微生物的实验室培养教学视频

课题1: 微生物的实验室培养（导学案）

高二生物组

目标导引

1、通过学习知道培养基的种类、营养要素及如何配制培养基 2、通过学习知道消毒灭菌的原理和方法

3、通过学习你将知道如何用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的纯化培养

问题导学

一、培养基:阅读课本培养基的相关内容，完成下列问题：

（1）培养基分为哪两类？二者的区别？培养基有何用途？

（2）不同的微生物所需要的培养基配方相同吗？培养基的基本成分（主要营养物质）有哪些？为什

么大多数培养基都需要具备这些基本成分？

（3）培养基除能为微生物生长提供几种主要营养物质外，培养基还需要满足微生物生长的哪些要求？

（4）你知道牛肉膏、蛋白胨可以为微生物的生长提供哪些营养物质吗？

二、无菌技术：阅读无菌技术的相关内容，完成下列问题：

（1）获得纯净培养物的关键是什么？无菌技术围绕什么而展开？主要包括哪几个方面？

（2）什么是消毒与灭菌？二者的区别？实验室常用的消毒方法、灭菌方法有哪些？分别适用于那些用具？

（3）利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么？

（4）请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。

①培养细菌用的培养基与培

教学准备

1. 教学目标

1.1 知识与技能：了解有关培养基的基础知识；掌握培养基的分类、成分及用途，无菌技术等基本操作技术。

1.2过程与方法：分析实验思路的确定和形成的原因，分析实验流程，对比前面的实验设计，归纳共性，分析差异，增加印象。

1.3情感、态度与价值观： 形成勇于实践、严谨求实的科学态度和科学精神。

2. 教学重点/难点

2.1 教学重点：培养基的分类、成分及用途及无菌技术的操作 2.2教学难点：无菌技术的操作

3. 教学用具

多媒体、板书

4. 标签

教学过程

引入新课

在传统发酵技术的应用中，都利用了微生物的发酵作用，其中的微生物来自于制作过程中的自然感染。而在工业化生产中，为了提高发酵的质量，需要获得优良菌种，并保持发酵菌种的纯度。这就要涉及到微生物的培养、分离、鉴别等基本技术。现在我们开始学习微生物的培养和应用专题。

课题背景 到目前为止，几十项Nobel生理学和医学奖，化学奖都与微生物学有关。 微生物基础知识：微生物的分类见课件。 进行新课

1．微生物基础知识

微生物包括五类：病毒、细菌、放线菌、真菌、原生动物

特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显

第 1 页 共 6 页

培养基管理规程

1 目的

规范微生物实验室培养基的申购、配制、培养基质量控制、储存、使用、废弃处理等。 2 依据

《药品质量管理规范》、《中国药典》2015年版 四部。 3 范围

适用于微生物实验室检验用的所有培养基。 4 职责

4.1 化验室负责人：监督本规程的实施。 4.2 化验室检验员：按照本规程实施。 5 工具 5.1 定义 培养基 干粉培养基 系指用人工方法将多种物质按各种微生物生长繁殖的需要配制成的一种混合营养物，用于微生物限度检查、控制菌检查等。 指以干粉形式存在的培养基。 6 内容

6.1 培养基的购买 6.1.1

培养基管理员每月清点干粉培养基的库存量，及时申请购买培养基，以保证实验的

正常进行。 6.1.2

新购进的干粉培养基由培养基管理员验收。验收内容包括：培养基质量检验报告书、

数量，批号、厂家、有效期、包装情况（应包装完整、容器密闭）。若发现包装不完整、不密闭、培养基受潮或物理性状发生了明显改变等应拒绝接收。验收合格后填写《培养基接收记录》，在培养基外部加贴《干粉培养基标签》，填写内容为：名称、接收日期、批号、有效期至、储存条件。

微生物 知识 管理

微生物实验室规范指导原则

微生物 知识 管理

影响药品微生物的检验结果的因素。 1、实验人员在取样或试验过程中污染微 生微。 2 、生物学分析方法本身的误差。 3 、样品中或环境中微生物分布不均匀等 因素在药品检验中，为保证微生物试验数 据的可靠性和重现性，药品微生物实验室 必须使用经验证的检测方法并按良好的实 验室规范指导试验。

微生物 知识 管理

药品微生物实验室规范包括以下几个方 面：人员、培养基、菌种、实验室的布 局和运行、设备、文件、实验记录、结 果的判断等。

微生物 知识 管理

人员培训从事药品微生物试验工作的人员均要受到教育、培训及 具备相关工作的经验。 微生物实验人员应具备微生物学或相近专业知识的教育 背景。 岗前培训 1 、根据实验人员的岗位及职责对其进行相应的培训 2、工作所必需的设备操作的培训 3、微生物检验技术的培训 4、实验室生物安全等方面的培训 经考核合格后方可上岗，同时，实验室应制定所有级 别实验人员的继续教育计划。

微生物 知识 管理

微生物实验室管理人员的培训 1、微生物实验室管理人员培训 包括：管理技能、实验室安全、试验按排、 预 算、实验室研究、实验结果评估和数据 偏差的调查及技术报告书写等。 。

微生物

良好的微生物实验室操作规范

简介

在微生物实验室中，良好的实验室操作规范是基于很多原则，包括以下活动：无菌技术、培养基的控制、菌种的制备、仪器设备的管理、细致的记录和数据的评估、人员的培训。众所周知，微生物测定数据的可变性、可靠性和重现性是基于公认方法的使用和坚持良好的实验室操作规范。

微生物菌种的维护

生物样本是最灵敏(delicate)的,因为他们生存能力和特性是依赖于适当的处理和贮存。菌种的处理和贮存的标准是使用者的实验室制定的，采用减少污染的机会和减少生长特性变更。小心一致的处理贮存用菌种是微生物测试结果一致性的重要因素。按药典方法方法使用的菌种应该取自国家菌种保藏中心。可以包括冷冻的、冻干的、斜面培养的或是马上使用的形式。在质量控制测试使用前应进行菌种纯度的确定和菌种的鉴别。马上使用的菌种要求确定纯度、鉴别、接种体大小。鉴定的确认，对通常用的实验室菌种，理想的是进行基因水平的分析（如：使用合适的经过验证的探针进行DNA指纹,RNA基因排序,PCR光电导继电器）

菌种的制备和复壮应该参照供应商的说明书或采用己验证批准的方法。种子批技术被推荐用于贮备用菌种的保存。

从国家菌种保藏中心得到的初始菌种在合适的培养基被复壮、培养

微生物实验室管理规章制度

1. 无菌室的门要随手关闭，以防外界微生物的进入。 2. 微生物室内应保持清洁，不得存放与实验室无关的物品。 3. 进入无菌室前要更换经过灭菌的专用工作衣帽鞋。

4. 无菌室内应备有体积分数为0.1%的新吉尔灭溶液体积分数为

70~75%的酒精棉球，以便样品表面及意外污染消毒。 5. 无菌室内应备有镊子剪刀接种针接种环，每次使用前后应在酒

精灯火焰上灼烧至无菌。

6. 检验人员在操作过程中需严格按照要求进行操作，不得随意减

少工序。

7. 无菌室禁止交谈，操作过程中不得用手触摸其它未消毒灭菌的

区域，与该工作无关人员不得随便出入无菌室。

8. 微生物（无菌室缓冲间）每次使用前，用紫外灯照射30min，

要每周检测一次室内空气清洁度，确保其符合实验条件。每周对微生物室进行至少一次2h以上紫外灯消毒。微生物室内的的菌种总数>5cfu/平皿时，需要对无菌室缓冲间用85~95%乳酸熏蒸1h，熏蒸结束后（必要时可以将空间密闭整晚），用体积分数为0.1%的新吉尔灭溶液或体积分数为70~75%的酒精棉彻底对洁净室缓冲间及其内所有设备物品进行清洗；后对无菌室缓冲间进行半小时以上紫外线消毒，结束后，验证室内空气清

洁度是否合格，仍不合格，则可加大

微生物实验室是我们检验人的一个工作空间,其良好的自然通风是绝对关键,必要时更应配备抽风机。接种、分离及鉴定细菌等操作应在生物安全柜中进行,对结核杆菌等传染性极强的微生物学检验时必须在100 %外临床微生物学实验室接触多种有害微生物,为了防止交叉污染,保护工作人员健康,实验室应至少划分成3个区。

小谈微生物实验室装修设计

微生物实验室是我们检验人的一个工作空间，其良好的自然通风是绝对关键，必要时更应配备抽风机。接种、分离及鉴定细菌等操作应在生物安全柜中进行，对结核杆菌等传染性极强的微生物学检验时必须在100 ％外临床微生物学实验室接触多种有害微生物，为了防止交叉污染，保护工作人员健康，实验室应至少划分成3个区。

一、清洁区

包括办公室、休息室、培养基配制室与试剂储藏室。此区域禁止带人细菌检验标本。

二、操作区

（1）整洁：微生物操作区是各种病原菌相对集中的地方，为了减少粉尘流动，防止交叉污染，操作区应与外界分开。实验室工作人员进入操作区应换鞋，送标本人员不进入操作区，操作区地面用专用拖把每天拖1 次，每周用消毒剂擦洗1 次。每天早上工作前，用紫外线照射30 min ，或每天工作后，用紫外线照射60 min ，对整个操作区进行消毒；下午工作结束后用消毒液消毒

可以借鉴的SOP文件

微生物实验室操作规程【SOP】 微 生 物 实 验 室 操 作 规 程 【 S O P 】

 细菌室工作守则（微生物室 SOP之一） 

 细菌室消毒隔离措施（微生物室 SOP之二） 

 微生物实验室安全与防护（微生物室 SOP之三） 

 细菌室内质控制度（微生物室 SOP之四） 

 细菌室操作技术规范（微生物室 SOP之六） 

 无菌间规章制度（微生物室 SOPSOP之七） 

 菌（毒种）管理办法（微生物室 SOP之八） 

 细菌室仪器维护保养及质控措施 （微生物室 SOP之九） 

 标准菌株保存及使用（微生物室 SOP之十） 

 细菌室内务管理规定（微生物室 SOP之十一） 

 标本采集及保存要求 （微生物室 SOP之十二） 

 室内质控失控处理程

高中生物选修一

课题一微生物的实验室培养

一、教学目标

1.1 知识与技能：

（1）了解有关培养基的基础知识；

（2）掌握培养基的分类、成分及用途，

（3）掌握无菌技术等基本操作技术。

1.2过程与方法：

分析实验思路的确定和形成的原因，分析实验流程，对比前面的实验设计，归纳共性，分析差异，增加印象。

1.3情感、态度与价值观：

形成勇于实践、严谨求实的科学态度和科学精神。

二、重点/难点

2.1 教学重点：

培养基的分类、成分及用途及无菌技术的操作

2.2教学难点：

无菌技术的操作

三、学用具

多媒体、板书

四、教学过程

引入新课

在传统发酵技术的应用中，都利用了微生物的发酵作用，其中的微生物来自于制作过程中的自然感染。而在工业化生产中，为了提高发酵的质量，需要获得优良菌种，并保持发酵菌种的纯度。这就要涉及到微生物的培养、分离、鉴别等基本技术。现在我们开始学习微生物的培养和应用专题。

课题背景:到目前为止，几十项Nobel生理学和医学奖，化学奖都与微生物学有关。

微生物基础知识：微生物的分类见课件。

进行新课

1．微生物基础知识

微生物包括五类：病毒、细菌、放线菌、真菌、原生动物

1

高中生物选修一

特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞

实验——制备牛肉膏蛋白胨固体培养基、纯化大肠杆菌

1． 在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入10%酚可以抑制细菌和霉菌。利用上述选择培养基依次能从混杂的微生物群体中分离出( )

A．乳酸菌、金黄色葡萄球菌、放线菌 B．固氮细菌、大肠杆菌、放线菌 C．固氮细菌、霉菌、放线菌

D．固氮细菌、金黄色葡萄球菌、放线菌 2． 下列关于配制培养基的叙述，正确的是( ) A．制作固体培养基必须加入琼脂 B．加入青霉素可得到放线菌 C．培养自生固氮菌时不需要氮源 D．发酵工程一般用半固体培养基

3． 下列物质中，不能用作酵母菌碳源的是（ ） A．含碳有机物 B．蛋白胨

C．含碳无机物 D．石油、花生粉饼等天然物质

4． 利用稀释涂布平板法纯化的大肠杆菌，经培养后发现培养基上出现了多种菌落，不可能的原因是（ ）

A．培养基制备过程中被杂菌污染 B．接种过程中，无菌操作不符合要求 C．系列稀释时，无菌操作不符合要求 D．由大肠杆菌的种类不同造成的

5． 大肠杆菌能够在哪种培养基上生长繁殖（ ） A．无氮培养基

B．分解尿素的细菌的选择培养基 C．纤维素分解