荧光分析法测定维生素b2的含量实验报告

荧光光度分析法测定维生素B2的含量

引言

荧光分光光度法简介

有些物质，当用紫外光照射时，它吸收某种波长之后还会发射出各种颜色和强度不同的光；而当紫外光停止照射后，这种光线也随之消失，这种光线称为荧光。荧光的波长比吸收的紫外光波长要长。

由于物质分子结构不同，所吸收的紫外光波长和发射的荧光波长也有所不同。利用物质的这个特性，可以对物质进行定性分析。同一种分子结构的物质，用同一种波长的紫外光照射，可发射相同波长的荧光；若该物质的浓度不同，所发射的荧光强度也不同，利用这个性质可以对物质进行定量分析。这种定量方法称为荧光分析法，简称荧光法。测量荧光的仪器有滤光片荧光计，滤光片—单色器荧光计和荧光分光光度计。荧光法的选择性好，灵敏度比紫外-可见分光光度法高2~3数量级，检出限低，可以达到10~12g／m1，线性范围宽。现在主要应用的是荧光分光光度计。 【实验目的】

1. 学习荧光光度法测定维生素B2的含量的基本原理和方法。 2. 熟悉荧光光度计的结构及使用方法。 【实验原理】

在经过紫外光或波长较短的可见光照射后，一些物质会发射出比入射光波长更长的荧光。在稀溶液中，荧光强度IF 与物质的浓度c有以下关系：

IF?2.303?I0?bc

当实验条

1、了解荧光分光光度计的主要结构及工作原理2、掌握荧光光度计的操作技术和测定维生素片B2中核黄素的实验方法

补充实验 荧光法测定维生素B2片剂中核黄素含量

一、实验目的

1、 了解荧光分光光度计的主要结构及工作原理

2、 掌握荧光光度计的操作技术和测定维生素片B2中核黄素的实验方法

二、实验原理

某些物质被某种波长的光（如紫外光）照射后，会在极短时间内，发射出较入射光波长为长的光，这种光称为荧光。吸收什么波长范围的光和发射什么波长范围的光，这与被照射的物质有关。而所发射的荧光的强度与该物质的浓度有如下关系：

-alc If=KфI0（1-e）

式中：If为荧光强度；K为仪器常数；ф为荧光物质的荧光量子产率；I0为入射光

-1强度；l为样品池厚度；c为荧光物质的浓度（mol l）；a为荧光物质的摩尔吸光系数。

当溶液浓度较稀时，则If=KфI0alc

可见，在稀溶液中，当入射光强度、样品池厚度、仪器工作条件不变时，测得的荧光强度与荧光物质的浓度成正比。

维生素B2，又叫核黄素，是橘黄色无臭的针状结晶，其结构式为

核黄素易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。

核黄素B2在230～490nm范围波长的光照射下，激发出峰值在526nm

实验六 荧光光度法测定样品中维生素B2的含量

一、目的与要求

1． 掌握用荧光光度法测定维生素B2的原理; 2． 加深对荧光光度法原理的理解; 3． 巩固荧光光度计的基本操作。 二、方法原理

维生素B2又称核黄素，溶于水，在ω为0.05的乙酸溶液中是一个强荧光物质，在中性和酸性溶液中，对热稳定，在碱性溶液中较易被破坏。维生素B2在一定波长光照射下产生荧光。在稀溶液中，其荧光强度与浓度成正比，即：

F = Kc

故可采用标准曲线法测定维生素B2的含量。 三、仪器与试剂

1．930型荧光光度计及其附件。 2．容量瓶：25 mL。

3．维生素B2标准贮备液（100 mg·L）：准确称取25mg维生素B2，用ω为0.05的乙酸溶解，转移至250 mL容量瓶中，用ω为0.05的乙酸溶液稀释至刻度，摇匀，保存于冰箱中。

4．维生素B2标准工作液（0.5mg·L-l）：吸取上述贮备液0.50mL于100 mL容量瓶中，用ω为0.05的乙酸溶液稀释至刻度，摇匀，随用随配。

5．含维生素B2的水样（自行制备）：取VB2片剂一片，用ω为0.05的乙酸溶液溶解（若有不溶杂质，过滤即可），稀释适当倍数后测量。

四、内容与步骤 1．标准系列溶液的配制

吸取维生素B2

实 验 报 告

姓名： 班级： 同组人： 自评成绩：

项目： 直接碘量法测定维生素C的含量 课程： 学号：

一、实验目的

1. 熟悉直接碘量法的操作步骤及注意事项。 2. 了解维生素C的测定原理及条件。 二、实验原理

维生素C又称抗坏血酸，其分子中的烯二醇基具有较强的还原性，能被I2定量氧化成二酮基，所以可用直接碘量法测定其含量。反应方程式如下：

OHOOOHCCH2OH+ I2HOHOOOHOCCH2OH+ 2HIHO

在中性或碱性条件下，维生素C易被空气中的O2氧化而产生误差，尤其在碱性条件下，误差更大。故该滴定反应在酸性溶液中进行，以减慢副反应的速度。

注意事项：

1. I2具有挥发性，取完后应立即盖好瓶塞。

2. 维生素C易被空气氧化而引入误差，所以不要3份同时移取。 3. 滴定近终点时应充分振摇，并放慢滴定速度。 三、仪器和药品

仪器：分析天平，酸式滴定管(25mL，棕色)，吸量管(2mL)，量筒(15mL、5mL)，碘量瓶(250mL)。

试剂：维生素C注射液(20mL : 2.5g)，

上海大学生命科学实验中心

课 程： 学 号：

生化分析实验 09123364

实 验 报 告

姓 名： 吴梦楠 同组者： 温 度：

日 期： 2011.09.21 指导老师： 戴小峰 湿 度：

实验时间： 2011.09.19

实 验 名 称：紫外可见分光光度法测定维生素B2 实 验 目 的：1、维生素B2的紫外可见光谱图的测绘

2、根据E1M444nm文献值323求取样品中VB2的含量 3、用标准曲线法求取样品中VB2的含量 4、比较两种方法的误差来源

实 验 原 理：维生素B2，通常指核黄素。维生素B2在224、267、375、444nm处具有吸收峰。一

般取444nm的波峰为定量吸收峰，除了用一般的工作曲线法外，还可按C17H20N4O6 的吸收系数（E1M444nm）为323计算，求取样品中维生素B2的含量。

实 验 器 材：Cary100UV-Vis分光光度计、冰醋酸（AR）、氢氧化钠1mol/L（AR）、维生素B2标

准试剂（0.3mg/ml）、药片（含维生素B2片）。

实 验 步 骤：1、取待测片剂20 片，精密称定、研细，精密称取适量（约相当于维生素B210mg），

紫外分光光度法测定维生素C片维生素C的含量

一、实验目的

1.学习利用紫外吸收光谱测定物质含量的原理和方法； 2.熟练紫外-可见分光光度计的操作。

二、实验原理

维生素C（VC）是一种酸性己糖衍生物，具有烯醇式己糖内酯立体结构，分D和L两种立体构型，但只有L型有生理功效。维生素C具有较强的还原性,在一定条件下氧化型和还原型可以互变 ,两者均具有生物活性(结构式见图1),其C2和C3位上两个相邻的烯醇式羟基极易解离而释放出H+,故维生素C虽然不含自由羧基，仍具有有机酸的性质。维生素C呈无色无臭的片状结晶体,易溶于水,不溶于脂。在酸性环境中稳定,遇空气中氧、热、光、碱性物质,特别是有氧化酶及痕量铜、铁等金属离子存在时可促进其破坏速度。

具有π电子的共轭双键化合物、芳香烃化合物等，在紫外光谱区都有强烈吸收，其摩尔吸收系数k可达104-106数量级。利用紫外吸收光谱进行定量分析，要借助朗伯-比尔定律。根据维生素C在稀硫酸溶液（维生素C水溶液在pH 5～ 6之间稳定）中，在245 nm 波长处有最大吸收的特性，建立了紫外分光光度法测定维生素C片含量的方法。

三、实验仪器及试剂

实验仪器：容量瓶（100 ml、1000 ml）、移液管（0.5 ml、5

实验维八生B1片素含量定的方测法验证计性实验设药分析实物

实验验原理 维素生1又称B盐硫胺酸 (tiahimnehy rdcohlroide),化名学为称氯4化甲基--3[2-甲(基-4氨--5-嘧基基)啶基]甲5-(-2羟-基基噻唑鎓乙盐盐

酸3H NCN

H2N H2 C

C2CHH2OH N+C 3HCl-HlC

性质溶解 :水中性易，溶乙醇中微，溶乙醚不中溶硫色素反 :应 外吸紫特性收Amax:=24n6 m 生物与沉淀试碱反应剂 氯化物性特：氯化物查检特性鉴别征含量测定

原

理征特鉴别—性硫—素色应反生素维1B在碱中可被液氰化铁钾化氧成生色硫素色素转，溶于正丁(醇异丁醇、或异戊醇中),显于现酸中失的消蓝色荧。光(见文英主刘编《药物分》析第版，六P528) 量含定测1%生维素1B有外吸收紫，Ama=246xm,n E1c m4 21

实验方法

.1鉴反应别取品本约m5,加g氧化钠试液氢2.ml5使溶其，解加铁氰钾试化液.5m0l正与丁醇5l,强力m摇振min,2置放成两液层，使层上醇液显强烈的蓝色荧光，加酸使即酸成荧光性消失即，加再碱成碱使，则性荧光复现

2.。量测含定如计算出所需何的要？量精称取密粉适量，片当于相维生B素125mg,置10ml0瓶量中

实验维八生B1片素含量定的方测法验证计性实验设药分析实物

实验验原理 维素生1又称B盐硫胺酸 (tiahimnehy rdcohlroide),化名学为称氯4化甲基--3[2-甲(基-4氨--5-嘧基基)啶基]甲5-(-2羟-基基噻唑鎓乙盐盐

酸3H NCN

H2N H2 C

C2CHH2OH N+C 3HCl-HlC

性质溶解 :水中性易，溶乙醇中微，溶乙醚不中溶硫色素反 :应 外吸紫特性收Amax:=24n6 m 生物与沉淀试碱反应剂 氯化物性特：氯化物查检特性鉴别征含量测定

原

理征特鉴别—性硫—素色应反生素维1B在碱中可被液氰化铁钾化氧成生色硫素色素转，溶于正丁(醇异丁醇、或异戊醇中),显于现酸中失的消蓝色荧。光(见文英主刘编《药物分》析第版，六P528) 量含定测1%生维素1B有外吸收紫，Ama=246xm,n E1c m4 21

实验方法

.1鉴反应别取品本约m5,加g氧化钠试液氢2.ml5使溶其，解加铁氰钾试化液.5m0l正与丁醇5l,强力m摇振min,2置放成两液层，使层上醇液显强烈的蓝色荧光，加酸使即酸成荧光性消失即，加再碱成碱使，则性荧光复现

2.。量测含定如计算出所需何的要？量精称取密粉适量，片当于相维生B素125mg,置10ml0瓶量中

橙子中维生素C含量的测定

——直接碘量法 吉林大学化学学院

2013.6.7

前言

维生素C ，无色晶体，分子式C6H8O6，分子量为176.13，纯品为白色结晶或结晶性粉末，无臭、味酸，久置颜色渐变微黄，水溶液呈酸性，易溶于水中，能溶于乙醇中，而不溶于氯仿或乙醚中，熔点为190~192℃，熔融时同时分解。 维生素C又名抗坏血酸，是一种重要的水溶性维生素。它与人体的多种代谢有关，可降低毛细血管通透性、降低血脂、增强机体的抵抗能力，并有一定的解毒功能和抗组胺作用。人体不能合成及贮存维生素C，故必需从外界摄取。维生素C在自然界分布很广，主要存在于植物性食物的果实、浆果和蔬菜中。不同的水果、蔬菜中维生素C 的含量不同。测定果蔬中维生素的含量对评定其营养具有重要的意义。对于其含量测定，本实验采用直接碘量法，该方法简便、快速、较为准确。其化学式为C6H8O6，相对分子质量为176.1。由于分子中的烯二醇基

具有还原性，能被I2定量地氧化成二酮基。

由于抗坏血酸具有较强的还原性，在空气中极易被氧化而变成黄色，尤其是在碱性介质中更甚，测定时加入HAc使溶液呈弱酸性，减少维生素C的副反应。 直接碘量法：加入淀粉做指示剂，然后用标定好的已知浓度的I2与抗坏血酸反应

橙子中维生素C含量的测定

——直接碘量法 吉林大学化学学院

2013.6.7

前言

维生素C ，无色晶体，分子式C6H8O6，分子量为176.13，纯品为白色结晶或结晶性粉末，无臭、味酸，久置颜色渐变微黄，水溶液呈酸性，易溶于水中，能溶于乙醇中，而不溶于氯仿或乙醚中，熔点为190~192℃，熔融时同时分解。 维生素C又名抗坏血酸，是一种重要的水溶性维生素。它与人体的多种代谢有关，可降低毛细血管通透性、降低血脂、增强机体的抵抗能力，并有一定的解毒功能和抗组胺作用。人体不能合成及贮存维生素C，故必需从外界摄取。维生素C在自然界分布很广，主要存在于植物性食物的果实、浆果和蔬菜中。不同的水果、蔬菜中维生素C 的含量不同。测定果蔬中维生素的含量对评定其营养具有重要的意义。对于其含量测定，本实验采用直接碘量法，该方法简便、快速、较为准确。其化学式为C6H8O6，相对分子质量为176.1。由于分子中的烯二醇基

具有还原性，能被I2定量地氧化成二酮基。

由于抗坏血酸具有较强的还原性，在空气中极易被氧化而变成黄色，尤其是在碱性介质中更甚，测定时加入HAc使溶液呈弱酸性，减少维生素C的副反应。 直接碘量法：加入淀粉做指示剂，然后用标定好的已知浓度的I2与抗坏血酸反应