微生物病例分析设计实验的目的

微生物病例二分段[1]-第12周讨论

中山大学光华口腔医学院 2014级口腔一班 口腔医学（七年制） 谢伟鸿

病例回顾：患者男性，19岁，广州某大学二年级学生。

主述：昨晚宵夜食用了生牛肉刺身，今早开始恶心、腹痛，已有1次呕吐，7次腹泻，腹泻量多，呈稀水样。

病史：既往体检无胃肠道慢性炎症或溃疡史，无过敏史，无消化道肿瘤家族史。近期大便正常，此前4小时突然出现恶心、阵发性腹痛与腹泻，无寒颤。近期，未曾接触过有此类症状患者，未长期服用过抗生素。

查体：体温38.p1℃，血压134/75 mmHg，脉搏100次/分，呼吸16次/分。腹部无反跳痛，上腹轻微压痛。肝脾未触及。心肺正常。

实验室检查：大便常规：粪便稀液状、色淡、有腥臭，镜检见中性粒细胞，极少红细胞。血常规：白细胞6.7×109/L，其中淋巴细胞占32.3％，中性粒细胞占58.8％。 问题讨论：

1．总结患者的主要临床症状、查体及实验室检查异常。 2．初步诊断是什么？应与哪些疾病做鉴别？ 3．可以引起该病的病原体主要有哪些？ 4．取何种标本，如何进行微生物学检查？ 【第一题】

恶心、腹痛、呕吐（1次），腹泻（7次）；腹泻量多，呈稀水样。 发烧（体温38.1℃），脉搏加快（100次/分），

病例一

病例资料

? 一般资料:患者女，27岁，职业导游。渐觉头晕乏力，活动后心慌一年近日加重入院。

平时饮食以素食为主，月经不规律，持续时间较长，量较多。

? 查体:T 36.6oC，P 110次/min，R 20次/min，BP 14/9.3kpa。面色苍白，皮肤粘膜无出血

点，巩膜无黄染，浅表淋巴结不大。胸骨无压痛，心肺无异常，肝脾未触及。

? 一般血液检查:Hb 78g/L，RBC 2.8*1012/L，Hct 0.27，MCV 73fl，MCH 23pg，MCHC

270g/L，RDW 17.5%，WBC 8.8*109/L，中性粒细胞0.70，淋巴细胞0.20，嗜酸性粒细胞0.04，网织红细胞0.02，血小板140*109/L。 ? 外周血涂片检查 问题

1.此病人最可能的诊断是什么贫血？诊断依据有哪些？ 2.还需做哪些检查以明确诊断？

病例二

病例资料

? 一般资料:女性患者，41岁，发热，尿频、尿急3天。门诊就诊。既往长期感疲惫，月

经量多，每次持续10天左右。其他无特殊。否认长期服药。

? 查体:T 神清，贫血貌。血压95/66mmHg，双肾区叩痛。肝、脾、淋巴结未及。无其他

异常

? 一般血液检查:Hb 62g/L，RBC 2.9

几个病原病例

◆大肠埃希菌

4岁男孩在随母亲旅游中，进食小店卖的水果沙拉，回家2天后，出现严重腹部疼痛，腹泻次数不断增加，且多次便血，伴发热、呕吐，到医院急诊，检查有溶血性贫血及血小板减少等溶血性尿毒综合症。

思考题：

1.最可能的病原菌是什么？

2.针对该病例应做哪些微生物学检查？

提示：

4岁患儿有进食水果沙拉病史，2天后出现严重腹痛，大便次数不断增加，且多次便血伴发热、呕吐，检查有溶血性贫血及血小板减少等溶血性尿毒综合症。以上症状提示最可能的病原菌是大肠埃希菌O157:H7。

应及时进行常规微生物学检查并快速进行毒力和血清型等特征鉴定以确定防治措施。

◆志贺菌属

患者，男，23岁。急性腹痛2天，每天脓血便10次左右，有明显里急后重感，肠鸣音亢进，体温38℃，血压正常，白细胞增高，未见阿米巴原虫。 思考题：

1.可初步诊断为哪种疾病？

2.采用哪种方法能进行快速诊断？

提示：

急性腹痛2天，每天10次左右脓血便，有明显里急后重感，肠鸣音亢进、低热等临床表现，初步诊断为急性细菌性痢疾

急性细菌性痢疾起病急，病情进展快，进行快速诊断显得特别重要。此案例可根据各医院开展的以上四种快速诊断方法进行快速诊断。

◆沙门菌属

患者，女，25岁。发热6天入院，食欲不振、乏力、腹胀。查体：

◆大肠埃希菌

4岁男孩在随母亲旅游中，进食小店卖的水果沙拉，回家2天后，出现严重腹部疼痛，腹泻次数不断增加，且多次便血，伴发热、呕吐，到医院急诊，检查有溶血性贫血及血小板减少等溶血性尿毒综合症。 思考题：

1.最可能的病原菌是什么？

2.针对该病例应做哪些微生物学检查？ 提示：

4岁患儿有进食水果沙拉病史，2天后出现严重腹痛，大便次数不断增加，且多次便血伴发热、呕吐，检查有溶血性贫血及血小板减少等溶血性尿毒综合症。以上症状提示最可能的病原菌是大肠埃希菌O157:H7。

应及时进行常规微生物学检查并快速进行毒力和血清型等特征鉴定以确定防治措施。

◆志贺菌属

患者，男，23岁。急性腹痛2天，每天脓血便10次左右，有明显里急后重感，肠鸣音亢进，体温38℃，血压正常，白细胞增高，未见阿米巴原虫。 思考题：

1.可初步诊断为哪种疾病？

2.采用哪种方法能进行快速诊断？ 提示：

急性腹痛2天，每天10次左右脓血便，有明显里急后重感，肠鸣音亢进、低热等临床表现，初步诊断为急性细菌性痢疾

急性细菌性痢疾起病急，病情进展快，进行快速诊断显得特别重要。此案例可根据各医院开展的以上四种快速诊断方法进行快速诊断。

◆沙门菌属

患者，女

◆大肠埃希菌

4岁男孩在随母亲旅游中，进食小店卖的水果沙拉，回家2天后，出现严重腹部疼痛，腹泻次数不断增加，且多次便血，伴发热、呕吐，到医院急诊，检查有溶血性贫血及血小板减少等溶血性尿毒综合症。 思考题：

1.最可能的病原菌是什么？

2.针对该病例应做哪些微生物学检查？ 提示：

4岁患儿有进食水果沙拉病史，2天后出现严重腹痛，大便次数不断增加，且多次便血伴发热、呕吐，检查有溶血性贫血及血小板减少等溶血性尿毒综合症。以上症状提示最可能的病原菌是大肠埃希菌O157:H7。

应及时进行常规微生物学检查并快速进行毒力和血清型等特征鉴定以确定防治措施。

◆志贺菌属

患者，男，23岁。急性腹痛2天，每天脓血便10次左右，有明显里急后重感，肠鸣音亢进，体温38℃，血压正常，白细胞增高，未见阿米巴原虫。 思考题：

1.可初步诊断为哪种疾病？

2.采用哪种方法能进行快速诊断？ 提示：

急性腹痛2天，每天10次左右脓血便，有明显里急后重感，肠鸣音亢进、低热等临床表现，初步诊断为急性细菌性痢疾

急性细菌性痢疾起病急，病情进展快，进行快速诊断显得特别重要。此案例可根据各医院开展的以上四种快速诊断方法进行快速诊断。

◆沙门菌属

患者，女

环境因素 对微生物生长的影响

班级：食品科学与工程102班

指导老师：郭玉宝 学号：3100401214 姓名：何月

实验目的：

1、了解抗生素对微生物生长的影响，学习抗菌谱实验的基本方法。

2、了解常用化学消毒剂对微生物生长的影响。 实验原理：

微生物的生长繁殖受外界因素的影响。物理，化学，生物及营养等不同环境因素影响微生物生长繁殖的机制不同，而，不同类型微生物对同一环境因素的适应能力也有差别。 1、生物因素

在自然界中普遍存在网速间的颉颃现象，许多微生物可以产生抗生素，能选择性的一致或杀死其他微生物。不同抗生素的抗菌谱是不同的。当滤纸条上的抗生素溶液在琼脂平板上向四周扩散后可形成抗生素浓度由高到低的梯度，将不同试验菌与滤纸条划线接种。培养后，根据抑菌带的长短可判断出该抗生素对不同试验菌生长的影响程度，初步确定其抗菌谱。 2、化学消毒剂

常用的化学消毒剂包括有机溶剂、重金属盐、卤族元素及其化合物。燃料和表面活性剂。 实验器材： 1、菌种

大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌 2、培养基

牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 3、溶液和试剂

青霉素溶液、无菌生理盐水、2.5%碘酒、5%石碳酸、1%来苏尔、75%乙醇、0.25%新洁尔灭 4、仪器和其他用品

情境一：分离纯化和选育生产菌种 发酵工艺技术教材

项目2 保藏微生物菌种操作

◆ 学习目标 1.了解各种菌种保藏的基本原理和优缺点； 2.学会根据菌种的特点选择相应的保藏方法；学会采用不同方法进行保藏菌种操作。 菌种是从事微生物学以及生命科学研究的基本材料，特别是利用微生物进行有关生产，如抗生素、氨基酸、酿造等工业，更离不开菌种。所以菌种保藏是进行微生物学研究和微生物育种工作的重要组成部分。其任务首先是使菌种不死亡，同时还要尽可能设法把菌种的优良特性保持下来而不致向坏的方面转化。 当然保藏菌种使其不变异亦是相对而言的。实际上没有一种方法可使菌种绝对不变化，所以研究菌种保藏就是要采用最合适的保存方法，使菌种的变异和死亡减少到最低限度。

菌种是国家的重要资源，世界各国对这项资源都给予极大重视，很早就设臵了各种专业性的保存机构，如ATCC、NRRL等。1980年我国成立了中国微生物菌种保藏委员会。 1 基础知识

菌种保藏主要是根据菌种的生理生化特点，人工创造条件，使孢子或菌体的生长代谢活动尽量降低，以减少其变异。一般可通

实验二 理化因子对微生物的影响

实验目的：

1 了解紫外线对微生物生长的影响。 2 了解不同化学物质对微生物生长的影响。 3 了解理化因素抑制或杀死微生物的试验方法。 实验原理：

1 紫外线对微生物有明显的致死作用，使细菌致死的紫外线波长是200-310nm，而以260nm左右的紫外线具有最高杀菌效应。作用机理是诱导胸腺嘧啶二聚体的生成，从而抑制DNA的复制。经紫外线照射受损伤的细菌细胞，如立即暴露于可见光下，则有一部分可恢复正常活力，称为光复活现象。

2 一些化学药剂对微生物的生长有抑制或杀死作用，因此，在实验室内及生产上常利用某些有效的化学药剂进行杀菌或消毒。不同的化学药剂对不同的细菌，杀菌能力并不相同，而一种化学药剂对不同细菌的杀菌效果也不一致。 实验材料：

1 菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌。 2 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基。

3 器材与试剂：滤纸、镊子、培养皿、涂棒、试管支。 75%乙醇、 1%结晶紫、 0.2mg/L青霉素、 0.1%KMnO4、 实验方法： 一 紫外线杀菌实验

1 将已灭菌冷却到50℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基倒入无菌培养皿中，水平放置待凝固。

2 用无菌吸管吸取0.1ml培养24h的枯草芽孢杆菌菌液加入上述平板

1、 牛肉膏蛋白胨培养基属于何种培养基？

属于天然培养基。

2、 培养基配制完成后，为什么必须立即灭菌？若不能及时灭菌应如何处理？已灭菌的培养

基如何进行无菌检查？

①培养基配置完成后就具备了营养功能，在空气中会有很多孢子等落进去，如果放的时间长了，等微生物生长了，营养成分就降低了，而且营养结构也变化了。再就是有些特殊的培养基，里面各种物质不灭菌也就是不加热的话，彼此反应，这样就达不到最后的营养结构了。 ②培养基不及时灭菌，一般就不能再用了，你可以倒进垃圾桶或者指定的地方，也可以把它灭菌后用于比较低级的微生物培养。 节约起见，做肥料了啥的都可以啊。

③通常是放在37℃的恒温箱中一两天后 培养基上没有生长任何微生物的就可以使用（若有微生物则是以菌落出现的 肉眼可以看见的）。

3、 为什么湿热灭菌比干热灭菌法更有效？

① 热蒸汽对细胞成分的破坏作用更强。水分子的存在有助于破坏维持蛋白质三维结构的氢键和其他相互作用弱键，更易使蛋白质变性；

② 热蒸汽比热空气穿透力强，能更有效地杀灭微生物；

③ 蒸汽存在潜热。当气体转变为液体时可放出大量热量，故可迅速提高灭菌物体温度。

4、 高压蒸汽灭菌开始之前，为什么要将锅内冷空气排尽？灭菌完毕后，为什么待压力降低

到“0”时才能打开

1958年某城市炼钢工人不慎大面积烧伤，并造成细菌性感染，经检测为铜绿 假单胞菌(绿脓杆菌)，使用了当时仅有的几种抗生素治疗，未取得明显疗效，后经某医学院分离出此菌，并找到该菌对应的特异性噬菌体，经该噬菌体治疗后取得明显疗效。

思考题：噬菌体治疗后获得明显疗效的相关机制及其此案例给予的启示。

王小姐前段时间嘴角边长了一个小疖，红肿间可见一小脓点，自觉不好看，就对着镜子将小、肿疖挤了。可第二天起来发觉面部红肿，并恶寒、发热、头痛、全身不适，到医院后出现意识模糊，经医生检查，诊断为颅内化脓性感染。

思考题：患者面部疖肿为何导致颅内化脓性感染?

患者，男，72岁。 因反复咳嗽、咳痰20余年，加重5天就诊，临床诊断为慢性支气管炎急性发作。该患者曾用过的抗菌药物主要包括复方新诺明、氨苄西林、左氧氟沙星、阿奇霉素、头孢曲松、头孢氨苄等，痰标本微生物学检查发现肺炎克雷伯菌，药物敏感试验结果显示该病原菌对复方新诺明、氨苄西林、左氧氟沙星、阿奇霉素、头孢曲松、头孢氨苄均为耐药。

思考题：

1．该患者曾用过的抗菌药物分别属于哪些种类?

2．该细菌对这些不同种类抗菌药物形成耐药性的机制是什么?

3．在患者的后续治疗中应当