胶体金免疫标记法

包埋后免疫胶体金标记技术

1. 试剂

固定液：0.1M二钾砷酸鈉缓冲液pH7.4（4%多聚甲醛+0.1%戊二醛+4%蔗糖） 洗涤液：0.1M二钾砷酸鈉缓冲液pH7.4（4%蔗糖）

醛基灭活液：0.1M二钾砷酸鈉缓冲液pH7.4（4%蔗糖+0.1M甘氨酸） 脱水剂：甲醇（ddH2O稀释成30%，50%，70%，80%，90%，95%） 包埋剂：K4M (2.7g交联剂A+17.3单体B+0.1g引发剂C)

标记封闭液：0.01M磷酸盐缓冲液pH7.4(1%BSA+0.05%TritonX-100+0.05%Tween 20) 标记洗涤液：0.01M磷酸盐缓冲液pH7.4

抗体稀释液：0.01M磷酸盐缓冲液pH7.4(1%BSA+0.05%Tween 20)

染色液：醋酸铀（3-4g醋酸双氧铀+100ml50%甲醇）；柠檬酸铅pH12（1.33g硝酸铅+1.76g柠檬酸鈉+30mlddH2O）

2. 主要仪器：镍网（喷有方华膜和碳膜）、镊子、Parafilm、自制小环、冰箱（4℃至-35℃）、紫外聚合箱、培养皿、透射电镜、离子溅射仪、超薄切片机、恒温箱（28℃） 0.2二钾砷酸鈉缓冲液母液pH

免疫胶体金技术常见影响因素分析

自胶体金作为特殊标记物进行研究以来,建立的各种免疫胶体金技术以其特异性强、灵敏度高、操作简捷等特点,在医学、农牧业、环境及食品检测等领域被广泛应用。免疫胶体金技术的反应过程是一个由金颗粒、抗原与抗体动态结合的反应过程,在这个过程中每个环节的好坏都直接影响试验的成败。而试验过程中每个环节又受到很多因素的影响和制约,下面将影响免疫胶体金技术的因素作一分析,为成功制备胶体金检测产品提供参考。 1耗材的选择

1.1不同型号膜的筛选。硝酸纤维素膜的型号在试验中至关重要,作为反应载体影响到整个试验的成败。不同的生产厂家生产硝酸纤维素膜时使用的聚合物和表面活性剂的来源、类型和数量均大不相同,对生产出的膜的性能产生较大影响——膜的孔径和分布结构不同。膜孔径减小,膜的实际可用表面积递增,膜结合蛋白的量也递增;膜孔径越小,层析速度也越慢,金标复合物通过T线的时间就越长,反应也就越充分;因此膜孔径越小灵敏度越高,但是同时也减慢了跑板速度,增加了非特异性结合的机会,也就是假阳性越高。用于金标免疫快速试验的膜多为硝酸纤维素膜或硝酸纤维素/醋酸纤维素混合膜,不同的包被蛋白对膜有特定要求,试验者应根据蛋白质的性质选择适合孔径大小和分布结

上海师范大学

硕士学位论文

胶体金免疫层析法对AFP、CEA和FN的快速检测

姓名：韩继美

申请学位级别：硕士

专业：物理化学

指导教师：朱龙章

20090401

上海师范大学硕士学位论文摘要论文题目：胶体金免疫层析法对ＡＦＰ、ＣＥＡ和ＦＮ的快速检测

学科专业：物理化学

学位申请人：韩继美

指导老师：朱龙章

摘要

２０世纪８０年代，纳米科技在多学科交叉的基础上发展成为一门新兴学科，近年来，纳米技术不断向生命科学和医学领域渗透，利用纳米生物技术研究和解决其中的重大问题，推动纳米生物及相关技术的发展，正成为当前一个重要的前沿理论，其中纳米免疫技术在生命科学和医学领域中的应用更是倍受关注。纳米胶体金免疫层析方法（Ｇｏｌｄｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙａｓｓａｙ，ＧＩＣＡ）是２０世纪９０年代兴起的一种将胶体金免疫技术和色谱层析技术相结合的固相膜免疫分析方法。本文主要研究了胶体金免疫层析技术在检测甲胎蛋白、癌胚抗原和纤维连接蛋白等肿瘤标志物方面的应用。

（１）采用经典的Ｆｒｅｎｓ方法，用１％的柠檬酸三钠溶液还原氯金酸

溶液制备了２０ｎｍ、４０ｎｍ、７０ｒｉｍ－－－－种不同粒径的胶体金，实验结果表明２０ｎｍ、４０ｎｍ的胶体金比较适合做免疫层析实验。所制备的２０ｎｍ的胶体金，

JOURNALOFINSPECTIONANDQUARANTINE检验检疫学刊Vol.20No.22010年第2期

快速检测西尼罗病毒胶体金免疫层析试

纸条方法的建立

王彦芳

1,2

　姜宝芹　邢福彬　杨鹏飞　张丽萍　平芮巾　咸庆杰

222221,2

　胡孔新　岳启安

21

(1.潍坊医学院　山东潍坊　261053;2.中国检验检疫科学研究院)

摘要　[目的]建立一种能快速区分、简便诊断西尼罗病毒感染的胶体金免疫层析试纸条方法。[方法]

采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记西尼罗病毒NS1蛋白,采用双抗原夹心法制备胶体金免疫层析试纸条,对试纸条进行特异性和敏感性评价。[结果]15m;在敏感性上,该试纸条对阳性血清的检测较美国Focus公司商品化的ELI;89份阴性血清进行检测,试纸条检出9份阳性,ELISA试剂盒检出3.52%,特异性为89.89%。[结论],为进一步大规模应用奠

定了基础。

关键词　;;免疫层析法中图分类号.2

EstablishmentoftheRapidDetectionofWestNileViruswithGold-immunochromatography

WangYanfang

1,2

,JiangBaoqin,XingFubin,YangPeng

量子点与胶体金的性能比较

1 量子点的概念

理论分析表明，当半导体材料从体相逐渐减小至一定临界尺寸后，材料的特征尺寸在三个维度上都可与电子的德布罗意波长或电子平均自由程相比拟或更小时，电子在材料中的运动受到了三维限制，也就是说，电子的能量在三个维度上都是量子化的，称这种在三个维度上都受到限制的材料为量子点（quantum dots，QDs）。

量子点又称为半导体纳米晶体（nanocrystals，NCs）或半导体纳米粒子（nanoparticles，NPs），是一种由Ⅱ-Ⅵ（CdSe，CdTe，CdS，ZnTe，ZnO）、Ⅲ-Ⅴ族（InAs、GaSb）和Ⅳ族（Si、Ge）元素组成的纳米颗粒。目前研究较多的主要是CdS，CdSe，CdTe等，因为他们具有宽带隙而表现出优异的荧光特性。 2 量子点的光学性质

当半导体纳米粒子的尺寸与其激子半径（exciton radius 约5-10nm）相近时，由于电子波函数的量子限域效应(quantunm confinement effect),半导体纳米粒子能带的有效带隙（hand gap）随粒子半径减小而增加，导致吸收光谱和荧光光谱蓝移。其光谱性质主要取决于其半径大小，通过改变粒子的大小可获得从UV到近红

胶体金免疫层析检测卡对肿瘤标志物进行检测

胶体金免疫层析检测卡的制备和应用 （1）胶体金免疫层析检测卡的制备： 工艺流程：

将标记好的胶体金喷在结合垫上 标记 标记有抗体的 组装 制备金纳米 处理样品垫

金纳米粒子 粒子 抗体 试纸条 在NC 膜上包被上抗体

组装成检测卡

a. 用柠檬酸三钠还原法还原氯金酸制备金纳米粒子； b. 在金纳米粒子上标记单克隆抗体；

c. 将标记号的胶体金喷在结合垫上，样品垫有处理液处理，NC膜上喷上抗体一起干燥之

后按照上图进行组装，然后切成试纸条； d. 将组装好的试纸条装入检测卡，制成产品； e. 检测时在注样孔里面加入样品。 （2）胶体金免疫层析检测卡的应用：

胶体金免疫层

胶体金免疫层析法检测

玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究

刘　波　江晓娣　黄慧艳

（）武汉市粮油食品中心检验站　４３００２１

＊

摘　要　采用乙酸乙酯提取法对玉米样品前处理，然后用胶体金免疫层析法检测其中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量。该法简便快捷，与ＨＰ因此采ＬＣ国家标准法相比检测结果一致，用此法可加强粮食的卫生监管。

关键词　玉米　脱氧雪腐镰刀菌烯醇　胶体金

ＯＮ是最常见的一种污　　脱氧雪腐镰刀菌烯醇Ｄ

染粮食、饲料和食品的霉菌毒素之一，严重影响人和牲畜的健康。它主要是由链孢霉属真菌在缺乏营养

１］

，物质时产生的次级代谢产物［其结构为雪腐镰刀

由于其使用的方便疫层析法是免疫层析法的一种，

快捷性，检测的准确性愈来愈受到人们的重视；该法滴加提取液到检的原理是通过以胶体金为示踪物，

测孔中，抗原抗体反应生成不同深浅的颜色来判定样品中ＤＯＮ的含量。胶体金免疫层析法操作简检测速度快，很适合现场检测，得到了愈来愈多单，的应用。

，菌烯醇（的４－脱氧衍生物，所以命ｎｉｖａｌｅｎｏｌＮＩＶ），名为脱氧雪腐镰刀菌烯醇（４－ｄｅｏｘｒｉｂｏｎｕｃｌｅｎｏｌｙ

［２］

。许多粮谷类都可以受到污染，如小麦、大ＤＯＮ）

麦、燕麦和玉米等。ＤＯＮ对粮谷类的污染状况与产温度、湿度、通风和日照等因素有关。这种

Part I S-1 NINATE 411 S-2 Pluorinic F68 S-3 Zonyl FSN 100 S-4 Aerosol OT 100% S-5 GEROPON T-77 S-6 BIO-TERGE AS-40 S-7 STANDAPOLES-1 S-8 Benzalkonium chloride S-9 Tetronic 1307

Part II Surfactant Toolkit Contents: (subject to change without notice-see insert with each kit) 1. Amine alkylbenzene sulfonate, Trade Name: NINATE 411, Class A, MW: 385, Function: Solvent compatible,good enulsifier.

2. Poly(oxyethylene-co-oxypropylene) block polymer: Trade Name:Pluorinic (tm) F68, Class N, MW 8400, Function: excellent solubili

货号产名称品规格

GC--UL10 伦特克罗速快测检卡5 卡0盒/ G-LCP-0 1伦克特罗速检快卡测4 0卡/盒G -LCF-0 克伦特罗快1速测卡 检04/盒卡 GC--LB0 1克伦特罗快检速卡 测10卡0/袋，0卡2/盒 -GLCU04-克 伦特罗快检速测 50卡卡/ G盒CL-U0-7克 伦特罗快速检卡 50测/卡 G-R盒ACU-01莱克 巴多快胺速检卡测(型)Ⅰ20卡 盒 /-GRA-U05C 克莱多胺巴速快检测卡2 0卡盒/G -RACU02-莱 多巴克胺快检速卡测 0卡/盒、205/盒、卡10卡/袋0G -AR-CP01莱 多巴胺快克检速测卡 0卡2/、10盒0卡袋/ -RGC-F0A 莱1克多胺快巴检速测卡 4卡0/盒 -SALG-0U5 丁沙醇快胺速测检卡50 卡盒 G-/AL-SU0 沙丁胺醇2速检快卡测5 卡/0 G-盒AL-SP04沙丁胺 醇快速测卡检40 卡/盒G- SL-F0A 沙丁胺1醇快检测卡 40卡/盒速 GS-AL-01B沙丁 胺醇速检测卡 快50/卡盒G- CR-U0 克伦1特罗莱-多巴克双联卡 胺02/卡 盒G-R-US2 莱克多0巴胺-丁沙胺醇双卡 联02卡盒/ -GSCU-1 0伦特克罗沙-胺丁

促黄体生成素（LH）检测试剂盒（胶体金免疫层析法）

适用范围：本产品用于体外半定量检测人尿液样本中促黄体生成素（LH）的含量。

1.1 包装规格

1人份/盒、2人份/盒、6人份/盒、10人份/盒、25人份/盒。

1.2 主要组成

本产品由包装规格相应人份的检测试剂盒、干燥剂和尿杯组成。

检测试剂盒由三条不同临界值的检测试纸条和塑料卡塞两部分组成，检测试纸主要由PVC塑料底板、样品垫、聚酯膜、硝酸纤维素膜和吸水板组合而成，聚酯膜上喷有胶体金标记的鼠抗人促黄体生成素单克隆抗体，硝酸纤维素膜上分别包被了鼠抗人促黄体生成素单克隆抗体和羊抗鼠多克隆抗体。

2.1 物理性状

2.1.1 外观

应整洁完整、无毛刺、无破损、无污染。

2.1.2 膜条宽度

应≥2.5mm。

2.1.3 液体移行速度

应≥10mm/min。

2.2 准确性与重复性

用本产品检测10 mIU/mL（-）、25mIU/mL（+）、45mIU/mL（++）和65mIU/mL （+++）四种浓度的促黄体生成素质控液，每种浓度的质控液检测≥20次，检测结果与相应质控液标示值相差同向不超过一个量级，不得出现反向相差，阴性质

控溶液不得出现阳性结果，阳性质控溶液不得出现阴性结果。且各浓度检测结果的一致性不低于90