细胞传代培养

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

第五章 细胞的原代与传代培养

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

一、原代培养 概念：取自体内新鲜组织并臵于体外条 件下生长的细胞在传代之前称为原代培养。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原代培养技术的重要意义: 原代培养的最大优点是细胞刚刚离体，生物性 状尚未发生很大变化，具有二倍体的遗传性， 而且大多数细胞表现出原来组织的特性。 利用原代培养做各种实验，如药物测试、细胞 分化及病毒学方面的试验效果很好。 原代培养也是建立各种细胞系(株)必须经过 的阶段。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原代培养

消化法贴块法

冷消化 温消化

一次性消化 分次消化

消化法：这种培养过程主要是采用无菌 操作的方法，把组织(或器官)从动物 体内取出，经酶消化处理，使分散成单 个细胞，然后在人工条件下培养，使其 不断地生长和繁殖。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原 代 培 养 方 法 分 类

贴块法

消化法

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

第五章 细胞的原代与传代培养

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

一、原代培养 概念：取自体内新鲜组织并臵于体外条 件下生长的细胞在传代之前称为原代培养。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原代培养技术的重要意义: 原代培养的最大优点是细胞刚刚离体，生物性 状尚未发生很大变化，具有二倍体的遗传性， 而且大多数细胞表现出原来组织的特性。 利用原代培养做各种实验，如药物测试、细胞 分化及病毒学方面的试验效果很好。 原代培养也是建立各种细胞系(株)必须经过 的阶段。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原代培养

消化法贴块法

冷消化 温消化

一次性消化 分次消化

消化法：这种培养过程主要是采用无菌 操作的方法，把组织(或器官)从动物 体内取出，经酶消化处理，使分散成单 个细胞，然后在人工条件下培养，使其 不断地生长和繁殖。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原 代 培 养 方 法 分 类

贴块法

消化法

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很

人结肠癌ＨＣＴ１１６细胞传代培养的简易方法－

２＊

王　倩１，徐云丹１，赵　刚１，

（湖北中医药大学基础医学院，湖北武汉４１．３００６５；

）湖北中医药大学中药资源与复方教育部重点实验室，湖北武汉４２．３００６５

摘　要：目的：针对人结肠癌ＨＣ建立一种简Ｔ１１６细胞在体外培养时常出现部分细胞聚团生长的特性，－

——水平震荡法。方法：采用简单高效的水平震荡方法替代胰酶消化法对易的细胞传代培养方法—

利用水平震荡方法传代后的细胞在新瓶中可以正常贴壁。２ＨＣＴ１１６细胞进行传代培养。结果：４ｈ和－

该方法无４８ｈ观察到胰酶消化法传代的细胞生长情况与水平震荡法传代的细胞未见明显差异。结论：

需使用胰蛋白酶，避免了胰酶对细胞的损伤作用，而且操作简便，降低了实验成本和污染的风险。水平震荡传代法可以替代胰酶消化法作为ＨＣＴ１１６细胞的简易传代方法。－关键词：传代培养；水平震荡法ＨＣＴ１１６细胞；－

（）中图分类号：Ｒ３２９．２＋８　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１６７３２１９７２０１３０２００３５０２－－－

ＡＳｉｍｌｅＭｅｔｈｏｄｏｆＨｕｍａｎＣｏｌｏｎＣａｒｃｉｎｏｍａＨＣＴ１１６ＣｅｌｌｓＳｕｂｃｕｌｔｕｒｅ　　　　　　　－　ｐ

１１１２

，，ＷａｎＱｉａｎＸｕＹｕｎｄａ

实验四 乳鼠肺细胞原代培养

一、实验目的

1.了解原代细胞培养的基本方法及操作过程。

2.学习细胞消化、细胞计数方法。

二、实验原理

原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，经体外培养后，直到第一次传代为止。这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官），经消化，分散成为单个游离的细胞，在人工培养下，使其不断的地生长及繁殖。

三、实验用品

1.设备

CO2培养箱、倒置显微镜、超净工作台、高压锅、恒温水浴箱、离心机等。

2.器材

眼科剪（尖头、弯头）、眼科镊（尖头、弯头）、培养皿、纱布块（或不锈钢网）、玻璃漏斗、量筒、移液管、试管、锥形瓶、吸管、橡皮头、培养皿等。

上述器材均须彻底清洗、烤干、包装好，15磅灭菌30min。此外，还需显微镜、血细胞计数板、酒精灯、酒精棉球等。

3.试剂

（1）D-Hanks平衡盐溶液：即无钙、镁离子的Hanks液。

（2）细胞消化液：0.25％胰蛋白酶液（0.25g胰蛋白干粉，加D-Hanks平衡盐溶液100mL，溶解后过滤除菌，调pH值7.4）

（3）7.4％NaHCO3溶液。

（4）RPMI1640培养液。

以上溶液均经适当包装，除菌后备用。此外，还需胎牛血清和1000U/mL的青、链霉素液（双抗）。在RP

综合设计性实验报告

学 院

課 程 实验项目 实验题目 专 业 年级、班别 姓 名 学 号 任课教师 完成日期

1

实验六 细胞培养

——小鼠表皮细胞的原代培养

摘要 目的 探讨体外分离和培养小鼠表皮细胞的方法。方法 采用脱臼法处死新生小鼠，结合

酶消化法和组织块法对新生小鼠表皮细胞进行了体外分离、培养。（用眼科剪把新生小鼠表皮细胞组织剪成小于1mm3大小的植块，然后用胰蛋白酶消化5~10min，最后将组织块接种于培养瓶中进行体外培养。）结果 新生小鼠表皮细胞克隆2~3d后开始形成，细胞呈梭形，体外培养一个星期后仍能够保持良好的生长状态。结论 采用该方法能够实现对小鼠表皮细胞的体外原代培养，并且细胞贴壁生长的速度比单纯采用酶消化法和组织块法大大提高。

［1］

关键词 原代培养 小鼠表皮细胞 酶消化法 组织块法

2

1前 言

目的 ：初步了解动物细胞原代培养的基本方法、原理和基本操作过程，初步掌

握无菌操作方法。意义 ：细胞培养技术目前已经广泛地被应用于生物学的各个领域。如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、病毒学等领域，已发展成为一种重要的生物技术。为此

1.HePG2细胞和L-02细胞的传代：

HePG2细胞属人肝肿瘤的恒生细胞株，L-02细胞则是人胎肝细胞株，二者所使用的培养基可以是一样的，即最常见的DMEM。一干使用低糖的。

细胞长满培养瓶时既要传代。使用胰酶消化即可。用D-Hank's液配制成0.25%的胰酶。使用前37度预热，细胞经PBS清洗两遍后，每个中号培养瓶加0.7ml的胰酶，胰酶的量可根据自己培养瓶的大小而定，原则就是能够盖满瓶底。加入胰酶以后，为使酶的活性最大，将培养瓶盖拧紧后放回培养箱中，3分钟左右即用含血清的培养基终止消化。如果在室温情况下消化，时间相应加长，可以在显微镜下观察，当细胞界限已十分清楚，即已分离为单个细胞，且有少量细胞漂起，则要终止消化了。

HepG2细胞株的传代经验：

首先在倒置显微镜下观察生长融合达80%，不需要长满，就准备传代。倒掉旧的培养基，再用已经高压灭菌过的PBS洗1－2次，我用的是25平方厘米的培养瓶，加入1毫升已经配制好的0.25%胰蛋白酶－0.02íTA(0.25%胰蛋白酶是用D-Hanks配制后先用滤纸过滤，再用一次性过滤器过滤除菌，再分装成1ml的小包装，刚好每次用完一个，避免每次反复冻存，会使胰酶的活性下降），加入的量以刚好盖满瓶

围绕siRNAs的相关实验详细步骤及总结

实验一：细胞传代培养

材料：15ml离心管、枪（头1ml、200ul、10ul）、无菌吸管、培养瓶、含10?S的RPMI—1640(OVCAR-3)、M5A(SKOV-3)、PBS、trypsin等

步骤：（以下均在超净台内，酒精灯旁操作）（SKOV-3）

1、打开超净台，将离心管、枪（头）、吸管等工具置于紫外线下照射30min；含10?S的RPMI—1640、trypsin、PBS放在37°C水浴恒温箱中预热。

2、取一个生长良好的细胞培养瓶（密度适中，细胞成梭形连接，贴壁良好），弃旧培养基，PBS 2ml 清洗2次（切勿用力吹打）。

3、用移液枪取trypsin 1ml沿细胞生长壁对侧壁注入，然后放平培养瓶，使贴壁细胞与trypsin充分接触，置于CO2培养箱2min左右（时间不能太长，以免损伤细胞）。

4、往培养瓶中加入1640 1~2ml，随后用移液枪将悬液移到15ml离心管中，离心1000 r/min，5min。

5、弃上清液，加入少量10?S的1640培养基使成细胞悬液。

6、分装，按1:2~3传代，每瓶4~5ml。倒置显微镜下观察（细胞突起消失变圆

AEP对LPS诱导的Raw264.7细胞炎症模型抗炎实验

一、试剂与仪器 （一）细胞系 RAW264.7。 （二）试剂 胎牛血清

DMEM HyClone，美国 10000 U/mL 青霉素/链霉素Gibco，美国

DMSO Sigma，美国 lipopolsaccharide Sigma，美国 甲基四唑蓝(MTT) Sigma，美国 对氨基苯磺酸 Sigma，美国 N-α-萘乙二胺 Sigma，美国 （三）仪器 超净台 酶标仪

CO2恒温细胞培养箱 显微镜 离心机

（四）供试品配置

LPS 溶液配置：称取 LPS 粉末 5 mg，溶于 1 mL DMSO 中，得 5 mg/mL 母液。用时将母液用培养基稀释至 2 μg/mL（DMSO＜0.1%）。

MTT 溶液配置：称取 MTT 50 mg，溶于 10 mL PBS

昆虫细胞培养及其应用进展

摘 要: 随着生命科学的迅速发展, 细胞工程愈来愈受到人们的重视。以昆虫细胞为对象的细胞培养技术在现代实验生物学上具有重要的价值, 已经广泛地应用于医学、农业及生物学的各个领域。本文综述了有关昆虫细胞培养的研究进展, 包括昆虫细胞培养基研究开发, 昆虫细胞系的建立和组织培养, 利用生物反应器大规模培养昆虫细胞, 昆虫细胞2杆状病毒表达系统,构建基因工程细胞系及其稳定性表达, 以及昆虫细胞培养的应用前景和研究展望。 关键词: 昆虫细胞系; 昆虫细胞培养; 基因表达;培养条件

昆虫的组织培养最早始于 1915 年, 直到1962 年 Grace 才成功建立了世界上第一个细胞系, 此后昆虫细胞培养在世界范围内广泛开展, 不断有新细胞系建立的报道。现在, 昆虫细胞培养已在细胞生物学、分子生物学、昆虫学、病毒学、生物化学、遗传学等领域的研究工作中发挥着重要的作用。 1 昆虫细胞培养基

昆虫细胞培养基的发展经历了天然培养基、合成培养基和无血清培养基三个阶段. 天然培养基采用取自动物体液或从组织中提取的成分作为培养液. 合成培养基最大的特点是各种成分已知.无血清培养基是在已知细胞所需营养物质和贴壁因子基础上, 在基

Hela细胞传代培养操作步骤

1．观察培养基是否正常，细胞状态如何，细胞密度如何，决定是否传代。观察时拧紧盖子。 2．加热PBS、versene、培养基，(提前做好) 瓶子不要倒着放，不要让液体接触到瓶塞。

3．打开超净台（先开风机，后开照明），用75%乙醇清洁台面，点燃酒精灯。不要把废液缸拿出去倒，如果废液太多，可以用其他容器先装废液。取小离心管一个，置于架子上。

4．取尖吸管、吸量管各一支，放置在专用的架上。放置的方式，注意吸管、吸量管前端都不要与架子接触。 5．取待传代的细胞。打开versene，用酒精灯外焰烧。烧吸管时距离酒精灯心远些，不要把渣滓带进去。把试剂拿入台子的时候，尽量平稳，不要让试剂碰到瓶口。

6．用吸量管吸取旧的培养基，置离心管中，吸量管加入versene，然后将versene瓶收起来。（加versene主要是为了将旧培养基洗去）。在离心管中间部分将液体加入。吸液体和加液体时都不要对着细胞。 7．打开胰酶，然后将versene弃掉。换新管，用尖吸管吸取适量胰酶加入。加胰酶后，尽快放平，使细胞消化时间一致。

8．将细胞放入37度孵箱。放孵箱2min, 收胰酶，打开PBS. 之后拿出来镜下随时观察。使用二次消化法，去除容器中