薄层色谱法的原理

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中国药典2010年版薄层色谱法试题

一、 填空（43分）

1、市售薄层板分（ ）和（ ），如硅胶薄层板、硅胶GF254薄层板、聚酰胺薄膜等。

2、薄层板如在存放期间被空气中杂质污染，使用前可用（ ）、（ ）或二者的混合溶剂在展开缸中上行展开预洗，（ ）活化，置干燥器中备用。

3、薄层板在使用前检査其均匀度，在反射光及透视光下检视，表面应（ ）、（ ）、（ ），（ ）、（ ）、（ ）及（ ）。

4、薄层点样除另有规定外，在洁净干燥的环境，用专用毛细管或配合相应的半自动、自动点样器械点样于薄层板上，一般为（ ）或（ ），点样基线距底边（ ），高效板一般基线离底边（ ）。圆点状直径一般不大于（ ），高效板一般不大于（ ）。

5、薄层点样，可用专用半自动或自动点样器械喷雾法点样。（ ）宽度一般为5 10mm。高

标 准 操 作 规 程

STANDARD OPERATION PROCEDURE

编号 版本号 编制部门 审核部门 审核部门 批准 颁发部门 SOP-02-QC-014 0.0 QC QC经理 QA经理 质量副总经理 质量保证部 题目 生效日期 签名/日期 签名/日期 签名/日期 签名/日期 分发部门 薄层色谱法标准操作规程 2015年12月1日 QC 1目的：规范薄层色谱法的标准操作程序，使其操作过程规范化，避免人为错误。 2适用范围：适用于薄层色谱法的标准操作。 3责任：QC人员对本SOP实施负责。 4内容

薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜的标准物质按同法所得的色谱图对比，亦可用薄层色谱扫描仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定。 4.1.仪器与材料

4.1.1.薄层板 按支持物的材质分为玻璃板、塑料板或铝板；按固定相种类分为硅胶薄层板、键合硅胶板、微晶纤维素薄层板、聚酰胺薄层板、氧化铝薄层板等。固定相中可加入黏合剂、荧光剂。硅胶薄层板常用的有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254、G、H表示含或不含石膏黏合剂。F254为在紫

　　1. 药典：薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与事宜的对照物按同法所得的色谱图对比，并可用薄层扫描仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定。

　　2. 如果你是做鉴别的话，薄层的系统适用性主要是做检测限和分离度;

　　3. 如果你是做含量测定，比如说用薄层扫描法，薄层的系统适用性应该做线性范围、同板精密度、异板精密度、回收率;

　　4. 手工铺制的板子，只适宜于定性分析，不宜于分离定量;

　　5. 化学药一般是作有关物质，需要一定的载药量，所以要适当增加厚度;

　　6. 中药一般较难分离，需要薄板，以增加分离度;

　　7. 手工铺制的板子常用的有：硅胶G板和硅胶CMC-Na板。前者是煅石膏(石膏经140℃烘烤3—4小时)与硅胶按1—1.3：10混合均匀。每份硅胶G加水2—3份调成糊状，即可使用。后者的操作各位大虾已有论述。

　　8. 如果你铺板目的是做分析用的话，肯定得很仔细用心;如果仅是天然药化那种粗略检查过柱子得到的馏分纯度，那就没有必要这么复杂了，也就是说速度可以快点，板的要求也没有必要这么高;

　　9. 单纯的手铺板，技巧要求很高的，如果有铺板器(也是完全手动的那种)，铺出的板子基本上可以

******有限公司 薄层色谱法操作规程 SOP-10029-00 起草人： 日期： 批准人： 日期： 拷贝号： 变更记载： 修订号 01 02 审 核 人： 日期： 执行日期： 颁发部门：质量部 制定（变更）原因及目的：新建 批准日期 执行日期 质 量 部 [ ]份 生 产 部 [ ]份 财 务 部 [ ]份 行政人力资源部 [ ]份 销 售 部 [ ]份 分发部门 物 料 部 [ ]份 薄层色谱法操作规程

1. 目的：建立薄层色谱法检验的标准操作程序，确保薄层色谱法检验结果的准确性。 2. 适用范围：适用于本公司实验样品的薄层色谱检验。 3. 职责

检验员：严格按检验操作规程进行检验。 QC主管：监督检查执行情况。 4. 定义

薄层色谱法系将供试品溶液点样于薄层板上，经展开、检视后所得的色谱图， 与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用于药品的鉴别或杂质检查的方法。 5. 仪器与材料 5.1.

玻板：除另有规定外，用

第十三章 色谱分析导论

一、选择题

1. 降低固定液传质阻力以提高柱效的措施有（ AC ）

A．增加柱温 B.提高载气流速 C.适当降低固定液膜厚度 D.增加柱压 2. 影响两组分相对保留值的因素是（ ＢＤ ）

A．载气速度 B.柱温 C.柱长 D.固定液性质 E.检测器类型 3. 常用于评价色谱分离条件选择是否适宜的物理量是（ Ｃ ）

A．理论塔板数 B.踏板高度 C.分离度 D.死时间 E最后出峰组分的保留时间 4. 产生拖尾峰的原因可能是（ ABCD ）

A．进样速度太慢 B进样量过大 C气化温度过低 D柱温太低 E记录纸速太慢 5. 衡量色谱柱选择性的指标是（ C ）

A．理论塔板数 B容量因子 C相对保留值 D分配系数

6. 在一定柱长条件下，某一组分色谱峰的宽窄主要取决于组分在色谱柱中的（ B ） A．保留值 B扩散速度 C分配系数 D容量因子 7. 反应色谱柱性能的参数是（ B ）

Ａ保留值 Ｂ相比 Ｃ分配系数 Ｄ容量因子 ８.下列哪些参数可以引起相对保留值的增加（ D ） Ａ柱长增加 Ｂ相比 Ｃ

● 薄层色谱法：

薄层色谱法(thin layer chromatography，TLC)系将供试品溶液点样于涂布有固定相的薄层板上，经展开、检视后所得的色谱图，与适宜的对照物按同法操作所得的色谱图进行比较，主要用于药品的鉴别或杂质检查。 考点1：薄层色谱法的操作方法

制板——点样——展开——定位——结果 制版：将固定相涂布在薄板上

常用固定相：硅胶、硅藻土、氧化铝、微晶纤维素、聚酰胺 涂布方法：研磨——除气泡——涂布——晾干——活化

活化方法：在ll0℃加热30分钟(目的：使硅胶吸附力增强) 点样：将样品点在薄层板上

点样要求：一般为圆点圆点，点样基线距底边2cm，样点直径为2～4mm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜，一般为1.0～2.0cm。点样时必须注意勿损伤薄层板表面。 展开剂：可以是单一溶剂，可以用是不同试剂按一定比例组成的混合溶剂。浸入展开剂的深度为距薄层底边0.5～1.0cm(切勿将样品点浸入展开剂中) 定位：记录展开剂前沿，及各斑点的位置 结果检视：

光学法：有色斑点、荧光淬灭、发射荧光：254nm，365nm 化学法：显色剂显色

考点2：色谱系统适用性试验

高效液相色谱法原理与应用参考书 《高效液相色谱及其应用》 《液相色谱检测方法》 《实用高效液相色谱法的建立》

第1章 色谱基本原理一、色谱法概述1. 2. 3. 4.

色谱法的定义与特点 色谱法的分离原理 色谱法的特点 色谱法的分类

1.色谱法的定义

茨维特的实验

色谱分离效果图

因此 色谱法是一种分离方法。– 它的特点是：有两相，一是固定相，一是流动相，两相作相向运动。

Chromatography 将色谱法用于分析中，则称为色谱分析。– 色谱分析是一种分离、分析法。

2、色谱法分离原理 当流动相中所携带的混合物流过固定相 时，就会和固定相发生作用(力的作用)。

由于混合物中各组分在性质和结构上有差异，与固定相发生作用的大小也有差 异。因此在同一推动力作用下，不同组 分在固定相中的滞留时间有长有短，从 而按先后不同的次序从固定相中流出。6

3、色谱法的分类

按流动相状态的不同，可分为 气相色谱法 (GC) 液相色谱法 (LC) 超临界流体色谱 (SFC)

什么是气相色谱法？ 以气体为流动相的色谱法 Gas Chromatogaphy,简称GC 适合分离分析易汽化(在- 190℃-500℃范围内有 0.2-10mmHg的蒸气压的)稳定、不易分

● 薄层色谱法：

薄层色谱法(thin layer chromatography，TLC)系将供试品溶液点样于涂布有固定相的薄层板上，经展开、检视后所得的色谱图，与适宜的对照物按同法操作所得的色谱图进行比较，主要用于药品的鉴别或杂质检查。 考点1：薄层色谱法的操作方法

制板——点样——展开——定位——结果 制版：将固定相涂布在薄板上

常用固定相：硅胶、硅藻土、氧化铝、微晶纤维素、聚酰胺 涂布方法：研磨——除气泡——涂布——晾干——活化

活化方法：在ll0℃加热30分钟(目的：使硅胶吸附力增强) 点样：将样品点在薄层板上

点样要求：一般为圆点圆点，点样基线距底边2cm，样点直径为2～4mm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜，一般为1.0～2.0cm。点样时必须注意勿损伤薄层板表面。 展开剂：可以是单一溶剂，可以用是不同试剂按一定比例组成的混合溶剂。浸入展开剂的深度为距薄层底边0.5～1.0cm(切勿将样品点浸入展开剂中) 定位：记录展开剂前沿，及各斑点的位置 结果检视：

光学法：有色斑点、荧光淬灭、发射荧光：254nm，365nm 化学法：显色剂显色

考点2：色谱系统适用性试验

第11章 气相色谱法

第1节 概述

以惰性气体为流动相的色谱法称为气相色谱法（gas chromatography；GC）。 一、气相色谱法的分类

气相色谱法属于柱色谱法（column chromatography）。按色谱柱的粗细，分为填充柱（packed column）色谱法及毛细管柱（capillary column）色谱法两种。填充柱是将固定相填充在金属或玻璃管中（常用内径2~4 mm）。毛细管柱（0.1~0.8 mm）可分为开管毛细管柱、填充毛细管柱等。按使用温度下的固定相的状态不同，又可分为气-固色谱法（GSC）和气-液色谱法（GLC）两类。按分离机制，可分为吸附及分配色谱法两类。在气-固色谱法中，固定相为吸附剂，属于吸附色谱法，其分离的对象主要是一些永久性的气体和低沸点的化合物。气-液色谱法属于分配色谱法，固定相是高沸点的有机物（称为固定液），由于可供选择的固定液种类多，故选择性较好，应用亦广泛。

本章主要介绍气-液色谱法。 二、气相色谱法的一般流程

图11-1 气相色谱流程图

1. 高压载气瓶；2. 压力调节器（a. 瓶压，b. 输出压）；3. 净化器；4. 气流调节阀

5. 气化室；6. 检测器；7. 柱温箱与色谱柱；8.

比较气相色谱法与高效液相色谱法分离原理、仪器构造及应用范围的不同点。 一、分离原理：

1.气相：气相色谱是一种物理的分离方法。利用被测物质各组分在不同两相间分配系数（溶解度）的微小差异，当两相作相对运动时，这些物质在两相间进行反复多次的分配，使原来只有微小的性质差异产生很大的效果，而使不同组分得到分离。

2.液相：高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（最高输送压力可达4.9′107Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。 二、应用范围：

1.气相：气相色谱法具有分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。一般对500℃以下不易挥发或受热易分解的物质部分可采用衍生化法或裂解法。

2.液相：高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大（大于 400 以上）的有机物（ 些物质几乎占有