植物dna的提取与鉴定

DNA的粗提取与鉴定（选修）

一、实验原理

1．DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl溶液浓度的变化而改变的。当NaCl物质的量浓度为0.14mol / L时，DNA的溶解度最低。

2．DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的其他许多物质则可以溶于酒精溶液。 3．DNA遇二苯胺会染成蓝色（遇甲基绿溶液被染成蓝绿色）。 4．鸟类红细胞有细胞核，核内DNA与蛋白质结合成染色质。

二、实验步骤

实验步骤 制备鸡血细胞液 （由教师完成） 1．提取鸡血细胞细胞核物质 操作方法 实验原理 取质量浓度为0.1g/mL的柠檬酸钠溶液100mL，柠檬酸钠能防止血液与新鲜的鸡血混合并搅拌，然后在冰箱内静置一凝固，静置使血细胞天，除去上清液，即得鸡血细胞液 与血浆分离 取20mL蒸馏水与约5－10 mL的鸡血细胞液混合并沿一个方向快速充分搅拌，然后用单层纱布过滤，取滤液于烧杯中 取质量浓度为2mol/L的NaCl溶液40mL与上述滤液混合后，沿一个方向轻轻搅拌，核中DNA溶解，染色质中的DNA与蛋白质分离 沿烧杯内壁慢慢加入蒸馏水并沿一个方向轻轻搅拌，至白色丝状粘稠物不再增加时停止加水 用多层纱布过滤，取纱布上的粘稠物 使细胞过度吸水而破裂 DNA在高浓度Na

“DNA 的粗提取与鉴定”实验研究综述

摘要：“DNA 的粗提取与鉴定”的实验，实验原理较抽象复杂，实验步骤多，实验效果不理想，因此目前我国在实验材料的选择、实验试剂的处理和用具的选择、实验方法的优化和实验教学设计的创新等方面有较多的研究。本文试对DNA 的粗提取与鉴定的实验研究进展和教学作一综述。 关键词：DNA 的粗提取与鉴定 实验改进 教学设计 中图分类号：G633.91

“DNA 的粗提取与鉴定”实验是人教版高中生物选修1《生物技术实践》专题五课题1 的实验内容，教材中详细介绍了动植物细胞DNA 提取、分离、提纯所涉及到的一般原理、方法和实验材料的选取，但并没有以哪一种材料为例具体介绍其操作过程。且在DNA 分离、提纯过程中理想的方法应该是通过离心来不断分离、提纯，而一般中学的实验室又不具有离心设备，这就对本实验的可行性带来了一定的影响。为了使实验变得简单、可行，许多学者对该实验进行了研究与改进。

1.实验原理

真核生物DNA 核蛋白的溶解度随NaCl 浓度的变化而改变。在0.14 mol/L时,溶解度最小, 而在纯水或1 ～ 2 mol/L的盐溶液中, 溶解度则较大。利用这一原理, 可以将DNA 溶于NaCl 溶液中, 而与其

“DNA 的粗提取与鉴定”实验研究综述

摘要：“DNA 的粗提取与鉴定”的实验，实验原理较抽象复杂，实验步骤多，实验效果不理想，因此目前我国在实验材料的选择、实验试剂的处理和用具的选择、实验方法的优化和实验教学设计的创新等方面有较多的研究。本文试对DNA 的粗提取与鉴定的实验研究进展和教学作一综述。 关键词：DNA 的粗提取与鉴定 实验改进 教学设计 中图分类号：G633.91

“DNA 的粗提取与鉴定”实验是人教版高中生物选修1《生物技术实践》专题五课题1 的实验内容，教材中详细介绍了动植物细胞DNA 提取、分离、提纯所涉及到的一般原理、方法和实验材料的选取，但并没有以哪一种材料为例具体介绍其操作过程。且在DNA 分离、提纯过程中理想的方法应该是通过离心来不断分离、提纯，而一般中学的实验室又不具有离心设备，这就对本实验的可行性带来了一定的影响。为了使实验变得简单、可行，许多学者对该实验进行了研究与改进。

1.实验原理

真核生物DNA 核蛋白的溶解度随NaCl 浓度的变化而改变。在0.14 mol/L时,溶解度最小, 而在纯水或1 ～ 2 mol/L的盐溶液中, 溶解度则较大。利用这一原理, 可以将DNA 溶于NaCl 溶液中, 而与其

综合性实验设计

——植物DNA的提取及纯度检验方案

班级 组别 成员 指导教师 10级生物科学2班 第七组 刘梦雅、王芳、毛阿威、张杰 刘立亚

2011年11月11日

综合性实验设计

——植物DNA的提取及纯度检验方案

一、 实验目的

1. 学习从生物体中分离核酸的原理和方法； 2. 掌握测定核酸的原理和方法；

3. 掌握核酸的琼脂糖凝胶电泳的原理和方法；

4. 培养学生创新实践能力和团队合作精神，并强化科研反哺教学效果。

二、 实验原理

1、 关于植物DNA制备的基本原理

植物细胞中DNA主要存在于细胞核内，称为核DNA。细胞质中含有少量的DNA，称之为细胞质DNA，主要分布于线粒体或叶绿体中，分别称为线粒体DNA和叶绿体DNA，细胞内各种DNA称为总DNA。植物DNA的制备，必须首先注意植物细胞的特点：①植物组织中含有坚硬的纤维素，采用温和条件难以破碎细胞；②植物细胞一般具有大的液泡，破碎细胞时有机酸随之逸出将使pH显著下降；③通常植物细胞的DNA含量较低；④植物中含有大量多糖、脂质、色素和酚类等物质，这些杂质往往会与提取的DNA混在一起，给核酸的提取与纯化带来诸多不便。鉴于以上特点，提取植物DNA时除了选

综合性实验设计

——植物DNA的提取及纯度检验方案

班级 组别 成员 指导教师 10级生物科学2班 第七组 刘梦雅、王芳、毛阿威、张杰 刘立亚

2011年11月11日

综合性实验设计

——植物DNA的提取及纯度检验方案

一、 实验目的

1. 学习从生物体中分离核酸的原理和方法； 2. 掌握测定核酸的原理和方法；

3. 掌握核酸的琼脂糖凝胶电泳的原理和方法；

4. 培养学生创新实践能力和团队合作精神，并强化科研反哺教学效果。

二、 实验原理

1、 关于植物DNA制备的基本原理

植物细胞中DNA主要存在于细胞核内，称为核DNA。细胞质中含有少量的DNA，称之为细胞质DNA，主要分布于线粒体或叶绿体中，分别称为线粒体DNA和叶绿体DNA，细胞内各种DNA称为总DNA。植物DNA的制备，必须首先注意植物细胞的特点：①植物组织中含有坚硬的纤维素，采用温和条件难以破碎细胞；②植物细胞一般具有大的液泡，破碎细胞时有机酸随之逸出将使pH显著下降；③通常植物细胞的DNA含量较低；④植物中含有大量多糖、脂质、色素和酚类等物质，这些杂质往往会与提取的DNA混在一起，给核酸的提取与纯化带来诸多不便。鉴于以上特点，提取植物DNA时除了选

山东大学实验报告

姓名 宿智新 学院 生命科学学院 班级 11级生工2班 科目 分子生物学实验 学号 201100140155 第 8 组

质粒DNA的提取、纯化与鉴定

摘要：本实验利用碱变法从大肠杆菌DH5?（E.coli DH5?）中提取pUC19质粒，旨在学习并掌握质粒DNA提取的原理、纯化和检测方法及琼脂糖凝胶电泳技术。同时通过对质粒DNA的提取、纯化过程及电泳图谱的分析，探讨碱变法提取高质量质粒DNA的关键步骤及影响所提质粒纯度和量的相关因子。 关键词：碱变法 质粒 电泳 实验目的：

1. 学习并掌握凝胶电泳进行DNA的分离纯化的实验原理。 2. 学习并掌握凝胶的制备及电泳方法。 3. 学习并掌握凝胶中DNA的分离纯化方法。 4. 掌握碱变性提取发的原理及各种试剂的作用。 5. 掌握碱变性法提取质粒DNA的方法。 实验原理：

1. 质粒DNA的提取——碱变性提取法：

提取和纯化质粒DNA的方法很多，目前常用的有：碱变性提取法、煮沸法、羟基磷灰石柱层析法、EB-氯化铯密度梯度

植物DNA的提取分离技术

摘要：主要介绍了近年来国内外几种常用的DNA提取方法：CTAB法、SDS法等，并在对其进行了简单的归纳总结与比较分析同时，并介绍了一些新的改良方法和其他植物提取方法 关键词：植物DNA 提取方法 研究进展

市售中药材大多为干品,而中药材的加工和贮藏整个过程,如日晒、高温烘干等都不利于DN的完整性, 为达到要求目前国内外研究发现并使用的DNA提取方法有很多[1-12]，其中被最为广泛应用的DNA提取方法是传统的CTAB法和SDS法[13]。由于不同植物的材料组分和干湿程度各异，因此对不同植物DNA的提取存在着不同的效果。目前许多学者都在致力于研究不同的植物DNA提取方法。他们在探索新方法的同时，也针对不同的植物，在传统的提取方法上进行着一些新的改良。

1.十六烷基三乙基溴化铵（CTAB）法

在目前众多的DNA提取方法中，CTAB法是其中最为广泛应用的一种。它既可以裂解细胞，又可以有效地去除多酚类和多糖类物质的沉淀，因而经常被应用于植物的DNA提取工作中。 1.1方法及原理

CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中

2×CTAB法植物总DNA提取

1. 液氮研磨1g左右的植物组织，转移到离心管中。改用研磨枪在冰上研磨，不加β-巯基乙醇

研磨时可加入适量的PVP、β-巯基乙醇。若CTAB准备2-3天内用完，则可将PVP、β-巯基乙醇直接加入其中。

2. 加入500μl的2*CTAB (60℃或65℃预热) ,颠倒混合均匀后在60℃或65℃水浴30m-1h小时,其间要上下颠倒混匀数次。

3.取出离心管，加入等体积的24：1（三氯甲烷：异戊醇），上下颠倒充分混合。 若量多，则可以直接侧立于摇床上晃动10分钟。

4.12000转速离心5-10min。将离心管动作轻缓的取出转子，放置于离心管架上。 a.离心后溶液分三层：上层为水相；中层为碎片和蛋白相；底层为氯仿 b.迅速进入下一步，以免各相混合

5.用移液枪吸取管中上层水相，动作一定要轻缓，不可搅动其它两层。 a.此步骤要宁舍不贪多，尽量避免吸取到下层液体。

b.若上步骤中中间层较厚，则继续加入等体积24：1，再次抽提一次，直至中间层较薄。 6. 在抽提出的水相中加入1/3体积的5M的KAc及等体积的异丙醇（4℃预冷），轻轻晃动混合均匀后在-20℃沉淀。沉淀至少15分钟至过夜。

6-1 在抽提出的水

植物DNA、RNA及蛋白 的提取与分析

植物DNA提取

DNA提取原则

保证DNA结构的完整性 排除有机溶剂和金属离子的污染 排除其它核酸分子的污染 蛋白质、多糖、脂类等降低到最低程度 纯化后不应存在对酶抑制性的物质

植物DNA提取的方法

CTAB法 SDS法 煮提法

--植物DNA提取的经典方法

DNA提取的基本步骤

材料的准备(新鲜或冷冻保存) 细胞的裂解(液氮研磨，释放内容物) DNA的分离与纯化(酚氯仿抽提) DNA的沉淀与洗涤(2V无水乙醇或2/3V 异丙醇) DNA的干燥与溶解(ddH2O或TE)

CTAB法流程植物材料 裂解液沉淀

液氮研磨

抽提

离心洗涤

细胞裂解

上层溶液

干燥溶解

CTAB提取液主要成分CTAB: 十六烷基三甲基溴化铵，是一种阳离子去污剂，可 溶解细胞膜，并与核酸形成复合物，通过有机溶剂抽提， 去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇或异丙醇沉淀即 可使核酸分离出来。

Tris-HCl(pH8.0): 提供一个缓冲环境，防止核酸 被破坏。 EDTA:螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性。 NaCl: 提供一个高盐环境，使DNP充分溶解，存在 于液相中。

CTAB法步骤1.取约0.1g的水稻叶片在液态中磨成粉末，将适 量的粉

主要试剂的配制

参考（美）萨姆布鲁克（Sambrook，J.）等.分子克隆实验指南（下册）配置如下[94]：

（1）0.5 mo1/L EDTA(pH 8.0)：称取EDTA-Na2 18.61 g，加80 mL双蒸水，磁力搅拌器上剧烈搅拌。加入7 mL 10 mo1/L NaOH调至pH 8.0再用双蒸水定容到100 mL，在1.03×105Pa下高压灭菌20 min。

（2）5 mol/L NaCl溶液：称取NaCl 29.22 g，溶解于90 mL的双蒸水，加热到80℃溶解，冷却，再用双蒸水定容100 mL，在高压灭菌20 min。

（3）10 mol/L NaOH溶液：称取40.00 g NaOH溶于80 mL的双蒸水，搅拌，定容到100 mL。 （4）1 mol/L Tris-HC1溶液(pH 8.0)：称取12.114 gTris碱，溶于80 mL的双蒸水，加入浓HC1 4.2 mL，调整PH值到8.0，加水定容到100 mL，高压灭菌20min。 （5）10%CTAB（m/v）：称取CTAB 10.00 g，溶解于80 mL的双蒸水，加热促进溶解，加双蒸水定容到100 mL，室温保存。

（6）5 mo1/L KAc溶液(pH 4