HPLC定量方法

HPLC法测定水飞蓟素中各主要成分的含量

摘要 目的：建立一种测定水飞蓟素中各主要成分含量的HPLC方法。方法：使用岛津LC-20A型高效液相色谱仪；色谱柱：Betasil C18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：甲醇－水－冰乙酸（51.5：48.5：0.5）；检测波长：288nm；流速：1.0mL·min-1；柱温：25℃。结果：水飞蓟宾在0.02～0.15mg·mL-1范围内线性关系良好（r=0.9994),3个浓度的平均回收率分别为98.5％，97.9％，98.5％；RSD分别为0.4％，0.5％，0.5％。结论：本方法操作简便、准确、重复性好，适用于水飞蓟素中各主要成分的定量分析。

关键词：HPLC；水飞蓟素；水飞蓟宾A、B；水飞蓟亭；水飞蓟宁；异水飞蓟宾A、B；

水飞蓟素为菊科植物水飞蓟（紫花）[silybum marianum(Linn) Gaertn]的果实，经提取精制所得的淡黄色或黄色粉末，或结晶性粉末。无味、无臭。在热甲醇中溶解，乙酸乙酯中微溶，不溶于水，主要化学成分为水飞蓟亭（silychristin）、水飞蓟宁(silydianin)、水飞蓟宾(silybin)C25H22O10及其异构物等黄酮类物质。

HPLC法测定水飞蓟素中各主要成分的含量

摘要 目的：建立一种测定水飞蓟素中各主要成分含量的HPLC方法。方法：使用岛津LC-20A型高效液相色谱仪；色谱柱：Betasil C18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：甲醇－水－冰乙酸（51.5：48.5：0.5）；检测波长：288nm；流速：1.0mL·min-1；柱温：25℃。结果：水飞蓟宾在0.02～0.15mg·mL-1范围内线性关系良好（r=0.9994),3个浓度的平均回收率分别为98.5％，97.9％，98.5％；RSD分别为0.4％，0.5％，0.5％。结论：本方法操作简便、准确、重复性好，适用于水飞蓟素中各主要成分的定量分析。

关键词：HPLC；水飞蓟素；水飞蓟宾A、B；水飞蓟亭；水飞蓟宁；异水飞蓟宾A、B；

水飞蓟素为菊科植物水飞蓟（紫花）[silybum marianum(Linn) Gaertn]的果实，经提取精制所得的淡黄色或黄色粉末，或结晶性粉末。无味、无臭。在热甲醇中溶解，乙酸乙酯中微溶，不溶于水，主要化学成分为水飞蓟亭（silychristin）、水飞蓟宁(silydianin)、水飞蓟宾(silybin)C25H22O10及其异构物等黄酮类物质。

色 谱

不动的一相，称一为固定相；另一相是携带样品流过固定相的流动体，称为流动相。

不被固定相吸附或溶解的物质进入色谱柱时，从进样到出现峰极大值所需的时间称为死时间 试样从进样开始到柱后出现峰极大点时所经历的时间，称为保留时间

某组份的保留时间扣除死时间后称为该组份的调整保留时间，即 tR′ = tR-tM 死体积可由死时间与流动相体积流速F0（L／min）计算：

VM = tM·F0 指从进样开始到被测组份在柱后出现浓度极大点时所通过的流动相体积。 保留体积与保留时间t。的关系： VR = tR·F0

某组份的保留体积扣除死体积后，称该组份的调整保留体积，即 VR′ = VR- VM

某组份2的调整保留值与组份1的调整保留值之比，称为相对保留值(必须注意，相对保留值绝对不是两个组份保留时间或保留体积之比.)α总是大于1的 。

W1/2 = 2.354σ W = 4σ

从色谱流出曲线上，可以得到许多重要信息：

（l）根据色谱峰的个数，可以判断样品中所合组 份的最少个数． （2）根据色谱峰的保留值(或位臵)，可以进行定性分析． （3） 根据色谱峰下的面积或峰高，可以进行定量分析．

（4）色谱峰的保留值及其区域宽度，是评价色

第十章 定量预测技术

[教学目标与要求]

了解定量预测的含义和作用；掌握时间序列预测法和回归预测法的原理；重点把握平滑预测法、趋势延伸预测法、季节指数预测法和线性回归分析预测法在实际调查中的应用。 [问题]

产品销售要受哪些变动因素影响？近期的要素和远期的因素以及季节变动对销量的影响如何精确计算？

第一节 平滑预测法

一、时间序列预测法的含义

时间序列预测法，是指将过去的历史资料及数据，按时间顺序加以排列构成一个数字系列，根据其动向预测未来趋势。这种方法的根据是过去的统计数字之间存在着一定的关系，这种关系，利用统计方法可以揭示出来，而且过去的状况对未来的销售趋势有决定性影响。因此，可以用这种方法预测未来的趋势，它又称为外推法或历史延伸法。

二、影响时间序列变动的因素

① 长期趋势变动：它是时间序列变量在较长的持续时间内的某种发展总动向。

② 季节变动。它是由于季节更换的固定规律作用而发生的周期件变动。季节变动的周期比较稳定，通常为一年。

③ 周期波动，又称循环变动，是指时间序列在为期较长的时间内(—年以上至数年)，呈现出涨落起伏。

④ 不规则变动。又称随机变动，是指偶发事件导致时间序列小出现数值忽高忽低、时升时降的无规则可循的变动，

三、平滑

×××色谱纯度分析方法验证报告

目录

.............................................................................................................................................................................................. ×××色谱纯度分析方法验证报告批准 ----------------------------------------------------3 1. 验证目的 ---------------------------------------------------------------------------4 2. 色谱纯度分析方法 -------------------------------------------------------------------4 2.1 仪器 ---------------------------------------------

实时荧光定量PCR方法简介

一． 实时荧光定量PCR的基本原理

理论上，PCR过程是按照2n（n代表PCR循环的次数）指数的方式进行模板的扩增。但在实际的PCR反应过程中，随着反应的进行由于体系中各成分的消耗（主要是由于聚合酶活力的衰减）使得靶序列并非按指数方式扩增，而是按线性的方式增长进入平台期。因此在起始模板量与终点的荧光信号强度间没有可靠的相关性。如采用常规的终点检测法（利用EB染色来判断扩增产物的多少，从而间接的判断起始拷贝量），即使起始模板量相同经PCR扩增、EB染色后也完全有可能得到不同的终点荧光信号强度。

为了能准确判断样品中某基因转录产物（mRNA）的起始拷贝数，实时荧光定量PCR采用新的参数——Ct值，定量的根本原理是Ct值与样品中起始模板的拷贝数的对数成线性反比关系。

Ct值是如何得到的

在实时荧光定量PCR的过程中，靶序列的扩增与荧光信号的检测同时进行，定量PCR仪全程采集荧光信号，实验结束后分析软件自动按数学算法扣除荧光本底信号并设定阈值从而得到每个样品的Ct值。

Ct值的定义

Ct值中的“C”代表Cycle（循环），“t”代表检测threshhold（阈值），其含义是PCR扩增过程中荧光信号强度达到阈值所需要的循环数

1906年俄国植物化学家茨维特（Tswett）首次提出“色谱法（”Chromotography）和“实验室最常用的P230高效液相色谱仪色谱图”（Chromatogram）的概念。他在论文中写到： “（原文）一植物色素的石油醚溶液从一根主要装有碳酸钙吸附剂的玻璃管上端加入，沿管滤下，后用纯石油醚淋洗，结果按照不同色素的吸附顺序在管内观察到它们相应的色带，就象光谱一样，称之为色谱图。”

1930年以后，相继出现了纸色谱、离子交换色谱和薄层色谱等液相色谱技术。

1952年，英国学者Martin和Synge 基于他们在分配色谱方面的研究工作，提出了关于气－液分配色谱的比较完整的理论和方法，把色谱技术向前推进了一大步，这是气相色谱在此后的十多年间发展十分迅速的原因。

1958年，基于Moore和Stein的工作，离子交换色谱的仪器化导致了氨基酸分析仪的出现，这是近代液相色谱的一个重要尝试，但分离效率尚不理想。 1960年中后期，气相色谱理论和实践的发展，以及机械、光学、电子等技术上的进步，液相色谱又开始活跃。到60年代末期把高压泵和化学键合固定相用于液相色谱就出现了HPLC。

1970年中期以后，微处理机技术用于液相色谱

液相色谱方法的建立

高丽萍 June 4,20111

目 录1.HPLC方法建立过程中的常见问题 方法建立过程中的常见问题 1. 2.HPLC建立的一般程序 建立的一般程序 2. 3.色谱条件的建立 3.色谱条件的建立3.1 色谱柱的选择 A.色谱柱的归类 A.色谱柱的归类 B.C18色谱柱的性能影响因素 B.C18色谱柱的性能影响因素 C.固定相种类的选择 C.固定相种类的选择 3.2 流动相的选择 A.流动相中的酸 A.流动相中的酸 B.流动相PH值与样品保留时间的关系 流动相PH B.流动相PH值与样品保留时间的关系 C.流动相中的缓冲盐 C.流动相中的缓冲盐 D.流动相中的离子对试剂 D.流动相中的离子对试剂 E.流动相中的其他组分 E.流动相中的其他组分

一、HPLC方法建立过程中的常见问题 HPLC方法建立过程中的常见问题对HPLC方法的所要达到的目标不明确 (如可能检测到多少个杂质，检测到什么水平) 对杂质的相关工作太粗 (杂质的ID,响应因子，杂质是否会在体系中进一步降解等) 方法建立时选择的样品不合适 (如选择了精制后的样品) 没有注意样品的处理方法 (如超声/在溶剂中的降解过程/进入色谱柱后发生水解等) 没有考虑色谱柱能否长期满

液相色谱方法的建立

高丽萍 June 4,20111

目 录1.HPLC方法建立过程中的常见问题 方法建立过程中的常见问题 1. 2.HPLC建立的一般程序 建立的一般程序 2. 3.色谱条件的建立 3.色谱条件的建立3.1 色谱柱的选择 A.色谱柱的归类 A.色谱柱的归类 B.C18色谱柱的性能影响因素 B.C18色谱柱的性能影响因素 C.固定相种类的选择 C.固定相种类的选择 3.2 流动相的选择 A.流动相中的酸 A.流动相中的酸 B.流动相PH值与样品保留时间的关系 流动相PH B.流动相PH值与样品保留时间的关系 C.流动相中的缓冲盐 C.流动相中的缓冲盐 D.流动相中的离子对试剂 D.流动相中的离子对试剂 E.流动相中的其他组分 E.流动相中的其他组分

一、HPLC方法建立过程中的常见问题 HPLC方法建立过程中的常见问题对HPLC方法的所要达到的目标不明确 (如可能检测到多少个杂质，检测到什么水平) 对杂质的相关工作太粗 (杂质的ID,响应因子，杂质是否会在体系中进一步降解等) 方法建立时选择的样品不合适 (如选择了精制后的样品) 没有注意样品的处理方法 (如超声/在溶剂中的降解过程/进入色谱柱后发生水解等) 没有考虑色谱柱能否长期满

信用评级方法及信贷风险管理

信用评级的定量分析方法

信用评级的定量分析方法主要是根据历史数据，通过经济分析指标，利用数量计算或建立数学模型，以分析资信状况好坏的方法，主要有以下五种方法：

1、比率分析法。是财务分析的主要方法，也是信用评级的主要方法。因为信用评级很多方面要采用财务分析中的比率指标。例如，总资产报酬率是利润总额对资产总额的比率，表示总资产的盈利能力；又如，流动比率是流动资产对流动负债的比率，反映了企业的短期偿债能力等等。通过这些比率计算，反映出企业财务指标相互之间的关系，可以判断企业对于资金的配置是否合理，可以使原来不可比的财务状况变成可比。例如企业利润总额，各厂之间无法比较，有的企业多，有的企业少，但是通过总资产报酬率这一比率指标，就可能衡量出企业总资产盈利能力的大小。评价资信状况同样如此，对单独一项数量指标，很难判断是好是坏，如果把它计算成为比率指标，就可能相互比较，作出正确的判断。

2、趋势分析法。是将同一单位连续几年的相同财务指标进行对比以观察其成长性的一种分析方法。通过趋势分析，可以了解企业在这一方面的发展趋势。例如销售收入增长率可以通过几年销售收入的对比求得，利润增长率可以通过几年利润总额的对比求得。通过销售收入增长率和利润