基础生物学实验教程

《基础生物学实验》备课笔记 基础生物学实验》 生物学实验
生物工程系
1
普通生物显微镜的构造及 构造及使用方法 实验一 普通生物显微镜的构造及使用方法 一、实验目的与要求 1 了解普通光学显微镜的构造和性能 2 掌握普通光学显微镜的使用方法 二、显微镜的主要构造 普通光学显微镜的构造主要分为三部分：机械部分、照明部分和光学部分。
1.目镜
2.镜筒
3. 转换器 4. 物镜 5. 载物台 6. 聚光器 9.反光镜 10. 底座 11. 镜臂 14. 粗调焦旋钮
7. 虹彩光圈
8. 聚光镜调节钮 13. 细调焦旋钮
12. 标本片移动钮 17.光源
15.电源开关 16.光亮调节钮
（一）机械部分 1.镜座：是显微镜的底座，用以支持整个镜体。 2.镜柱：是镜座上面直立的部分，用以连接镜座和镜臂。 3.镜臂：一端连于镜柱，一端连于镜筒，是取放显微镜时手握部位。 4.镜筒：连在镜臂的前上方，镜筒上端装有目镜，下端装有物镜转换器。 5.物镜转换器(旋转器)：接于棱镜壳的下方，可自由转动，盘上有 3－4 个圆孔， 是安装物镜部位，转动转换器，可以调换不同倍数的物镜，当听到碰叩声 时，方可进行观察，此时物镜光轴恰好对准通光孔中心，光路接通。 6.镜台(载物台)：在镜筒下

分子生物学实验理论与操作教程

分子生物学实验理论与操作教程

中国农科院研究生院 中国生化及分子生物学学会 植物病虫害生物学国家重点实验室

二零零四年七月

目 录

前 言-----------------------------------------------------------I 第一部分 核酸提取----------------------------------------------1 实验一：基因组DNA提取--------------------------------------------1 实验二：总RNA提取------------------------------------------------3 第二部分 亚克隆技术---------------------------------------------8 实验三：质粒DNA提取----------------------------------------------8 实验四：DNA片段的酶切--------------------------------------------9 实验五：DNA片段的酶修饰-脱磷----------

生物学大实验（硕士研究生实验课内容）

一． 细胞培养技术与方法 1. 教学目的与要求：

1) 了解细胞培养室的设置，设备和无菌操作。 2) 掌握细胞培养用器械的清洗与消毒方法。 3) 掌握细胞培养的实验程序 。

4) 掌握细胞的复苏、细胞的计数、细胞的传代培养、细胞的冻存方法。

2. 教学内容：

（1）实验器材的清洗包装和消毒：

一）玻璃器械洗消：

（一）新的玻璃器皿的洗消： 1.自来水刷洗，除去灰尘。

2.烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、砷等物。

3.刷洗、烘干：12小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。

4.泡酸、清洗：用清洁液（重铬酸钾120g：浓硫酸200mL：蒸馏水1000mL）浸泡12小时，然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗15次，最后蒸馏水冲洗3-5次，用双蒸水过3次。

5.烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸（油光纸）包装。 6.高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子，打开开关和安全阀，当蒸气成直线上升时，关闭安全阀，当指针指向15磅时，维持20-30分钟。 7.高压消毒后烘干 。

（二）旧的玻璃器皿的洗消：

1.刷洗、烘干：使用

生物学大实验（硕士研究生实验课内容）

一． 细胞培养技术与方法 1. 教学目的与要求：

1) 了解细胞培养室的设置，设备和无菌操作。 2) 掌握细胞培养用器械的清洗与消毒方法。 3) 掌握细胞培养的实验程序 。

4) 掌握细胞的复苏、细胞的计数、细胞的传代培养、细胞的冻存方法。

2. 教学内容：

（1）实验器材的清洗包装和消毒：

一）玻璃器械洗消：

（一）新的玻璃器皿的洗消： 1.自来水刷洗，除去灰尘。

2.烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、砷等物。

3.刷洗、烘干：12小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。

4.泡酸、清洗：用清洁液（重铬酸钾120g：浓硫酸200mL：蒸馏水1000mL）浸泡12小时，然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗15次，最后蒸馏水冲洗3-5次，用双蒸水过3次。

5.烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸（油光纸）包装。 6.高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子，打开开关和安全阀，当蒸气成直线上升时，关闭安全阀，当指针指向15磅时，维持20-30分钟。 7.高压消毒后烘干 。

（二）旧的玻璃器皿的洗消：

1.刷洗、烘干：使用

普通生物学实验（三）

教 案

目 录

35、细菌的简单染色、革蓝氏染色???????????????????????3 36、细菌的芽孢、荚膜、鞭毛染色鉴定及运动性观察???????????????5 37、微生物细胞形态及菌落特征观察??????????????????????11 38、培养基制作、灭菌与无菌操作接种技术??????????????????? 19 39、微生物的分离纯化及稀释平板菌落计数???????????????????35 附：微生物的菌种保藏?????????????????????????????41 40、微生物鉴定中常用的生化反应……………………………………………………………45 附：微生物自动鉴定仪鉴定???????????????????????????48 41、微生物细胞大小测定及显微镜直接计数 ??????????????????51 42、乳酸菌分离及食用乳酸制作 ???????????????????????55 ①乳酸菌分离与鉴定?????????????????????????????55 ②食用乳酸制作???????????????????????????????55

普通生物学实验（三）

教 案

目 录

35、细菌的简单染色、革蓝氏染色???????????????????????3 36、细菌的芽孢、荚膜、鞭毛染色鉴定及运动性观察???????????????5 37、微生物细胞形态及菌落特征观察??????????????????????11 38、培养基制作、灭菌与无菌操作接种技术??????????????????? 19 39、微生物的分离纯化及稀释平板菌落计数???????????????????35 附：微生物的菌种保藏?????????????????????????????41 40、微生物鉴定中常用的生化反应……………………………………………………………45 附：微生物自动鉴定仪鉴定???????????????????????????48 41、微生物细胞大小测定及显微镜直接计数 ??????????????????51 42、乳酸菌分离及食用乳酸制作 ???????????????????????55 ①乳酸菌分离与鉴定?????????????????????????????55 ②食用乳酸制作???????????????????????????????55

绪论

1. 什么是微生物?它包括哪些类群?

答:微生物是一切肉眼看不见 或看不清的微小生物的总称.

包括①原核类的细菌`放线菌`蓝细菌’支原体`立克次氏体和衣原体;②真核类的真菌`原生动物`和显微藻类,以及属于非细胞类的病毒和亚病毒.

2.人类迟至19世纪才真正认识微生物,其中主要克服了哪些重大障碍?

答:①显微镜的发明,②灭菌技术的运用，③纯种分离技术，④培养技术。

3.简述微生物生物学发展史上的5个时期的特点和代表人物.

答:史前期（约8000年前—1676），各国劳动人民，①未见细菌等微生物的个体；②凭实践经验利用微生物是有益活进行酿酒、发面、制酱、娘醋、沤肥、轮作、治病等）

初创期（1676—1861年），列文虎克，①自制单式显微镜，观察到细菌等微生物的个体；②出于个人爱好对一些微生物进行形态描述；

奠基期（1861—1897年），巴斯德， ①微生物学开始建立；②创立了一整套独特的微生物学基本研究方法；③开始运用“实践——理论——实践”的思想方法开展研究；④建立了许多应用性分支学科；⑤进入寻找人类动物病原菌的黄金时期；

发展期（1897—1953年），e.buchner，①对无细胞酵母菌“酒化酶”进

实验一 显微镜的结构及使用

[实验目的]

（一）熟悉显微镜的结构及各部件性能。 （二）掌握显微镜的使用方法。 （三）了解显微镜的维护方法。 [实验原理]

虽然显微镜的目镜和物镜的结构很复杂，但它的作用相当于一个凸透镜，其成像原理和光路图如图1所示，被检物体AB放在物镜（O1）下方的1—2倍焦距之间，则在物镜（O1）后形成一个倒立的放大实像A1B1，这个实像正好位于目镜（O2）的下焦点之内，通过目镜后形成一个放大的虚像A2B2，这个虚像通过调焦装置使其落在眼睛的明视距离处，即25cm,使所看到的物体最清晰，也就是说虚像A2B2是在眼球晶状体的两倍焦距之外，通过眼球后在视网膜形成一个倒立的A2B2缩小像A3B3。

[实验器材]擦镜纸 字母装片 羊毛交叉擦片 普通光学显微镜 二甲苯 香柏油 三 内容与方法：

普通光学显微镜(Microscope)的外形和结构因类型不同略有差异，但基本结构和功能是相似的。（图2） （一） 1.

微镜的基本结构及功能：光学显微镜由机械部分、照明部分和光学部分构成。 机械部分：

（1）镜座：位于底部的金属座。一般为马蹄形，用以支持和稳定整个镜体。 （2）镜柱：镜座与镜臂相连的短柱。

（3）镜臂：镜柱上方弯曲部分

实验一 线粒体和液泡系的超活染色

[实验目的]

1、学习一些细胞的超活染色技术。

2、通过超活染色观察活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。 [实验原理]

活体染色是指对生活有机体的细胞或 的某些结构组织能着色但又无毒害的一种染色方法。它的目的是显示生活细胞内的某些结构。而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。

但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。一般是以碱性染料最为适用，可能因为它们具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。站那思虑B和中性红两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。 [仪器、材料与试剂]

1、仪器：显微镜、恒温水浴锅

2、材料：洋葱鳞茎内表皮细胞、黄豆幼根根尖、载玻片、盖玻片、10ml量筒、吸管、吸水纸

黄豆幼根根尖培养方法：将黄豆种子用温水泡胀后，培养在培养皿内多层润湿的滤纸上（水稍淹住黄豆为宜），30℃使其发芽，3~4天后，胚根伸长到1cm以上。 3、试剂：

⑴ Ringe

实验一 线粒体和液泡系的超活染色

[实验目的]

1、学习一些细胞的超活染色技术。

2、通过超活染色观察活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。 [实验原理]

活体染色是指对生活有机体的细胞或 的某些结构组织能着色但又无毒害的一种染色方法。它的目的是显示生活细胞内的某些结构。而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。

但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。一般是以碱性染料最为适用，可能因为它们具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。站那思虑B和中性红两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。 [仪器、材料与试剂]

1、仪器：显微镜、恒温水浴锅

2、材料：洋葱鳞茎内表皮细胞、黄豆幼根根尖、载玻片、盖玻片、10ml量筒、吸管、吸水纸

黄豆幼根根尖培养方法：将黄豆种子用温水泡胀后，培养在培养皿内多层润湿的滤纸上（水稍淹住黄豆为宜），30℃使其发芽，3~4天后，胚根伸长到1cm以上。 3、试剂：

⑴ Ringe