临床生物化学与检验技术实验批内重复性实验报告

第九章 肾脏疾病的生物化学诊断

一 单项选择题

1．肾病时血浆蛋白质的改变应除外

A白蛋白降低 B前白蛋白降低 CIgG降低 DIgM降低 E总蛋白降低 2．不能影响血清尿素浓度的是

A肝功能状态 B饮食中蛋白质摄入量 C肾功能状态 D全身肌肉重量 E胃肠道出血 3.下列物质中何种不属于非蛋白含氮物

A尿素 B尿酸 C胆红素 D胆酸 E 肌酐

4.原尿中的[HCO3-],葡萄糖等被重吸收的主要部位是

A远曲小管 B近曲小管 C集合管 D髓袢降支 E髓袢升支 5.下列各项中几乎不被肾小管重吸收的物质是

A尿素 B氨基酸 C肌酸 D谷胱甘肽 E肌酐 6.肾小管重吸收最重要的部位是

A近曲小管 B远曲小管 C髓袢细段 D髓袢粗段 E集合管 7.肾小球可以滤过血浆主要依靠

A有效渗透压作用

第十章血浆蛋白质与含氮化合物的代谢紊乱

教学目标与要求

掌握：血浆中几种重要蛋白质的性质及其临床应用；血清蛋白质电泳组分的临床分析；高尿酸血症和痛风的发生机制；血清总蛋白、清蛋白、蛋白电泳的检测方法。

熟悉：血浆蛋白质的种类及生理功能；原发性和继发性氨基酸代谢紊乱的概念；含硫氨基酸检测的临床意义。

了解：苯丙酮酸尿症、酪氨酸血症、嘌呤核苷酸代谢紊乱。

第一节 血浆蛋白质及其代谢紊乱

蛋白质是人体中含量和种类最多的物质，蛋白质占人体干重的45％，种类约有10万之多。几乎在所有的生理过程中蛋白质都起着关键作用。 血浆蛋白质是血浆固体成分中含量最多的一类化合物，目前已有所了解的血浆蛋白质约有500种。

血浆蛋白的IEF/SDS-PAGE电泳图谱

取一滴血浆在电泳板的左下角点样。

先在水平方向进行等电聚焦电泳（IEF），接着在垂直方向进行SDS-PAGE。

一、血浆蛋白质的种类

盐析法:将血浆蛋白质分为清蛋白和球蛋白两大类。

通过醋酸纤维膜电泳或琼脂糖凝胶电泳将血浆蛋白质分成清蛋白和α1、α2、β、γ-球蛋白等五个主要区带 。

二、血清蛋白质电泳组分的临床分析

（一）血清蛋白电泳的正常图谱 血清蛋白电泳（serum protein electrophoresis，SP

生物化学实验报告

生物化学

实验报告

班级：食品08-1班 姓名：刘鸣畅

学号：080424102 指导老师：林善枝

1

生物化学实验报告

2

生物化学实验报告

实验一 过氧化物酶活性的测定

1实验目的：

掌握酶活性的测定方法和原理。

2实验原理：

过氧化物酶是一种含铁卟琳的氧化酶，是利用H2O2将代谢中一些化合物氧化，其活性与呼吸作用和其一些生理过程有关。测定过氧化物酶的活性变化是植物生理和病理上一个常用的指标。

过氧化物酶能催化过氧化氢对某些物质的氧化，如催化过氧化氢氧化愈伤木酚作为被氧化的基质，呈现的棕色可在OD470检测。

3材料设备及试剂

3.1材料：

本实验中采用马铃薯皮。

3.2设备：

容量瓶（25ml）、量筒（25ml）、移液管（1ml）、研体、试管架 72型分光光度计、冰箱、离心机、1/100扭力天平、秒表。

3.3试剂：

0.2M磷酸缓冲液（pH=6.0)、反应混合液【0.2M磷酸缓冲液（pH=6.0)100ml，加入愈伤木酚0.019ml，开始实验前在加入30% H2O2 0.02ml，摇匀】

4实验步骤

称取一定量马铃薯外皮，加少许石英砂及0.2M pH6.0磷酸缓冲液磨成匀浆（分批加入并记录体积），至液体粘

临床生物化学检验试题 一 选择题（单项选择） 1.下列可降低血糖的激素是 A 胰高血糖素 B 胰岛素 C 生长素 D 肾上腺素

2．长期饥饿后，血液中下列哪种物质含量升高：

A 葡萄糖 B 血红素 C 乳酸 D 酮体

3．检测静脉血葡萄糖，如果血浆标本放置时间过长，会造成测定结果： A 升高 B 降低 C 不变

D 无法确定

4．脑组织主要以什么为能源供给： A 葡萄糖 B 氨基酸 C 蛋白质 D 脂肪

5.当血糖超过肾糖阈值时,可出现： A 生理性血糖升高

B 病理性血糖升高 C生理性血糖降低 D 尿糖

6.下列哪种物质不属于酮体： A 丙酮 B乙酰乙酸 C β-羟丁酸 D 丙酮酸 7．正常情况下酮体的产生是在 A 肝脏 B脑垂体 C 胰脏 D 肾脏

8．胆固醇可转化为下列化合物，但除外： A 胆汁酸 B 维生素D3 C 雄激素

D 绒毛膜促性腺激素

9．血浆中催化脂肪酰基转运至胆固醇生成胆固醇酯的酶是：

A 血浆卵磷脂胆固醇脂酰转移酶 B内质网脂酰COA胆固醇脂酰转移酶 C 天冬氨酸氨基转移酶 D 脂蛋白脂肪酶 10．由胆固醇转变成的维生素是

A VitA B

生物化学实验指导 实验一 蛋白质性质实验

【实验目的】

加深对蛋白质胶体分子稳定因素的认识，了解蛋白质的沉淀反应、变性作用的原理及其相互关系。 【实验原理】

1.蛋白质的沉淀反应

蛋白质分子由于形成水化层和双电层而成为稳定的胶体颗粒。但是，蛋白质胶体颗粒的稳定性是有条件的、相对的。在一定的物理化学因素影响下，蛋白质颗粒失去电荷、脱水，甚至变性而丧失稳定因素，即以固态形式从溶液中析出，这种作用称为蛋白质的沉淀反应。该反应可分为以下两种类型：

（1）可逆沉淀反应

在发生沉淀反应时，蛋白质虽已沉淀析出，但其分子内部结构并未发生显著变化，基本

上保持原有的性质。沉淀因素除去后，蛋白质沉淀可再溶于原来的溶剂中。这种沉淀

反应

为可逆沉淀反应。属于此类反应的有盐析作用；在低温下，乙醇或丙酮对蛋白质的短时间作

用以及等电点沉淀等。

用大量中性盐使蛋白质从溶液中析出的过程称为蛋白质的盐析作用。蛋白质是亲水胶体，在高浓度的中性盐影响下，蛋白质分子被盐脱去水化层，同时，蛋白质分子所带的电荷被中和，蛋白质的胶体稳定性遭到破坏而沉淀析出。沉淀出的蛋白质仍保持其天然蛋白质的性质，若减低盐的浓度时，还能溶解。

（2）不可逆的沉淀反应

在发生沉淀反应时，蛋白质的分子内部结

生物化学实验指导 实验一 蛋白质性质实验

【实验目的】

加深对蛋白质胶体分子稳定因素的认识，了解蛋白质的沉淀反应、变性作用的原理及其相互关系。 【实验原理】

1.蛋白质的沉淀反应

蛋白质分子由于形成水化层和双电层而成为稳定的胶体颗粒。但是，蛋白质胶体颗粒的稳定性是有条件的、相对的。在一定的物理化学因素影响下，蛋白质颗粒失去电荷、脱水，甚至变性而丧失稳定因素，即以固态形式从溶液中析出，这种作用称为蛋白质的沉淀反应。该反应可分为以下两种类型：

（1）可逆沉淀反应

在发生沉淀反应时，蛋白质虽已沉淀析出，但其分子内部结构并未发生显著变化，基本

上保持原有的性质。沉淀因素除去后，蛋白质沉淀可再溶于原来的溶剂中。这种沉淀

反应

为可逆沉淀反应。属于此类反应的有盐析作用；在低温下，乙醇或丙酮对蛋白质的短时间作

用以及等电点沉淀等。

用大量中性盐使蛋白质从溶液中析出的过程称为蛋白质的盐析作用。蛋白质是亲水胶体，在高浓度的中性盐影响下，蛋白质分子被盐脱去水化层，同时，蛋白质分子所带的电荷被中和，蛋白质的胶体稳定性遭到破坏而沉淀析出。沉淀出的蛋白质仍保持其天然蛋白质的性质，若减低盐的浓度时，还能溶解。

（2）不可逆的沉淀反应

在发生沉淀反应时，蛋白质的分子内部结

生物化学实验讲义

实验一 蛋白质的颜色反应与沉淀反应

蛋白质分子中的某种或某些基团与显色剂作用，可产生特定的颜色反应。不同蛋白质所含的氨基酸不完全相同，颜色反应亦可不同。颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物质亦可产生相同的颜色反应，因此不能仅根据颜色反应的结果决定被测物质是否是蛋白质。颜色反应是一些常用的蛋白物质的定量测定的依据。

多数蛋白质是亲水胶体，当其稳定因素被破坏或与某些试剂结合成不溶解的盐后，即产生沉淀。

实验材料与仪器

鸡（或鸭）蛋白

吸管0.5 ml（×1）、1ml（×3）、2 ml（×2）、5ml（×2） 滴管

试管1.5×15cm（×10） 水浴锅 电炉

吸滤瓶500ml（1） 布氏漏斗

试剂

1. 卵清蛋白液：将鸡（或鸭）蛋白用蒸馏水稀释20～40倍，2～3层纱布过滤，滤液冷藏备用。 2. 1%苯酚溶液：苯酚1ml，加蒸馏水稀释至100ml。

3. 1%白明胶液：1g白明胶溶于少量热水，完全溶解后稀释至100ml。

4. 米伦（Millon）试剂：40g汞溶于60ml浓硝酸（比重1.42），水浴加温助溶，溶解后加二倍体积蒸馏水，混匀，静置澄清，取上清液备用。此试剂可长期保存。

5. 0.5%茚三酮溶液：0.5g茚三

第二章 蛋白质与非蛋白含氮化合物的代谢紊乱

一、1.A 2.C 3.E 4.E 5.E 6.D 7.D 8.D 9.A 10.D 11.B 12.D 13.A 14.E 15.C 16.E 17.D 18.A 1．AMP在体内分解时，首先形成的核苷酸是

A IMP B XMP C GMP D CMP E UMP 2．AMP和GMP在细胞内分解时，均首先转化成

A 黄嘌呤 B 次黄嘌呤 C 次黄嘌呤核苷酸 D 黄嘌呤核苷酸 E 黄嘌呤核苷 3．血浆清蛋白所具有的功能一般不包括

A营养修补作用 B维持胶体渗透压 C运输载体作用 D作为血液酸碱缓冲成分 E免疫和防御功能 4．血浆清蛋白水平一般不下降的病理情况是

A手术后 B吸收功能紊乱 C营养不良 D肾病综合征 E急性肝炎早期 5．不属急性时相反应蛋白的是

A ALB B AAG C Hp D C3 E LDL 6．急性时相反

生物化学实验指导 实验一 生化实验基本操作

一. 玻璃仪器的洗涤

在生化实验中，玻璃仪器洁净与否，是获得准确结果的重要环节。洁净的玻璃仪器内壁应十分明亮光洁，无水珠附着在玻壁上。 ㈠ 常用的洗涤方法：

1.一般仪器，如烧杯、试管等可用毛刷蘸肥皂液、合成洗涤剂仔细刷洗。然后用自来水反复冲洗，最后用少量蒸馏水冲洗2~3次，倒置在器皿架上晾干或置于烘箱烤干备用。

2.容量分析仪器如吸量管、容量瓶、滴定管等，不能用毛刷刷洗。用后应及时用自来水多次冲洗，细心检查洁净程度，根据挂不挂水珠采取不同处理方法。（1）如不挂水珠，用蒸馏水冲洗、干燥，方法同上；（2）如挂水珠，则应沥干后用重铬酸钾洗液浸泡4~6小时，然后按上法顺序操作，即先用自来水冲洗，再用蒸馏水冲洗，最后干燥。

3.粘附有血浆的刻度吸量管等，有三种洗涤方法：（1）先用45%尿素溶液浸泡，使血浆蛋白溶解，然后用自来水冲洗；（2）也可用1%氨水浸泡，使血浆溶解，然后再依次用1%稀盐酸溶液、自来水冲洗；（3）以上二法如达不到清洁要求，可浸泡于重铬酸钾洗液4~6小时，再用大量自来水冲洗，最后用蒸馏水冲洗2~3次。

4.新购置的玻璃仪器，应先置于1~2%稀盐酸溶液中浸泡2~6小时，除去附着的游离碱，

水分仪重复性影响因素

水分含量公式:

X=F值×V测（被测样品消耗试剂体积）/M测（被测样品质量） F值=M标（标准水质量）/V标（标准水消耗试剂体积） X=M标×V测/（V标×M测）

从公式中可以看出，以上M标、V标、M测和V测四个值对水分含量值都会有影响，在F值不变的情况下，影响水分含量重复性的只有V测和M测；

1. 样品进样不完全（M测影响）

原因分析：

a进样时，反应杯壁（进样口）有残留，造成结果偏小 解决方法：

1. 液体样品，通过注射器进样（最好进到液面以下），尽量避免样品沾到反应杯壁；

2. 固体样品，通过称量舟进样，尽量避免样品沾到反应杯壁；

2. 样品没有完全溶解（M测影响）

原因分析：

a样品在溶剂中溶解不完全，造成结果偏小；

解决方法：

1.搅拌充分，让样品完全溶解；

2.选择合适的溶剂来溶解样品；

3.不要把“废液”当空白溶剂用，以免样品在溶液中饱和；

4.不要“废液”当空白溶剂用，避免两样品之间反应生成水或消耗水；

3. 电极灵敏度问题（V测影响）

原因分析：

a电极被氧化

解决方法：

1. 一般常用5%稀硝酸浸泡双铂探头24小时处理；

2. 用餐巾纸来回摩擦双铂探头，擦除表面氧化物；

b电极漏液，造成检测终点信号不一致；

解决方法：