斗及棒状玻璃塞（样品入口处）；

5、反应室；

6、反应室外层；

7、橡皮管及螺旋夹b；8、冷凝管；9、蒸馏液接收瓶。

四、实验步骤

1、样品消化

称取样品约2.00g（±0.001g），移入干燥的100mL凯氏烧瓶中，

凯氏定氮法测定食品中蛋白质含量

马丹:凯氏定氮法测定食品中蛋白质含量　57　　　　

凯氏定氮法测定食品中蛋白质含量

KjeldahlDeterminationofProteinContent

马　丹

(勃利县质量技术监督局,黑龙江勃利154500)

摘　要:本文主要介绍了凯氏定氮法测定食品中蛋白质含量的原理和实验过程中需要注意的一些问题。关键词:凯氏定氮;测定;食品;蛋白质

　　食品种类很多,食品中pro,而且其他成分,如碳水化合物很多,因此pro品消化成铵盐蒸馏,,用标准酸或碱液滴

定,由样品中含氮量计算出pro的含量。由于食品中pro含量不同又分为凯氏定氮常量法、半微量法和微量法,但它们的基本原理都是一样的。

我们在检验食品中pro时,往往只限于测定总氮量,然后乘以pro核算等数,得到蛋白质含量,实际上包括核酸、生物碱、含氮类脂、叶啉和含氮色素等非蛋白质氮化合物,故称为粗pro。1　凯氏常量定氮法

:蒸馏过程中放出的氨可用一定量的标

准硫酸或标准盐酸溶液进行氨的吸收,然后再用标准氢氧化钠溶液反滴定过剩的硫酸或盐酸溶液,从而计算出总氮量。

半微量或微量定氮通常用硼酸溶液吸收后,再用标准盐酸直接滴定,硼酸呈微弱酸性,用酸滴定不影响指示剂变色反应,它有吸收氨的作用。1

实验 凯氏定氮法测定面粉中的粗蛋白质含量

一、实验目的与要求：

1. 掌握微量凯氏法测定蛋白质总氮量的原理及操作技术。

2. 掌握凯氏定氮法的样品消化、蒸馏、吸收及滴定等基本操作技能与含氮量的计算。 二、实验原理

样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，其中C、H形成CO2、H2O逸出，而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵留在酸液中。然后将消化液碱化，蒸馏，使氨游离，用水蒸气蒸出，用硼酸吸收。。吸收氨后的硼酸再以标准盐酸溶液滴定所生成的硼酸铵，根据标准盐酸溶液消耗量可计算出总氮量，再折算为粗蛋白含量。 2NH2-(CH2)2-COOH + 13H2SO4 = (NH4)2 SO4 + 6CO2 ↑+ 12SO2↑ + 16H2O (NH4)2 SO4 + 2NaOH = 2NH3↑ + Na2SO4 + 2H2O 2NH3 + 4H3BO3 = (NH4)2 B4O7 + 5H2O (NH4)2 B4O7 + 2HCl + 5H2O = 2NH4Cl + 4H3BO3 三、样品： 面粉 四、仪器与试剂

仪器：凯氏烧瓶、微量凯氏定氮装置、 微量滴定管、 加热套1000W 试剂：所有试剂均用不含氮的蒸馏水

凯氏定氮法测定牛奶中的蛋白质含量

摘要：为了检测不同品牌牛奶的蛋白含量及与其标注是否相符，本文用凯氏定氮法测定了光明，蒙牛，伊利牛奶中蛋白质的含量，结果发现三种牛奶蛋白含量基本相同

目前蛋白质测定最常用的方法是凯氏定氮法。凯氏定氮法是通过测出样品中的总含氮量再乘以相应的蛋白质系数而求出蛋白质的含量，此法的结果称为粗蛋白质含量。由于样品中含有少量非蛋白质含氮化合物，如核酸、生物碱、含氮类脂、卟啉以及含氮色素等非蛋白质的含氮化合物，所以凯氏定氮不能分辨蛋白质与其他含氮化合物。凯氏定氮法是测定总有机氮量较为准确、操作较为简单的方法之一，可用于所有动、植物食品的分析及各种加工食品的分析，可同时测定多个样品，故国内外应用较为普遍，是个经典分析方法。至今仍被作为标准检验方法。

凯氏定氮法可分为全量法、微量法及经改进后的改良凯氏定氮法。目前通常以硫酸铜作催化剂的常量、半微量、微量凯氏定氮法样品质量及试剂用量较少，且有一套微量凯氏定氮器，所以选用微量凯氏定氮法

介于目前市场售卖的许多产品存在虚假宣传等现象，我们决定检测目前国产牛奶三大品牌的蛋白含量，并作横向和纵向（与其标注）的比较，旨在为消费者选择牛奶品牌时提供参考。 接下来以试验来比较不同品牌牛奶的蛋白含

关于凯氏定氮法测定蛋白质的几个问题

维普资讯

关于凯氏定氮法测定蛋白质的几个问题盛成乐(山东省淄博商业学校摘要凯氏定氨法测定酱油中的全氮及原料中的蛋白质是一

淄博 2 5 2 ) 50 2为多少合适呢？碱的用量取决于消化时浓 H S 4 2O的用量和碱的浓度，一般经验认为碱的用量为中和硫酸后再加 4%。例如：消化时加入浓 H S 40 L 0 2O 1m, NO a H的浓渡为 4%,则 N O 0 a H的用量为首先计算中和 1mL浓 H2O需要 4%Na的量： 0 S4 0 OH

种经典的方法。但此法有些问题常常被忽视，影

响实验的进行和测定结果。该文就粗蛋白、蒸僖时碱的用量和溶液的颜色变化、硼酸吸收灌颜色的变化等问题加以阐述。

美t词凯氏定氮法中田分类号

粗蛋白蒸值

硼酸C

" 02 I 21 S 1

文献标识码

HS4 2O的摩尔浓渡为 1 .m l,4%N O 84 o L 0/ a H摩尔浓度为 1m l。化学反应式如下： 0oL/2 OH+ H2 O4=NaS+ 2 O Na S 2 O4 Hz

文章编号

0 5—5 7 2 0}0 0 4—0 2 4 0 1 f0 2 2— 0 3 2

1凯氏定氮法的原理和过程

假如浓硫酸在消化时没有消耗，

食品分析实验报告

凯氏定氮法测定食品中蛋白质含量

一、目的与要求

1.学习凯氏定氮法测定蛋白质的原理

2.掌握凯氏定氮法的操作技术，包括样品的消化处理、蒸馏、滴定及蛋白质含量计算等。 二、实验原理

蛋白质是含氮的化合物。食品与浓硫酸和催化剂共同加热消化，使蛋白质分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵，留在消化液中，然后加碱蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，再用盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以蛋白质换算系数，即得蛋白质含量。

因为食品中除蛋白质外，还含有其他含氮物质，所以此蛋白质称为粗蛋白。 三、仪器与试剂 1.仪器

微量定氮蒸馏装置 2.试剂

硫酸铜；硫酸钾；硫酸；硼酸溶液（20g/L）；氢氧化钠溶液(400g/L)；0.01mol/L盐酸标准溶液；混合指示剂：0.1%甲基红乙醇溶液1份，与0.1%溴甲酚绿乙醇溶液5份临用时混合；黄豆粉 四、实验步骤 1.样品消化

称取大豆粉约1.0g，加入0.2g硫酸铜和3g硫酸钾，移入干燥的100ml凯氏烧瓶中，稍摇匀加入20ml浓硫酸，将瓶置于石棉网上使用电炉，在通风橱中加热消

1 / 3

食品分析实验报告

化，开始时用低温加热，待内容物全部炭化，泡沫停止后，再升高温度保持微沸，消化至液体呈蓝绿色澄清透明后，

粗蛋白含量的测定(凯氏定氮仪测定)

蛋白质含量测定（凯氏定氮法）

1 原理

蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。

2 试剂及其配制

硫酸钾（分析纯）、五水硫酸铜（分析纯）、浓硫酸（分析纯）、40%NaoH溶液（400g/L）、蒸馏水

0.1N盐酸标准溶液：量取9mL盐酸加适量水稀释至1000mL。

4%硼酸：取40g硼酸加水适量溶解后，定容至1000mL容量瓶中。

指示剂:甲基红0.1g，溴甲酚绿0.1g，混合定容至100ml 95%乙醇中，在滴定中加2~3滴于硼酸中。

3 仪器

消化炉、半自动凯氏定氮仪、天平（0.1mg、0.1g）

4 分析步骤

4.1 称1g(精确至0.1mmg)左右样品于消化管中；

4.2 加7g硫酸钾和0.8g五水硫酸铜；

4.3 加12mL浓硫酸，慢慢地摇动，将样品用酸浸湿；

4.4 将涤气装置接在支架中的消化管上，将水抽气泵水龙头全开；

4.5 将装有涤气装置的消化管连支架放入消化器中；

4.6 5min后调小抽气泵水流，使酸恰好吸入涤气罩头；

4.7 继续消化直至全部样品变为透

粗蛋白含量的测定(凯氏定氮仪测定)

蛋白质含量测定（凯氏定氮法）

1 原理

蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。

2 试剂及其配制

硫酸钾（分析纯）、五水硫酸铜（分析纯）、浓硫酸（分析纯）、40%NaoH溶液（400g/L）、蒸馏水

0.1N盐酸标准溶液：量取9mL盐酸加适量水稀释至1000mL。

4%硼酸：取40g硼酸加水适量溶解后，定容至1000mL容量瓶中。

指示剂:甲基红0.1g，溴甲酚绿0.1g，混合定容至100ml 95%乙醇中，在滴定中加2~3滴于硼酸中。

3 仪器

消化炉、半自动凯氏定氮仪、天平（0.1mg、0.1g）

4 分析步骤

4.1 称1g(精确至0.1mmg)左右样品于消化管中；

4.2 加7g硫酸钾和0.8g五水硫酸铜；

4.3 加12mL浓硫酸，慢慢地摇动，将样品用酸浸湿；

4.4 将涤气装置接在支架中的消化管上，将水抽气泵水龙头全开；

4.5 将装有涤气装置的消化管连支架放入消化器中；

4.6 5min后调小抽气泵水流，使酸恰好吸入涤气罩头；

4.7 继续消化直至全部样品变为透

KDY-9810凯氏定氮仪操作使用说明

1、化学试剂的准备

1)、配制30%～40%的氢氧化钠（NaOH)溶液(注意！重量百分比)，3～5升加入碱 液桶中，将不得有气泄漏。建议:用35%浓度(即35克氢氧化钠溶于65毫升水)， 溶液在室温变化后不易结晶，避免堵塞管路。 2)、配制甲基红一溴甲酚绿混合指示剂(按行业标准)。

3)、配制2%硼酸（H3BO3）溶液，3～5升加入硼酸液桶中，再把甲基红一溴甲酚绿混合指示剂溶液与2%硼酸溶液按比例1:100加入硼酸溶液中，混合均匀后备用。

4)、配制盐酸(HCL )滴定液， 浓度根据被测样品的含量而定，一般为0.1～0.05摩尔(M)浓度需精确标定。

注:消煮样品需备有硫酸（H2SO4)、硫酸铜(CuSO4)、硫酸钾(K2SO4)。 2、操作盘功能

仪器操作盘是红、绿两按姐，操作简单。 操作盘所示功能

加热指示键：蒸气发生器加热指示。

加碱键：按下后，直接进入加碱状态，向蒸馏样品消煮管内加碱，加碱量到后放起按键。

蒸馏键：按下后， 直接进入蒸馏状态，待蒸馏接收液量到达设置量时，三角瓶托盘下落，发出“嘟-嘟-”声响，再按一次，关闭蒸馏状态。 3、仪器的使用及调整操作

1)、接通电源，按仪器左侧电源开关，指