限制性内切酶酶切位点保护碱基
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限制性内切酶酶切位点
限制性内切酶酶切位点
Acc65I识别位点
AccI识别位点
AciI识别位点
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AcuI识别位点
AfeI识别位点
AflII识别位点
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AgeI识别位点
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AleI识别位点
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ApaI识别位点
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BaeI识别位点
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限制性内切酶酶切位点
BbvCI识别位点
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限制性内切酶酶切位点
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限制性内切酶酶切位点汇总
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常用限制性内切酶酶切位点汇总
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常用的限制性内切酶2008
常用的限制性内切酶
内切酶 ApaⅠ BamHⅠ BanⅡ HgiJⅡ BciT130Ⅰ M. EcoRⅡ MvaⅠ BstOⅠ BglⅠ BglⅡ BmgT120Ⅰ AsuⅠ Cfr13Ⅰ Sau96Ⅰ BmeT110 AvaⅠ BseJⅠ BspT104Ⅰ AsuⅡ NspⅤ BstBⅠ Csp45Ⅰ BspT107Ⅰ HgiCⅠ BanⅠ BstPⅠ BstEⅡ EcoO65Ⅰ Eco91Ⅰ DraⅠ AhaⅢ Eco24Ⅰ Eco72Ⅰ Eco88Ⅰ EcoO109Ⅰ DraⅡ 酶切位点 GGGCCC CCCGGG GGATCC CCTAGG G(A/G)GC(TC)C C(T/C)CG(A/G)G CC(A/T)GG GG(T/A)CC GCCNNNNNGGC CGGNNNNNCCG AGATCT TCTAGA GGNCC CCNGG C(T/C)CG(A/G)G G(A/G)GC(T/C)C GATNNNNATC CTANNNNTAG TaKaRa 2000 U/120元 2000 U/120元 500 U/120元 MBI TOYOBO 1500 U/120元 600 U/120元 500 U/120元
常用的限制性内切酶2008
常用的限制性内切酶
内切酶 ApaⅠ BamHⅠ BanⅡ HgiJⅡ BciT130Ⅰ M. EcoRⅡ MvaⅠ BstOⅠ BglⅠ BglⅡ BmgT120Ⅰ AsuⅠ Cfr13Ⅰ Sau96Ⅰ BmeT110 AvaⅠ BseJⅠ BspT104Ⅰ AsuⅡ NspⅤ BstBⅠ Csp45Ⅰ BspT107Ⅰ HgiCⅠ BanⅠ BstPⅠ BstEⅡ EcoO65Ⅰ Eco91Ⅰ DraⅠ AhaⅢ Eco24Ⅰ Eco72Ⅰ Eco88Ⅰ EcoO109Ⅰ DraⅡ 酶切位点 GGGCCC CCCGGG GGATCC CCTAGG G(A/G)GC(TC)C C(T/C)CG(A/G)G CC(A/T)GG GG(T/A)CC GCCNNNNNGGC CGGNNNNNCCG AGATCT TCTAGA GGNCC CCNGG C(T/C)CG(A/G)G G(A/G)GC(T/C)C GATNNNNATC CTANNNNTAG TaKaRa 2000 U/120元 2000 U/120元 500 U/120元 MBI TOYOBO 1500 U/120元 600 U/120元 500 U/120元
实验二__质粒DNA的限制性内切酶酶切
遗传分子生物学实验
质粒DNA DNA的限制性内切酶酶切 实验二 质粒DNA的限制性内切酶酶切
遗传分子生物学实验
一 实验目的了解限制性内切酶作用的原理、特点和酶切质粒DNA的试验方法 了解限制性内切酶作用的原理、特点和酶切质粒DNA的试验方法 DNA
限制性核酸内切酶：是一类能识别双链DNA分子特异性核酸序列的 限制性核酸内切酶：是一类能识别双链DNA分子特异性核酸序列的 DNA DNA水解酶。是体外剪切基因片段的重要工具，所以常常与核酸聚合酶、 DNA水解酶。是体外剪切基因片段的重要工具，所以常常与核酸聚合酶、 水解酶 连接酶以及末端修饰酶等一起称为工具酶。 连接酶以及末端修饰酶等一起称为工具酶。限制性核酸内切酶不仅是 DNA重组中重要的工具，而且还可以用于基因组酶切图谱的鉴定。 DNA重组中重要的工具，而且还可以用于基因组酶切图谱的鉴定。 重组中重要的工具
遗传分子生物学实验
第一类( 第一类(I型)限制性内切酶能识别专一的核苷酸顺序，并在识别点 限制性内切酶能识别专一的核苷酸顺序， 附近的一些核苷酸上切割DNA分子中的双链，但是切割的核苷酸顺序没 附近的一些核苷酸上切割DNA分子中的双链， DNA分子中的双链 有专一性，是随机的。这类限制性内切
实验五 DNA的限制性酶切和电泳
实验五 DNA的限制性酶切和琼脂糖电泳
一、实验目的
掌握DNA的限制性酶切的基本原理 和琼脂糖凝胶电泳的基本操作技术
二、实验原理 1、DNA的限制性酶切
限制性内切酶是基因操作中不可缺少的工具酶，它能够识别双链DNA的特定位点并切开DNA，这个特定位点是一段具有旋转对称结构的DNA片段。。
绝大多数的限制酶识别长度为4~8个核苷酸且呈二重对称的特异序列。EcoRI的识别序列是G↓AATTC，BmHI的识别序列是G↓GATCC，HindIII的识别序列是A↓AGCTT。
每种限制性内切酶都有特定的反应条件，如特定的pH范围，缓冲液组分，温育温度等，具体的使用也可参考有关的工具书或文献或产品说明。一般温度37℃，pH7.5~8.0对大多数酶来讲是适合的，但缓冲液的组分则变化很大，典型的组分应有Tris、NaCl、MgCl2，和巯基试剂(如巯基乙醇或二硫苏糖醇)。
典型的反应体系中包括lμg或更少的DNA和1单位酶以及合适的反应介质。反应总体积通常控制在20和50μ之间，反应时间在1小时，而反应的终止则由EDTA溶液的加入完成，因为它能鳌合核酸酶活性所必需的金属离子。
2、DNA的琼脂糖电泳
DNA的电泳有琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺电泳，它
酶切位点保护碱基表新
PCR设计引物时酶切位点的保护
切割率% 酶 Acc I 寡核苷酸序列 2 hr GGTCGACC CGGTCGACCG CCGGTCGACCGG 0 0 0 0 >90 >90 >90 >90 >90 50 >90 >90 10 >90 >90 0 75 25 0 0 50 0 0 25 25 0 0 >90 50 >90 >90 >90 20 hr 0 0 0 0 >90 >90 >90 >90 >90 >90 >90 >90 25 >90 >90 0 >90 >90 0 0 >90 10 0 50 >90 0 0 >90 50 >90 >90 >90 Afl III CACATGTG CCACATGTGG CCCACATGTGGG Asc I GGCGCGCC AGGCGCGCCT TTGGCGCGCCAA Ava I CCCCGGGG CCCCCGGGGG TCCCCCGGGGGA BamH I CGGATCCG CGGGATCCCG CGCGGATCCGCG Bgl II CAGATCTG GAAGATCTTC GGAAG
PCR设计引物时酶切位点的保护碱基表
PCR设计引物时酶切位点的保护碱基表1
PCR设计引物时酶切位点的保护碱基表2
Pme I
GTTTAAAC GGTTTAAACC GGGTTTAAACCC AGCTTTGTTTAAACGGCGCGCCGG
0 0 0 75 0 10 >90 >90 0 0 10 0 10 0 50 0 10 10
0 25 50 >90 0 10 >90 >90 0 0 25 10 10 0 >90 0 50 75
Pst I
GCTGCAGC TGCACTGCAGTGCA AACTGCAGAACCAATGCATTGG AAAACTGCAGCCAATGCATTGGAA CTGCAGAACCAATGCATTGGATGCAT
Pvu I
CCGATCGG ATCGATCGAT TCGCGATCGCGA
Sac I Sac II
CGAGCTCG GCCGCGGC TCCCCGCGGGGA
Sal I
GTCGACGTCAAAAGGCCATAGCGGCCGC GCGTCGACGTCTTGGCCATAGCGGCCGCG G ACGCGTCGACGTCGGCCATAGCGGCCGCG GAA
Sca I
GAGTACTC AAAAGTACTTTT
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非限制性定语从句
Module 2 Grammar and usageNon-restrictive attributive clauses
非限制性定语从句
限制性定语从句的概念： 限制性定语从句对先行词起限制或修饰的作用，是先 行词在意义上不可缺少的 定语 ，如果去掉，主句的意 思就不完整或失去意义。从句和主句的关系密切，写 时不用逗号分开。例如： eg: This is the soldier who saved the boy’s life.先行词 引导词
定语从句
非限制性定语从句的概念： 非限制性定语从句只是对先行词作些附加的说明, 如果 去掉, 主句的意思仍然清楚。和主句关系不十分密切， 从句和主句之间用逗号分开。 例如：
Rome , which is the capital of Italy, has a very long history.罗马是意大利的首都，有着非常悠久的历史。
1、限制性定语从句和非限制定语从句的区别： 限制性定语从句常翻译为：“…的…” 非限制性定语从句常翻译为两个并列句
(1) 限制性定语从句 His brother who is now a doctor always encourages him to go to colleg