菌种的鉴定方法

篇一：菌种鉴定

中国工业微生物菌种保藏管理中心

CICC是我国唯一的国家级工业微生物菌种保藏管理中心，有近三十年菌种分类鉴定的历史，拥有先进的生物科学仪器和从事分类鉴定的专业化人员队伍。CICC承担全国工业微生物菌种的委托鉴定工作，所提供的菌种鉴定与评价技术服务获得“国家工商总局（SCIC）经营许可”，为国内科研机构、大专院校和生产企业等提供微生物菌种鉴定服务，涉及细菌、酵母、放线菌和丝状真菌等多类微生物。菌种鉴定手段包括形态学观察、生理生化特性鉴定、 BIOLOG碳源自动分析鉴定、分子生物学鉴定、API细菌数值鉴定、功能性分析及功能基因、RAPD、SSCP、TLC薄层层析、全细胞脂肪酸分析鉴定、（G＋C）mol％测定、DNA/DNA同源性测定等。

鉴定项目

序号 服务项目 菌种类别

1 纯菌种鉴定（包含形态、理化、分子） 细菌、酵母、放线菌、丝状真菌 2 功能基因鉴定（pheS、gryA、atpD等） 乳杆菌、芽胞杆菌、双歧杆菌 3 产品微生物解析 ――

4 产品污染菌种鉴定 ――

5 菌群分析及纯种分离 ――

6 细胞壁化学组分分析（氨基酸） 细菌、放线菌

7 细胞壁化学组分分析（糖） 细菌、放线菌

8 DNA（G+C ）mol％含量 细菌、放线菌

9 DNA

菌种鉴定实验过程

一、仪器与试剂 1、仪器 仪器名称 测序仪 DNA电泳槽 稳压电泳仪 电热恒温水槽 凝胶成像仪 恒温培养箱 恒温摇床 PCR仪 冷冻高速离心机 Surf系列精密单道可调移液器 1. 试剂 试剂名称 Ezup柱式细菌基因组DNA抽提试剂盒 Ezup柱式真菌基因组DNA抽提试剂盒 Ezup柱式酵母基因组DNA抽提试剂盒 DreamTaq-TM DNA Polymerase 仪器来源 Applied Biosystems 北京六一仪器厂 北京六一仪器厂 上海一恒科学仪器有限公司 上海复日科技仪器有限公司 太仓市科教器材厂 太仓市实验设备厂 Applied Biosystems BBI 生工 试剂来源 生工 生工 生工 MBI 生工 BBI 生工 生工 生工 生工 Takara 生工 型号 3730XL DYCP-31DN DYY-5 DK-8D FR980 DHP-9162 TH2-C 2720 thermal cycler HC-2518R SP10-1000 cat. No. SK8255 SK8259 SK8257 EP0702 D0056 AB0014 SK8131 SM0337 合成部合成 铸塑部生产 D101A SK

开菲尔中菌种分离与鉴定方法初探　

夏菠，周传云，张庆，罗阳，唐淑芬　

（湖南农业大学食品科技学院

开菲尔乳是由数种乳酸菌及酵母菌共同发酵而得

依据其个体特征分别为

关键词

分离

筛选出３支菌株

肠球菌属假鸟肠球菌种

即开菲尔乳酵母菌

确定此３支菌

Ｌｕｏ　Ｙａｎｇ

College of Food Science and Technology of Hunan Agriculture University , Changsha 410128, China

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搁成直立柱

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用16S rDNA方法鉴定细菌种属

一、实验目的

1. 掌握16S rDNA对细菌进行分类的原理及方法；

2. 掌握DNA提取、PCR原理及方法、DNA片段回收等实验操作。

二、实验原理

细菌rRNA（核糖体RNA）按沉降系数分为3种，分别为5S、16S和23S rRNA。16S rDNA是细菌染色体上编码16S rRNA相对应的DNA序列，存在于所有细菌染色体基因中。

16SrDNA鉴定是指用利用细菌16SrDNA序列测序的方法对细菌进行种属鉴定。包括细菌基因组DNA提取、16SrDNA特异引物PCR扩增、扩增产物纯化、DNA测序、序列比对等步骤。是一种快速获得细菌种属信息的方法。

16S rDNA是细菌的系统分类研究中最有用的和最常用的分子钟，其种类少，含量大（约占细菌RNA含量的80％），分子大小适中，存在于所有的生物中，其进化具有良好的时钟性质，在结构与功能上具有高度的保守性，素有“细菌化石”之称。在大多数原核生物中rDNA都具有多个拷贝，5S、16S、23S rDNA的拷贝数相同。16S rDNA由于大小适中，约1.5Kb左右，既能体现不同菌属之间的差异，又能利用测序技术较容易地得到其序列，故被细菌学家和分类学家接受。

16SrR

严格厌氧菌菌种保藏方法

发表人：吴小月，发布时间：10-01-11 以下为本实验严格厌氧细菌的保藏方法，如果是兼性厌氧菌可参照好氧菌保藏方法保藏。 一、厌氧细菌的甘油保藏方法：

1、 厌氧甘油的制备： 厌氧瓶或厌氧管中放置一定量的甘油，甘油的量根据需要加入，不

要多加，因为厌氧甘油制备好以后不能反复灭菌，反复灭菌甘油会变性而呈黄色，且有一股芳香味道。加入终浓度为0.04 %的 L-cysteine和 1 %的5 %的 N2S母液。往厌氧瓶中通N2，通气时间和配制培养基时时间相同。盖上塞子和盖子。121 ℃， 20 min 灭菌后备用。

2、 取新鲜菌液（对数期），在通N2 的情况下，用针筒和针头往有菌液的厌氧管中加入终

浓度为15-20 %的厌氧甘油，再通一会N2，目的是赶走在转移甘油过程中带进去的O2。盖上塞子和盖子，混匀，冻于-80 ℃。

3、 活化：用针头和针头吸取一定甘油保藏的菌液，加到培养基当中，加的量一般要多于1 %，

因为厌氧菌的生物量比较小，一般2到5 %左右。目测加完甘油菌液的培养基是否浑浊，并作记录。如果加入的菌液太多，造成一开始培养基就比较浑浊，会干扰我们对菌是否生长的判断，而且甘油太多也会抑制菌的生长。

二、厌氧细

乳酸菌菌种的分离筛选方法

乳酸细菌是一类能利用发酵糖产生大量乳酸的细菌通称。为兼性厌氧菌，杆状或球状，革兰氏阳性菌，无芽孢，不运动。营养要求高，需要提供丰富的肽类 氨基酸 维生素。在琼脂表面或内层形成较小的白色或淡黄色的菌落。

通常用作为有益微生物的菌种有乳酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、乳酸片球菌、双歧杆菌、屎肠球菌、戊糖片球菌等。 乳杆菌常用MRS琼脂作半选择培养基。当乳杆菌仅是复杂区系中的部分菌类 时，SL培养基常用作为选择性培养基。对于芽孢乳杆菌常用GYP培养基，链球菌有TYC培养基、MS培养基。M17培养基被用作乳球菌的分离培养基。 嗜酸乳杆菌属于乳杆菌属的一个种。其特性为：杆菌，两端圆，不运动，无 鞭毛。粪肠球菌为革兰氏阳性，圆形或椭圆形。

乳酸片球菌细胞呈球状，直径0.6~1.0μm，在直角两个平面交替形成四联状，一般细胞成对生，单生者罕见，不成链状排列。革兰氏阳性，不运动，兼性厌氧。在MRS培养基上菌落小，呈白色。沿洋菜穿刺线的生长物呈丝状。

乳酸菌在一般琼脂培养基上形成微小菌落，不易观察，所以分离时先富集培养并选择合适的培养基。分离培养基一般添加西红柿、酵母膏、吐温-80等物质，也常常加入醋酸盐，因醋

食用菌的菌种保藏

维普资讯

食用菌学报

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不同菌种保藏方法对香菇产量的影响蔡令仪，谭琦，曹晖，郭立刚，汪昭月，尚晓东，汪虹(业部食用菌遗传育种重点开放实验室：农 上海市农业遗传育种重点开放实验室；上海市农科院食用菌研究所，海 2 1 0 )上 0 1 6摘要：别采用液氮和 4分℃冰箱保藏香菇 ( et“ae o e)种，通过栽培试验比较了 L ni l dd s菌 n并

二种保藏方法对香菇产量的影响。关键词：种保藏；香菇；液氮保藏；箱保藏菌冰中图分类号：￥ 4 .9; 6 6 10 9 6 6 0 3￥ 4 .2 .文献标识码： A

食用菌资源是我国丰富的自然资源宝库中的一个重要组成部分。随着生物学技术的不断发展，种质资源的利用对生命科学的研究起着越来越重要的作用，对食用菌菌种保藏技术也提出了越来越高的要求…。在菌种保藏过程中，不仅要保证菌种成活，主要的是要保证菌种的更

遗传性状不发生或尽可能少发生变异。由于缺乏妥善的保藏方法，多经多年辛勤研究获】许得的优良菌株失去了

食用菌菌种选育的一般方法

导言 3-1自然选育

定义：

自然突变的结果：

自然选育的特点：简单易行，可以纯化菌种，防止菌种退化，稳定产量。但自然选育的效率低，应该经常跟诱变选育交替使用，提高育种效率。 自然选育的一般程序：

3-2诱变选育

导言

3-2-1诱变育种的原理

诱变育种的理论基础是基因突变，突变包括染色体畸变和基因突变两大类。 染色体畸变指的是，染色体或DNA片段发生缺失、易位、逆位、重复等。 基因突变指的是，DNA中的碱基发生变化，即点突变。

诱变育种：就是利用各种被称为诱变剂的物理因素和化学试剂处理微生物细胞，提高基因突变频率，再通过适当的筛选方法获得所需要的高产优质菌种的育种方法。 常用的诱变剂包括物理、化学、生物的三大类。表3-1所示。

3-2-2诱变育种的基本方式 导言

3-2-2-1出发菌株的选择

进行诱变的出发菌株的性能，对提高诱变效果和效率十分重要。 选择出发诱变菌株的注意事项： 诱变育种的程序：

3-2-2-2诱变剂的使用方法

|------单一诱变剂处理：对野生菌株处理有效。 诱变方法 |

|------复合诱变剂处理：对经过多次诱变处理的老菌株。 复合诱变剂处理

主要介绍一种比较好的保存空肠弯曲菌的方法

—518—

中国食品卫生杂志

CHINESEJOURNALOFFOODHYGIENE

　　　　　　　　2007年第19卷第6期

　　　实验技术与方法

弯曲菌菌种冷冻保存及复苏方法的研究

骆海朋　陈　倩

(北京市疾病预防控制中心,北京　100013)

摘　要:目的　探索一种简单、方便、有效的弯曲菌菌种保存方法。方法　采用含30%甘油的脑心浸液肉汤,将实

验室保存的19株弯曲菌于-30℃和-70℃分别保存,每个菌株3个菌种管。1年后,采用5%脱纤维羊血的布氏肉汤进行增菌,然后转种哥伦比亚血平板,比较存活效果。结果　-30℃条件下采用多管法保存弯曲菌可以获得与-70℃条件下保存相当的效果。结论　采用多管法(每株菌3个菌种管)于-30℃冷冻保存弯曲菌是一个简单、方便、有效、实用的方法。

关键词:弯曲杆菌属;保存,生物学;低温保存

StudiesofMethodsofFreezingStorageofCampylobacterand

RecoveryofFrozenStorageStrainLUOHai2peng,CHENQian

(BeijingMunicipalCenterforDiseaseControland,,China)

Abs

鲜肉贮藏保鲜过程中腐败菌菌种分离与鉴定

摘要：取临安本地三处主要消费市场购买猪肉糜真空包装冷藏进行发酵，对其导致腐败微生物进行分离，筛选，扩增，鉴定，测序。以便于筛选出导致冷藏真空包装猪肉腐败的优势菌，为保证冷鲜肉品质，减少营养流失，延长货架期提供参考。本实验从真空包装冷藏的猪肉中分离鉴定出7株清酒乳杆菌，7株乳酸乳球菌。

关键词:猪肉; 酵母菌; 乳酸菌; 分离; 鉴定

The isolation and identification of bacteria in the chilled pork

Abstract:isolate: Take Lin'an local three major consumer market to buy pork vacuum packaged frozen fermentation, microorganisms which lead to spoilag were isolated, selection, amplification, identification and sequencing. In order to screen out the strong spoilage bacteria le