乳酸脱氢酶酶活力测定实验报告
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乳酸脱氢酶酶活力测定
实验六 乳酸脱氢酶酶活力测定 及紫外吸收法测定蛋白质含量
目的要求
(1) 掌握LDH活性测定原理;
(2) 学习用比色法测定酶活性的方法。
实验原理
乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase简称LDH,EC.1.1.1.27, L-乳酸:NAD+氧化还原酶)广泛存在于生物细胞内,是糖代谢酵解途径的关键酶之一,可催化下列可逆反应。
LDH可溶于水或稀盐溶液。组织中LDH含量测定方法很多,其中紫外分光光度法更为
简单、快速。鉴于NADH, NAD+ 在340nm及260nm 处有各自的最大吸收峰,因此以NAD+为辅酶的各种脱氢酶类都可通过340nm光吸收值得改变,定量测定酶的含量。本实验测定LDH活力,基质液中含丙酮酸及NADH,在一定条件下,加入一定量酶液,观察NADH在反应过程中340 nm 处光吸收减少值,减少越多,则LDH活力越高。其活力单位定义是:在25℃,pH7.5条件下A340nm/min下降为1.0的酶量为1个单位。可定量测定每克湿重组织中LDH单位。定量测定蛋白质含量即可计算比活力(U/mg)。
利用上述原理,改变不同第五则可测定相应脱氢酶反应过程中A340nm的改变,定量测定酶活力,如苹果酸脱氢
酶活力的测定
实验26 过氧化氢酶活力的测定(必修)
[目的与原理]
掌握过氧化氢酶活力的测定原理和比色测定方法,并用此方法测定水产动物血清中过氧化氢酶的活力。
血清中的过氧化氢酶(CAT)分解H2O2的反应,可通过加入钼酸铵而迅速中止,剩余的H2O2与钼酸铵产生一种淡黄色的络合物,在405nm处测定其生成量,即可计算出CAT的活力,CAT活力单位定义为:每1分钟分解1μmol的过氧化氢即为1个酶活力单位(U)。 [试剂与器材] 试剂:
1、磷酸盐缓冲液(67mmol / l,pH=7.4):取Na2HP04 7.60g,KH2P041.82g,溶于1L蒸馏水中,调pH至7.4。
2、基质液(65μmol/ l, H2O2):取30% H2O2 3.69 ml加pH7.4磷酸盐缓冲液至500ml。 3、钼酸铵:称取[(NH4)6Mo7O24]20.2g溶于500ml蒸馏水中。 器材:
721分光光度计 , 0.5cm比色杯,恒温水箱(37℃±0.5℃),试管 16mm×100mm,移液管,吸耳球,可调微量进样器。 [实验步骤]
1、样品测定:基质液置于37℃水浴 5 min,然后按下列步骤操作 试剂 基质液 钼酸铵 缓冲液 血清
对照管 1.0
测定精浆和全精子中的乳酸脱氢酶同工酶X活性及其比值在评价精液质量中的应用
目的通过比较精浆及全精子中乳酸脱氢酶同工酶X(LDH—X)活性及其比值在生育男性与不育男性中的差异,探讨其在评价精液质量中的应用。方法以长链α-酮酸为底物,用全自动生化分析仪检测各实验组精浆及全精子中的LDH~X活性,并通过精子总数计算出精子LDH—X的活性、精浆/全精子中LDH—X的比值,进行统计学分析。结果不育A、B组精浆LDH—X活性大于生育组男性,精子LDH—X的活性
维普资讯
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现代中西医结合杂志 Mo en o r a o t rt rd i a C i s n s r d i 0 7D c 1 ( 5 d r u nl f ne a dT a io l hn e dWet n Me i n 2 0 e, 6 3 ) J I g e tn e a e ce
测定精浆和全精子中的乳酸脱氢酶同工酶 X活性及其比值在评价精液质量中的应用卢卫国周迎春何静朱辉超 ,,, ( .广州中医药大学第一附属医院,东广州 5 0 0; .广东省佛山市顺德区陈村医院,东佛山 5 8 1 ) 1广 14 5 2广 2 3 3[要]目的通过比较精浆及全精子中乳酸脱氢酶同工酶 x( D摘 L H—x)性及其比值在生育男性与不育男性活中的差
乙醇脱氢酶Ⅰ类基因全长cDNA的克隆与表达
?类乙醇脱氢酶(ADH)在乙醇的肝代谢中发挥重要作用,由ADH1、ADH2和ADH3组成。根据序列数据设计一对引物,利用RT-PCR同时克隆乙醇脱氢酶?类基因全长cDNA。测序后的cDNA被克隆在表达载体pTYB11上并在大肠杆菌中稳定表达。纯化获得的酶通过检测其在340nm处吸光值的变化进行酶活性
乙醇脱氢酶 类基因全长cDNA的克隆与表达
周文婷1,崔羽,王晓燕2,张永红,李世荣,李景鹏*
(东北农业大学生命科学与生物技术中心,哈尔滨 1500301;
哈尔滨医科大学附属第四医院检验科,哈尔滨 1500012)
摘 要: 类乙醇脱氢酶(ADH)在乙醇的肝代谢中发挥重要作用,由ADH1、ADH2和ADH3组成。根据序列数据设计一对引物,利用RT-PCR同时克隆乙醇脱氢酶 类基因全长cDNA。测序后的cDNA被克隆在表达载体pTYB11上并在大肠杆菌中稳定表达。纯化获得的酶通过检测其在340nm处吸光值的变化进行酶活性测定。经检测重组ADH1,ADH2和ADH3的酶活力分别为1.8± 0.3U/mg, 0.9±0.2U/mg和1.4±0.2U/mg。
关键词:乙醇脱氢酶(ADH);基因克隆,原核表达;酶活力检测1
酒是重要的
乙醇脱氢酶Ⅰ类基因全长cDNA的克隆与表达
?类乙醇脱氢酶(ADH)在乙醇的肝代谢中发挥重要作用,由ADH1、ADH2和ADH3组成。根据序列数据设计一对引物,利用RT-PCR同时克隆乙醇脱氢酶?类基因全长cDNA。测序后的cDNA被克隆在表达载体pTYB11上并在大肠杆菌中稳定表达。纯化获得的酶通过检测其在340nm处吸光值的变化进行酶活性
乙醇脱氢酶 类基因全长cDNA的克隆与表达
周文婷1,崔羽,王晓燕2,张永红,李世荣,李景鹏*
(东北农业大学生命科学与生物技术中心,哈尔滨 1500301;
哈尔滨医科大学附属第四医院检验科,哈尔滨 1500012)
摘 要: 类乙醇脱氢酶(ADH)在乙醇的肝代谢中发挥重要作用,由ADH1、ADH2和ADH3组成。根据序列数据设计一对引物,利用RT-PCR同时克隆乙醇脱氢酶 类基因全长cDNA。测序后的cDNA被克隆在表达载体pTYB11上并在大肠杆菌中稳定表达。纯化获得的酶通过检测其在340nm处吸光值的变化进行酶活性测定。经检测重组ADH1,ADH2和ADH3的酶活力分别为1.8± 0.3U/mg, 0.9±0.2U/mg和1.4±0.2U/mg。
关键词:乙醇脱氢酶(ADH);基因克隆,原核表达;酶活力检测1
酒是重要的
纤维素酶活力的测定
生物化学实验报告
题目:纤维素酶活力的测定(3,5-二硝基水杨酸法)
姓名: 学号: 班级: 时间:
一、
实验目的:
掌握还原糖的测定原理,学习用3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖的方法。
二、
实验原理:
纤维素酶水解纤维素,产生纤维二糖、葡萄糖等还原糖,能将3,5-二硝基水杨酸中硝基还原成橙黄色的氨基化合物,利用比色法测定其还原物生成量来表示酶的活力。 三、
实验试剂:
1. 3,5-二硝基水杨酸显色液:称取10g 3,5-二硝基水杨酸,溶入蒸馏水中,
加入20g分析纯氢氧化钠,200g酒石酸钾钠,加水500ml,升温溶解后,加入重蒸酚2g,无水亚硫酸钠0.5g。加热搅拌,待全溶后冷却,定容至1000ml。存于棕色瓶中,放置一周后使用。 2. 0.1摩尔pH4.5乙酸-乙酸钠缓冲溶液。
3. 0.5%羧甲基纤维素钠水溶液,溶解后成胶状液,静置过夜。使用前摇匀。 4. 标准葡萄糖溶液:称取干燥至恒重的葡萄糖100mg,溶解后定容至100ml,
此溶液含葡萄糖1.00mg/ml。
5. 酶液:将0.05g酶溶解定容至50ml,从中取出1ml再定容至100ml,待
测。(用pH4.5乙酸-乙酸钠缓冲溶液配制)
四、
核糖核酸酶活力的测定
成绩: 日期:2015年 11月1 日 南京林业大学实验报告
专业 学号 姓名 日期
实验二、核糖核酸酶活力的测定
一.实验目的:
核糖核酸酶包括脱氧核糖核酸酶(DNase)和核糖核酸酶( RNase)是水解DNA和
RNA磷酸二酯键的核酸内切酶,与植物的生长、分化、衰老、种子成熟和萌发等生理生化过程密切相关。
通过测定这两个酶的活性,可间接获得植物体内核酸含量极代谢情况。推测其所处的生长发育状态和阶段。
二、原理
以植物叶片试验材料,提取粗酶液,进行酶促反应,以反应混合物中0.1ml 酶液在30min内催化形成具有OD值为1的硝酸镧可溶性RNA 碎片的酶量为1个酶活性单位。
三、材料、试剂与仪器设备:
植物材料:绣球
实验试剂:0.01M的HAc(醋酸缓冲液pH4.8);0.05ml30mM巯基乙醇;1ml酵母RNA;1.5ml冷的硝酸镧-HCl溶液。
实验器具:分光光度计;离心机;研钵;离心管;移液管;试管等;恒温水浴箱。
四、实验步骤
1.酶液的提取
称取0.4g绣球叶片剪碎用3ml0.01M的HAc(醋酸缓冲液pH4.8)分三次加入(1,1,1),研磨提取,在5000
土壤酶活性测定的实验步骤
土壤酶的测定
1. 三角瓶用稀HNO3(3-5%)或用洗衣粉浸泡24h,后刷洗,然后再用蒸馏水润洗,晾干。 2. 土样研磨精细后分袋装好。土量需2g+2.5g+5g+5g=14.5g ,重复一次,14.5×2=29g。
一、过氧化氢酶(容量法)(关松荫P323)
1.试剂配制:
(1)0.3%过氧化氢溶液:
①(1:100 30%的H2O2和水) ②(0.5molH2O2+49.5ml蒸馏水) ③(1ml30% H2O2+99ml蒸馏水) (2)3N硫酸:(10ml硫酸+50ml水) (3)0.1N高锰酸钾溶液 :(1.58gKMnO4+100ml蒸馏水)
2.操作步骤:
2g风干土置100三角烧瓶→注入40ml蒸馏水和5ml 0.3%过氧化氢(现配)→在往复式振荡机上振荡20min→加入5ml3N硫酸(以稳定未分解的H2O2)→用慢速型滤纸过滤,→吸取25ml滤液,用0.1N高锰酸钾的滴定至淡粉红色
3.结果计算
过氧化氢酶的活性(M),以20min后1g土壤的0.1N KMnO4的毫升数表示: M=(A-B)×T 式中:
A:空白消耗的0.1N KMnO4 毫升数
B:滤液消耗的0.1 N KMnO4 毫升数 T:KMnO4
质粒提取与酶切电泳实验报告
1 分子实验报告 2013030020华天瑞
Preparation of Plasmid DNA, Restriction Enzyme Digestion, and
Agarose Gel Electrophoresis
2014/10/14-21
1 Intro
1.1 Objective
To learn
? The characteristics of plasmid DNA
? The method of plasmid DNA mini-preparation by alkaline lysis and the measurement of
DNA concentration by spectrophotometer ? The characteristics of restriction endonuclease
? How to use agarose gel electrophoresis to separate DNAs To understand: The principles of pu
质粒提取与酶切电泳实验报告
1 分子实验报告 2013030020华天瑞
Preparation of Plasmid DNA, Restriction Enzyme Digestion, and
Agarose Gel Electrophoresis
2014/10/14-21
1 Intro
1.1 Objective
To learn
? The characteristics of plasmid DNA
? The method of plasmid DNA mini-preparation by alkaline lysis and the measurement of
DNA concentration by spectrophotometer ? The characteristics of restriction endonuclease
? How to use agarose gel electrophoresis to separate DNAs To understand: The principles of pu