实验6:血清蛋白电泳分析的临床应用有哪些?

血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定及电泳分析

【实验目的】

1、了解蛋白质分离提纯的总体思路。

2、掌握盐析法、凝胶层析法和离子交换层析的实验原理及操作技术 3、掌握电泳法分离纯化蛋白质的方法。

【实验原理】

1、蛋白质的粗提——盐析法 胶体的盐析是加盐，盐中的带电粒子使蛋白质周围的水化膜减弱，胶粒溶解度降低，形成沉淀析出的过程，是胶体的聚沉现象的一种。向蛋白质溶液中加入某些浓的无机盐[如(NH4)2SO4或Na2SO4]溶液后，可以使蛋白质凝聚而从溶液中析出，这种作用就叫做盐析。盐析不能使蛋白质变性，可以复原。利用这个性质，可以采用多次盐析的方法来分离、提纯蛋白质。蛋白质在水溶液中的溶解度取决于蛋白质分子表面离子周围的水分子数目，亦即主要是由蛋白质分子外周亲水基团与水形成水化膜的程度以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。蛋白质溶液中加入中性盐后，由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化层减弱乃至消失。同时，离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷大量被中和，蛋白质溶解度更加降低，之蛋白质分子之间聚集而沉淀。由于各种蛋白质在不同盐浓度中的溶解度不同，不同饱和度的盐溶液沉淀的蛋白质不同，从而使之从其他蛋白中分离出来。简单的说就是将硫

醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质(山东大学）

Xxxx

20110014xxxx

生科三班 同组者：xxx

一、 实验目的：

掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质的原理和方法。

二、 实验原理：

蛋白质是两性电解质。在pH小于其等电点的溶液中，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动；在pH大于其等电点的溶液中，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动。血清中含有数种蛋白质，它们所具有的可解离基团不同，在同一pH的溶液中，所带静电荷不同，因此在电场中移动速度不同，故可利用电泳法奖它们分离。

血清中含有白蛋白、α-球蛋白，β-球蛋白、γ-球蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同（见表1），在电场中迁移速度不同。由表可知，血清中5种蛋白质的等电点大部分低于pH7.0，所以在缓冲液（pH8.6）中，它们都电离成负离子，在电场中向阳极移动。

表1 人血清中各种蛋白质的等电点及相对分子质量

蛋白质名称

白蛋白 α1-球蛋白 α2-球蛋白 β-球蛋白 γ-球蛋白 三、 实验器材：

醋酸纤维薄膜（2㎝×8㎝，厚度120μm）、人血清（新鲜、无溶血现象）、培养皿Φ10㎝（×5）、点样器（或玻璃片）、镊子、玻璃棒、电吹风、吸管5.0㎝（×1

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聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离血清蛋白质

【目的】

1 ．掌握圆盘电泳分离血清蛋白的操作技术。

2 ．熟悉聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理。

【原理】

带电粒子在电场中向着与其自身电荷方向相反的电极移动，称为电泳。聚丙烯酰胺凝胶电泳（ PAGE ）就是以聚丙烯酰胺凝胶作为电泳介质的电泳。在电泳时，蛋白质在介质中的移动速率与其分子的大小，形状和所带的电荷量有关。

聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的凝胶，是由丙烯酰胺（ Acr ）单体和少量交联剂 N,N- 亚甲基双丙烯酰胺（ Bis ）在催化剂过硫酸铵（ Ap ）和加速剂四甲基乙二胺（ TEMED ）的作用下发生聚合反应而制得的（其化学结构式见第 2 篇第 1 章）。

聚丙烯酰胺凝胶具有网状结构，其网眼的孔径大小可用改变凝胶液中单体的浓度或单体与交联剂的比例来加以控制。根据血清蛋白分子量的大小，学生实验一般选用 7 ％聚丙烯酰胺凝胶分离血清蛋白质。

不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳利用浓缩效应、分子筛效应和电荷效应的三重作用分离物质（见第 2 篇第 1 章），使样品分离效果好，分辨率较高。一般醋酸纤维薄膜电泳只能把血清蛋白质分离出 5 ～ 7 条带，而聚丙烯酰胺凝胶电泳却能分离出十几条到几十条

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聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离血清蛋白质

【目的】

1 ．掌握圆盘电泳分离血清蛋白的操作技术。

2 ．熟悉聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理。

【原理】

带电粒子在电场中向着与其自身电荷方向相反的电极移动，称为电泳。聚丙烯酰胺凝胶电泳（ PAGE ）就是以聚丙烯酰胺凝胶作为电泳介质的电泳。在电泳时，蛋白质在介质中的移动速率与其分子的大小，形状和所带的电荷量有关。

聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的凝胶，是由丙烯酰胺（ Acr ）单体和少量交联剂 N,N- 亚甲基双丙烯酰胺（ Bis ）在催化剂过硫酸铵（ Ap ）和加速剂四甲基乙二胺（ TEMED ）的作用下发生聚合反应而制得的（其化学结构式见第 2 篇第 1 章）。

聚丙烯酰胺凝胶具有网状结构，其网眼的孔径大小可用改变凝胶液中单体的浓度或单体与交联剂的比例来加以控制。根据血清蛋白分子量的大小，学生实验一般选用 7 ％聚丙烯酰胺凝胶分离血清蛋白质。

不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳利用浓缩效应、分子筛效应和电荷效应的三重作用分离物质（见第 2 篇第 1 章），使样品分离效果好，分辨率较高。一般醋酸纤维薄膜电泳只能把血清蛋白质分离出 5 ～ 7 条带，而聚丙烯酰胺凝胶电泳却能分离出十几条到几十条

实验五 聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分析

小麦幼苗过氧化物酶同工酶

生物111班杨明轩 1102040128

一、研究背景及目的

过氧化物酶是以过氧化氢为电子受体催化底物氧化的酶，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有关系，在种子萌动以前,它们的过氧化物酶同工酶很少,待幼芽长到0.5 - 1 厘米以后,它们的过氧化物酶才得到充分的表达。这说明植物过氧化物酶同工酶的多寡和有无,与植物不同发育时期,与植物的不同组织、器官的分化形成及特定的生理状态等均有密切关系。

而同工酶是指能催化同一种化学反应，但其酶蛋白本身的分子结构组成却有所不同的一组酶。大多数基因性同工酶由于对底物亲和力不同和受不同因素的调节，常表现不同的生理功能。它们存在于生物的同一种属或同一个体的不同发育阶段，或同一发育阶段的不同组织，在细胞发育和代谢调解中起重要作用。在动、植物中，一种酶的同工酶在各组织、器官中的分布和含量不同，形成各组织特异的同工酶谱，体现各组织的特异功能，这一特点可用于研究物种进化、遗传变异、杂交育种和个体发育、组织分化等。品种资源工作者借助同工酶分析品种的地理分布与亲缘关系来指导品种资源的收集与鉴定工作。育

天若有情天亦老,人学物理数学金融生物死得早

1、缺乏胶原蛋白后皮肤的表现 　
　
缺乏胶原蛋白最直接的表现就是体现在皮肤上。我们皮肤的真皮层中大约75%是胶原蛋白，随着年龄的增长，胶原蛋白流失后，最直接的表现就是皮肤松弛，起皱纹、色斑严重，脸颊，下颌，眼角下垂；胶原纤维断裂，皱纹增加；下颌耳后轮廓不清晰，形成双下巴和耳下堆积赘肉；皮肤干燥，易敏感，弹性下降，角质粗糙，毛孔粗大，出油明显。

2、缺乏胶原蛋白后毛发的表现
头发的中心是发髓，最外层是毛鳞片，中间是胶原蛋白。也就是说胶原蛋白控制着头发的粗细，弹性和莹润度。随着年龄的增长胶原蛋白流失严重后，发质就开始干枯，断裂，脱发，秃顶，分叉，白发，头皮屑增多等。

3、缺乏胶原蛋白后眼睛的表现　　

眼角膜的主要成分是胶原蛋白，随着年龄的增长胶原蛋白流失会导致眼睛干涩，疲劳。分眼角膜透明度不佳，弹性纤维变硬，晶状体浑浊，引起的白内障等眼疾。 　　

4、缺乏胶原蛋白后牙齿的表现
　　
牙齿中含钙质成分，胶原蛋白能使钙质与骨细胞结合，利不致流失。随着年龄的增长，牙齿中胶原蛋白的流失导致钙质流失会造成牙齿病变，容易蛀牙及得牙周病，牙齿松动脱落 疼痛 易敏咬力不强等。

5、缺乏胶原蛋白后乳房的表现 　
　
乳房是由含有大量胶原蛋白的

富含蛋白质的食物有哪些？

（发表日期: 2004-12-14 来源:华星医药网 阅读次数： 256） 发表评论加入收藏打印本页

ppppp富含蛋白质的食物可分为豆类、山产类、动物内脏、肉类、家禽类、水产类、蛋类等。

ppppp豆类：腐竹，每100克中含蛋白质50.5克；黄豆，每100克中含蛋白质36.3克。

ppppp山产类：干口蘑，每100克中含蛋白质35.6克；冬菇，每100克中含蛋白质13.9克。

ppppp动物内脏类：猪肝，每100克含蛋白质21.3克；猪血、羊血、牛肝、羊肝、牛蹄筋、猪皮等也含有大量的蛋白质。

ppppp肉类：瘦牛肉，每100克中含蛋白质20.1克；酱牛肉，每100克中含蛋白质32克，红烧牛肉，每100克中含蛋白质25克。 ppppp家禽类：鸡，每100克中含蛋白质21.5克。

水产类：青鱼，每100克中含蛋白质19.5克；带鱼，每100克中含蛋白质18.1克；黄花鱼，每100克中含蛋白质17.6克。

ppppp蛋类：鸡蛋，每100克中含蛋白质14.7克；鸭蛋，每100克中含蛋白质8.7克。

ppppp此外还有乳类等，也富含人体必需的完全蛋白质。 常见高蛋白食物索引(每100克食物含蛋白质) 食物名称 含

蛋白质双向电泳实验流程

一．样品制备 1.研磨

研磨时间要尽量短，并需及时补充液氮，研磨要充分，同时要保证损失少。

2.加入8mLTris饱和酚（pH8.8）和8mL抽提液，在通风橱内研磨30s。 先加8mLTris饱和酚，Tris饱和酚会变成固体，此时需用研磨碓将固体的Tris饱和酚研磨成小块。接着加入8mL抽提液，也需将固体的抽提液研磨成小块。等三者混匀后，将粉末转移至45 mL tube。

3.振荡30min。

室温静置，待tube中固体变成液体后，开始振荡。振荡需持续30min，每振荡1min，置于冰上冷却1min。

4.10000g，4℃，10min。将酚相（top phase）转移至45mL tube。酚相（top phase）可置于冰上。

酚相应该是绿色的，水相应该是淡黄色的。

5.取6mL的抽提液和6mL饱和酚加入水相，蜗旋振荡30min。 振荡需持续30min，每振荡1min，置于冰上冷却1min。

6.10000g，4℃，10min。将酚相（top phase）转移至45mL tube。

7.沉淀酚相。取一定体积（是酚相的5倍）的0.1M乙酸铵/甲醇溶液（–20℃保存）于酚相（45mL tube）。振荡30s，

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1、缺乏胶原蛋白后皮肤的表现 　
　
缺乏胶原蛋白最直接的表现就是体现在皮肤上。我们皮肤的真皮层中大约75%是胶原蛋白，随着年龄的增长，胶原蛋白流失后，最直接的表现就是皮肤松弛，起皱纹、色斑严重，脸颊，下颌，眼角下垂；胶原纤维断裂，皱纹增加；下颌耳后轮廓不清晰，形成双下巴和耳下堆积赘肉；皮肤干燥，易敏感，弹性下降，角质粗糙，毛孔粗大，出油明显。

2、缺乏胶原蛋白后毛发的表现
头发的中心是发髓，最外层是毛鳞片，中间是胶原蛋白。也就是说胶原蛋白控制着头发的粗细，弹性和莹润度。随着年龄的增长胶原蛋白流失严重后，发质就开始干枯，断裂，脱发，秃顶，分叉，白发，头皮屑增多等。

3、缺乏胶原蛋白后眼睛的表现　　

眼角膜的主要成分是胶原蛋白，随着年龄的增长胶原蛋白流失会导致眼睛干涩，疲劳。分眼角膜透明度不佳，弹性纤维变硬，晶状体浑浊，引起的白内障等眼疾。 　　

4、缺乏胶原蛋白后牙齿的表现
　　
牙齿中含钙质成分，胶原蛋白能使钙质与骨细胞结合，利不致流失。随着年龄的增长，牙齿中胶原蛋白的流失导致钙质流失会造成牙齿病变，容易蛀牙及得牙周病，牙齿松动脱落 疼痛 易敏咬力不强等。

5、缺乏胶原蛋白后乳房的表现 　
　
乳房是由含有大量胶原蛋白的

国际检验医学杂志 2 0 1 3年 1 2月第 3 4卷第2 3期

I n t J L a bMe d, D e c e mb e r 2 0 1 3, V o 1 . 3 4, N o . 2 3

临床检验研究论著

抗着丝点蛋白 B抗体阳性血清的抗核抗体荧光模式及其临床应用价值朱蓉，孙明忠，居会祥，周中卫，肖丽华

(东南大学医学院附属盐城医院医学检验中心，江苏盐城 2 2 4 0 0 1 )摘要：目的探讨抗着丝点蛋白 B抗体 ( C E NP— B )阳性血清抗核抗体 ( ANA)荧光模式及其临床应用价值。方法对 9 6例

抗C E Np - B抗体阳性血清的 AN A荧光模式、滴度、分布及临床诊断进行回顾性分析。结果 9 6例抗 C E NP— B抗体阳性血清中，

单纯性抗 C E Np - B抗体阳性 (+/一)为4 6例 ( 4 7 . 9 V o ),+/一组和+/+组的荧光模式比较，差异有统计学意义 ( P< 0 . 0 1 )。< 1: 1 0 0 0和≥ 1: 1 0 0 0的核型滴度组抗 C E N P— B抗体阳性强度的差异有统计学意义 ( P< 0 . 0 1 );+/一组的自身免疫性疾病 ( AI D )患者主要为系统