研究药物转运体的实验方法

转运体临床前研究评价的一些实验方案

FDA推荐主要研究的七个转运体及其底物、抑制剂 转运体 P-gp/MDR1 BCRP/MXR 推荐特异底物 地高辛、洛派丁胺、小檗碱、伊立替康、阿霉素、长春碱、紫杉醇、非索非那定 推荐特异抑制剂 环孢霉素、奎尼丁、Tariquidar、维拉帕米 米托蒽醌、氨甲蝶呤、拓扑替康、伊马替尼、伊立替康、雌（甾）酮、17β-雌二他汀类、硫酸结合物、卟啉类化合物 醇、fumitremorgin C Bromosulphophthalein、oestrone-3-sulphate、沙奎那韦、利托那韦、洛oestradiol-17β-glucuronide、他汀类、瑞格列奈、缬匹那韦、利福平、环孢霉沙坦、奥美沙坦、葡萄糖醛酸胆红素、胆红素、胆汁酸 素 Bromosulphophthalein、缩胆囊素8、他汀类、地高辛、利福平、环孢霉素、利托非索非那定、替米沙坦糖苷、替米沙坦、缬沙坦、奥美那韦、洛匹那韦 沙坦、oestradiol-17β-glucuronide、胆汁酸 对氨基马尿酸盐、阿德福韦、西多福韦、齐多夫定、拉米夫定、扎西他宾、阿昔洛韦、替诺福韦、环丙沙星、甲氨蝶呤 Oestrone-3-sulphate、非甾体抗

陈桂庭 08333035

抗菌药物筛选的实验方法与技术

一、 实验原理

体外实验是筛选抗菌药物或测试新药抗菌性能的重要环节。药物对细菌代谢的影响、可以使细胞呼吸量减低，或酶系统受到抑制等，因而出现细菌不生长或部分抑制，可借以判断药物对细菌有无抗菌作用，或抗菌范围。

培养基是指利用人工方法将适合微生物生长繁殖成积累代谢产物的各种营养物质混合配制而成的营养基质。主要用于微生物的分离、培养、鉴定以及菌种保藏等方面。培养基一般应含有微生物生长繁殖所需要的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水等营养成分。此外，为了满有微生物生长繁殖或积累代谢产物的要求，还必须控制培养基的pH。

按培养基的物理状态，可将培养基分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基。固体培养基是指在液体培养基中加入一定量的凝固剂(常加1.5%-2%的琼脂)经融化冷凝而成。半固体培养这是指在液体培养基中加入0.8％-1％左右的琼脂，经融化冷凝而成。液体培养基是指培养基中不加凝固剂琼脂，培养基呈液体状态。

正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础。由于微生物种类及代谢类型的多样性，因而用于培养微生物培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各有差异。但一般培养基的配制程序却

Western blot 实验

1、试剂配制： （一）母液

1.0mol/L Tris·HCl

Tris (MW121.14) 12.12g 蒸馏水 50ml

溶解后，用浓盐酸调pH至6.8（见下所示），最后用蒸馏水定容至100ml，室温下保存。 注：PH ： 6.8 约需22ml浓盐酸

10％ SDS

SDS 10g

蒸馏水定容至 100ml

50℃水浴下溶解，室温保存。如在长期保存中出现沉淀，水浴溶化后，仍可使用。

10％过硫酸胺（AP） 过硫酸胺 0.1g 超纯水 1.0ml

溶解后，4℃保存，保存时间为1周，最好现配先用。

1.5mol/L Tris·HCl（pH8.8） Tris 18.2g

蒸馏水 50ml

溶解后，用浓盐酸调pH至8.8，最后用蒸馏水定容至100ml，室温下保存。

30％Acr/Bic（29：1

抗肿瘤药物药效学实验方法及指导原则

一、基本原则 1. 抗肿瘤药物分类

(1) 细胞毒类药物(cytotoxic agent)：包括干扰核酸和蛋白质合成、抑制拓扑异构酶及作用于微管系统的药物等；

(2) 生物反应调节剂(biological response modifier)； (3) 肿瘤耐药逆转剂(resistance reversal agent)； (4) 肿瘤治疗增敏剂(oncotherapy sensitizer)；

(5) 肿瘤血管生成抑制剂(tumor angiogenesis inhibitor)； （6）分化诱导剂(differentiation inducing agent)； (7) 生长因子抑制剂(growth factor inhibitor)； （8）反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide) 。

2. 抗肿瘤药物药效学需研究内容

2.1 包括体外抗肿瘤试验，体内抗肿瘤试验。

2.2 评价药物的抗癌活性时，以体内试验结果为主，同时参考体外试验结果以做出正确的结论。

2.3 I类抗肿瘤新药应进行药物作用机制初步研究。

二、体外抗肿瘤活性试验 1. 试验目的

1.1 对候

抗肿瘤药物药效学实验方法及指导原则

一、基本原则 1. 抗肿瘤药物分类

(1) 细胞毒类药物(cytotoxic agent)：包括干扰核酸和蛋白质合成、抑制拓扑异构酶及作用于微管系统的药物等；

(2) 生物反应调节剂(biological response modifier)； (3) 肿瘤耐药逆转剂(resistance reversal agent)； (4) 肿瘤治疗增敏剂(oncotherapy sensitizer)；

(5) 肿瘤血管生成抑制剂(tumor angiogenesis inhibitor)； （6）分化诱导剂(differentiation inducing agent)； (7) 生长因子抑制剂(growth factor inhibitor)； （8）反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide) 。

2. 抗肿瘤药物药效学需研究内容

2.1 包括体外抗肿瘤试验，体内抗肿瘤试验。

2.2 评价药物的抗癌活性时，以体内试验结果为主，同时参考体外试验结果以做出正确的结论。

2.3 I类抗肿瘤新药应进行药物作用机制初步研究。

二、体外抗肿瘤活性试验 1. 试验目的

1.1 对候

实用标准

抗肿瘤药物药效学实验方法及指导原则

一、基本原则 1. 抗肿瘤药物分类

(1) 细胞毒类药物(cytotoxic agent)：包括干扰核酸和蛋白质合成、抑制拓扑异构酶及作用于微管系统的药物等；

(2) 生物反应调节剂(biological response modifier)； (3) 肿瘤耐药逆转剂(resistance reversal agent)； (4) 肿瘤治疗增敏剂(oncotherapy sensitizer)；

(5) 肿瘤血管生成抑制剂(tumor angiogenesis inhibitor)； （6）分化诱导剂(differentiation inducing agent)； (7) 生长因子抑制剂(growth factor inhibitor)； （8）反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide) 。

2. 抗肿瘤药物药效学需研究内容

2.1 包括体外抗肿瘤试验，体内抗肿瘤试验。

2.2 评价药物的抗癌活性时，以体内试验结果为主，同时参考体外试验结果以做出正确的结论。

2.3 I类抗肿瘤新药应进行药物作用机制初步研究。

二、体外抗肿瘤活性试验 1. 试验目的

★脾细胞保存方法

（一）短期保存技术

适用范围：术后1周PRT反应。

保存方法：将分离到的细胞用适量含10％～20％灭活小牛血清的RPMI1640培养液稀释重悬。置4℃保存较好，可减低细胞代谢活动。要注意不要迅速改变细胞所处的温度，以免造成细胞“温度”休克。保存1管即可。 （二）长期冷冻保存技术

适用范围：术后2周以后的PRT反应。 保存方法：利用液氮深低温（－196℃）环境保存细胞，冷冻时的降温速度和细胞解冻时的升温速度对细胞活力的保存有很大影响。低速离心后，取沉积细胞用含10％二甲亚砜的小牛血清配制成适当浓度的细胞悬液，分装于冻存管内（保存3管），速即放入降温过渡站中，避免二甲亚砜对细胞的损伤。用两步降温法，即迅速降温至－80℃低温冰箱过夜，或在液氮罐液面以上的一层空间放置片刻，然后再放入液氮中。如需复苏细胞，则需迅速解冻以恢复细胞的活力，要求在20s以内完全融化。将冻存管自液氮中取出，立即放入40℃温水中，融化后即从水中取出，吸出细胞悬液，加入10倍的培养液中混匀，继而低速离心，尽快洗去保护剂，再悬于新培养液中，计数并检查细胞活力，然后置37℃培养箱内培养。

★相关试剂的配制

（一）PBS：800ml蒸馏水中，溶解8克N

实验一 准备实验（一）

分光光度计的使用

一. 目的

通过电化教学方式学习分光光度计的工作原理 掌握比色测定的基本操作方法

二. 原理

光线的本质是电磁波的一种，有不同的波长。肉眼可见的彩色光称为可见光，波长范围在400～750nm：小于400nm的光线称为紫外光；大于750nm的光线称为红外光。

当光线通过透明溶液介质时，其辐射的波长有一部分被吸收，一部分透过、因此光线射出溶液之后，部分光波减少，这种光波的吸收和透过可用于某些物质的定性定量分析。

LI0CI分光光度法依据Lambert-Beer定律：lg令A = lgI0II0I = KCL

，T =

II0，则A = KCL，A = -lgT

A：吸光度（有时用光密度OD表示） I0：入射光强度 L：溶液的光径长度

其中：T：透光率 I： 透射光强度 K：吸收系数 C：溶液的浓度

从上式可以看出，一束单色光通过溶液后，光波被吸收一部分，其吸收多少与溶液中溶质的浓度和溶液厚度成正比，当入射光、吸收系数K和溶液的光径长度L不变时，吸光度A与溶液的浓度C成正比。

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三. 实验材料及设备

1. 仪器

分光光度计 放相

一、土壤有机碳测定

实验方法：重铬酸钾容量法——外加热法

仪器：油浴消化装置、矿物油或植物油、可调温电炉、分析天平（感应量0.0001g）、硬质试管、温度计（0~300℃）、酸式滴定管、三角瓶（250ml）、小漏斗 试剂：0.8mol·L-1（1/6K2Cr2O7）标准溶液、浓硫酸（分析纯）、0.2mol·L-1FeSO4溶液、0.1mol·L-1（1/6K2Cr2O7）标准溶液、邻菲罗啉指示剂

二、土壤全氮量测定

实验方法：凯氏定氮法

仪器：消化炉、消化管、分析天平（感量0.0001g）、凯氏定氮仪 试剂：浓硫酸、混合催化剂、40%NaOH溶液、硼酸指示剂

三、土壤有效性氮测定

实验方法：扩散吸收法

仪器：半微量滴定管（5ml）、扩散皿

试剂：1.8mol·L-1氢氧化钠溶液（适用于旱地土壤）、1.2mol·L-1氢氧化钠溶液（适用于水稻土）、2%硼酸溶液、0.01mol·L-1盐酸溶液、特制胶水（阿拉伯胶）、硫酸亚铁（粉状）

四、土壤全磷量测定

实验方法：HClO4—H2SO4消煮法

仪器：分析天平、开氏瓶或消化管、小漏斗、电炉、三角瓶、移液管、比色杯、容量瓶、分光光度计

试剂：浓硫酸、70%~72%高氯酸、2,6-二硝基酚或2,4

塞音格局的实验方法

肖启迪

发辅音时，有不同的发音部位和发音方法共同作用，所以辅音的声学特征比元音更加复杂，在语图上的表现也是如此。我们观察辅音在语图上的声学表现，主要是看以下几种基本模式：

图1 辅音语图基本模式示意图

上图中各语图模式所代表的调音作用如下所示：

表1 语图模式与调音作用

语图模式 闭塞段 浊音杠 冲直条 乱纹 共振峰 调音作用 塞音、塞擦音闭塞段 浊辅音 与元音共振峰相似，但频率很低 备注 塞音、塞擦音爆发瞬间 舌根音可能不只一条 擦音、送气段 元音 擦音乱纹能量比送气音更大，特别是在高频区 辅音多具离散性特征，在进行辅音格局的研究时，要根据不同的辅音系列分为不同的下位子格局，如塞音格局、擦音格局、鼻音和通音的鼻化度对比等。下面，我们将要介绍的是塞音格局的分析方法。 一、实验原理

塞音（stop），是指发音时声道完全闭塞爆发而成的音。我们在进行塞音格局的研究时，选取闭塞段时长和浊音起始时间两个声学参量：

1、闭塞段时长（GAP）

闭塞段时长是塞音发音时的成阻时间长度。GAP值表示的是塞音本身“塞”这个特征，主要反映发音时肌肉的紧张程度。在语图上的表现就是塞音前面元音共振峰横杠的终点到塞音的除阻冲直条之间的一段空隙。因为