PCR实验室技术培训总结

PCR 培训教材

PCR基础理论

一、半保留复制及转录、逆转录

(1)DNA的半保留复制(semiconservative replication)

DNA是所有原核生物和真核生物遗传的主要物质基础。在这些生物中遗传信息以遗传密码的形式编码在DNA分子上，表现为特定的核苷酸排列顺序,并通过DNA复制(replication)由亲代传给子代。在DNA合成进行时，以两条亲代DNA链中的每一条链为模板，在DNA指导下的DNA聚合酶催化下，按A与T、G与C碱基配对原则合成子代DNA的过程称DNA的复制。由于复制合成的子代DNA两条脱氧核糖核苷酸链中有一条来自亲代DNA，另一条是以前者为模板新合成的子代DNA链，所以DNA的这种合成作用又称半保留复制(图1)。

(2)RNA的转录（transcription）过程

以DNA为模板合成RNA的过程称为转录（transcription）。转录是生物界RNA合成的主要方式，是遗传信息由DNA向RNA传递过程，也是基因表达的开始。转录也是一种酶促的核苷酸聚合过程，所需的酶叫做依赖DNA的RNA聚合酶（DNA-dependent RNA polynerase ,DDRP）。转录产生初级转录物为RNA前体（RNA

PCR实验室作业指导书

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2012年 日

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目 录

序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 主 题 内 容 PCR实验室的设置及管理 PCR实验室工作制度 实验室内务管理及清洁制度 PCR实验室人员的配置及管理 实验人员的培训程序 PCR实验室清洁程序 样品编号的标准操作程序 PCR基因扩增实验室的要求 PCR废弃物的处理程序 试剂准备区工作制度、标准操作、程序文件 标本制备区工作制度、标准操作、程序文件 扩增区工作制度、标准操作、程序文件 产物分析区工作制度、标准操作、程序文件 PCR标本的保存操作程序 PCR标本的采集、运送、接收程序 PCR生物安全防护措施 PCR实验室化学试剂配 PCR实验室记录管理制度 PCR应急处理程序 PCR试剂的质检标准操作程序 PCR消耗品进购质检贮存程序 PCR室内质量控制操作程序 PCR室间质量控制操作程序 PCR温度校准标准操作程序 代 号 页 号

内蒙古第四医院 检验科 前 言

前言 编号：CG-JY-QY 日期：2009年7月1日 版本：2009-1 共1页 我院是一所综合性三级医院。近年来，随着临床医学的不断进步，检验医学也得到了迅猛的发展。检验科为了更好的满足临床诊断的需求，根据卫生部临检中心制定的《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》（卫医发[2002]10号）、《临床基因扩增检验实验室工作规范》（卫检字2002第8号）文件，设立了临床基因扩增检验实验室，并于2009年6月着手编写实验室质量管理程序文件。经过试运行，反复讨论和修改第一版已定稿。从即日起开始实施。

编写人 王宇飞 批准人 张惠彬 生效日期 2009-7-1 1

内蒙古第四医院 检验科

1.质量方针

质量方针、目标 编号：CG-JY-FZ 日期：2009年7月1日 版本：2009-1 共1页 本实验室的质量方针是：准确、及时、可靠。

2.质量目标

全面贯彻质量方针，建立科学、合理的实验室质量管理体系，严格按照程序规定做好检验工作，不段提高自身素质和技术水平，为临床和患者提供准确、可靠的诊断依

关于临床PCR实验室的建设陕西区 技术支持 潘长浩

手机：15991279010 邮箱：15991279010@

本版权归中山大学达安基因股份有限公司所有

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临床基因扩增检验实验室的设计要求依据中华人民共和国卫生部卫医发[2002 ]10 号 《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》 卫生部办公厅关于印发[2010 ]194 号 《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》

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内容提要一、硬件要求： ①分区 ②设备二、软件要求：

①SOP文件 ②实验室工作开展

三、实验室的认证

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临床PCR实验室的分区试剂储存和准备

标本制备区扩增区 产物分析区本版权归中山大学达安基因股份有限公司所有

临床PCR实验室设计的一般原则 各区独立 注意方向 因地制宜 方便工作

“十六字口诀”

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理想的PCR实验室分区设计模式

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PCR实验室各区的设备配置表分区器材选配

PCR① 试剂区

PCR② 制备区

PCR③ 扩增区√★

PCR④ 分析区

PCR仪器 生物安

关于临床PCR实验室的建设陕西区 技术支持 潘长浩

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临床基因扩增检验实验室的设计要求依据中华人民共和国卫生部卫医发[2002 ]10 号 《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》 卫生部办公厅关于印发[2010 ]194 号 《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》

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内容提要一、硬件要求： ①分区 ②设备二、软件要求：

①SOP文件 ②实验室工作开展

三、实验室的认证

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临床PCR实验室的分区试剂储存和准备

标本制备区扩增区 产物分析区本版权归中山大学达安基因股份有限公司所有

临床PCR实验室设计的一般原则 各区独立 注意方向 因地制宜 方便工作

“十六字口诀”

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理想的PCR实验室分区设计模式

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PCR实验室各区的设备配置表分区器材选配

PCR① 试剂区

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荧光定量PCR技术培训-康为20100806

实时荧光定量PCR技术 实时荧光定量PCR技术 PCR 原理、 原理、应用及实践Real time QuantitativePCR) (Real time Quantitative PCR北京康为世纪生物科技有限公司

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我们的目标：中国的 我们的目标：中国的Invitrogen

完善的产品线

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北京康为世纪生物科技有限公司 完善的产品线分子 生物学核酸提取 PCR、RT-PCR 及荧光定量 及荧光定量PCR 、 DNA 分子量标准 克隆与转化 蛋白提取与纯化 蛋白定量、蛋白Marker及蛋白电泳产品 蛋白定量、蛋白 及蛋白电泳产品 Western Blot产品 产品

蛋白质 学相关

免疫学 相关

免疫组化产品、 免疫组化产品、免疫沉淀 标签抗体 内参抗体 二抗3

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五大平台 一站式服务

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泰州国家生物产业基地临床诊断试剂研发 与生产公共服务平台园区公共服 务平台

2010年康为世纪公司依托江苏 年康为世纪公

一、PCR实验室基本配置

1．主体结构：

主体为彩钢板、铝合金型材。室内所有阴角、阳角均采用铝合金50内圆角铝，从而解决容易污染、积尘、不易清扫等问题。结构牢固，线条简明，美观大方，密封性好。

2．标准的三区分隔和气压调节：

将PCR过程分成试剂准备、标本制备和PCR扩增检测三个独立的实验区。整个区域有一个整体缓冲走廊。每个独立实验区设置有缓冲区，同时各区通过气压调节，使整个PCR实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染并降低扩增产物对人员和环境的污染。

可打开缓冲区Ⅰ，缓冲区Ⅱ和PCR 扩增区的排风扇往外排气，在实验区的外墙上和各扇门上都安装有风量可调的回风口，空气通过回风口向室内换气。

3．机械连锁不锈钢传递窗：

试剂和标本通过机械连锁不锈钢（不建议使用电子连锁方式）传递窗传递，保证试剂和标本在传递过程中不受污染（人物分流）。

4．消毒：

在三个实验区和三个缓冲区顶部以及传送窗内部安装有紫外灯，供消毒用。

在试剂准备区和标本制备区还设置移动紫外线灯，对实验桌进行局部消毒。

5．照明

灯具要选用净化灯具，能达到便于清洗、不积尘的特点。

标准的PCR实验室建设的过程中应注意：

①严格按照规范科学设计的安装流程。

②规范的安装流程和全面的服务流程。

③安装前需要确定以下安装条件，

一、PCR实验室基本配置

1．主体结构：

主体为彩钢板、铝合金型材。室内所有阴角、阳角均采用铝合金50内圆角铝，从而解决容易污染、积尘、不易清扫等问题。结构牢固，线条简明，美观大方，密封性好。

2．标准的三区分隔和气压调节：

将PCR过程分成试剂准备、标本制备和PCR扩增检测三个独立的实验区。整个区域有一个整体缓冲走廊。每个独立实验区设置有缓冲区，同时各区通过气压调节，使整个PCR实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染并降低扩增产物对人员和环境的污染。

可打开缓冲区Ⅰ，缓冲区Ⅱ和PCR 扩增区的排风扇往外排气，在实验区的外墙上和各扇门上都安装有风量可调的回风口，空气通过回风口向室内换气。

3．机械连锁不锈钢传递窗：

试剂和标本通过机械连锁不锈钢（不建议使用电子连锁方式）传递窗传递，保证试剂和标本在传递过程中不受污染（人物分流）。

4．消毒：

在三个实验区和三个缓冲区顶部以及传送窗内部安装有紫外灯，供消毒用。

在试剂准备区和标本制备区还设置移动紫外线灯，对实验桌进行局部消毒。

5．照明

灯具要选用净化灯具，能达到便于清洗、不积尘的特点。

标准的PCR实验室建设的过程中应注意：

①严格按照规范科学设计的安装流程。

②规范的安装流程和全面的服务流程。

③安装前需要确定以下安装条件，

通用技术实验室—制作室 制作室标准配置方案 (56座) 1、基本设施 序号 设备名称 品牌：北京威成亚 规格：2400×600×850mm 1 教师演示桌 台面：采用40mm厚俄罗斯进口樟子松实木板精致加工，桌面铺设透明水晶胶 桌身：选用铝木结构，侧板配16mm厚优质三聚氰胺脂板，电源插座到位，内带抽屉和对开门柜子；可预留多媒体设备（显示器，主机，多媒体设备）的位置。 视频展台：巨龙 投影机：日本 NEC 2 多媒体设备 投影幕：红叶电动幕布（120英寸） 中央控制系统：巨龙 电脑： 2G/250G/DVD/集成显卡（可选配） 品牌：北京威成亚 3 学生操作台 规格：2400×1200×780mm，双面8人用，台面：采用40mm厚俄罗斯进口樟子松实木板精致加工，桌面铺设透明水晶胶，加防护网,具有独立工具柜；桌身采用60×40mm方钢烤漆骨架，带抽屉和底柜。 品牌：北京威成亚 4 机床操作台 规格：1200×600×780mm，台面：采用40mm厚俄罗斯进口樟子松实木板精致加工，桌面铺设透明水晶胶，木板精致加工，具有独立工具柜；桌身采用60×40mm方钢烤漆骨架，配16mm厚优质三聚氰胺饰面板。 5 6 学生凳 工具柜 品牌：北京

生物实验室安全培训试题

选择题

1、乙型肝炎病毒，按危害程度分类，属于第几类病原微生物？( ) A、第一类 B、第二类 C、第三类 D、第四类

2、结核分枝杆菌，按危害程度分类，属于第几类病原微生物？ ( ) A、第一类 B、第二类 C、第三类 D、第四类 3、 根据所操作的生物因子的危害程度和采取的防护措施，将生物安全的防护水平分为四级，哪一级的防护水平最低？ ( )

A、I 级 B、II级 C、III级 D、IV级

4、下列不属于实验室一级防护屏障的是: ( ) A、生物安全柜 B 、防护服 C、口罩 D、缓冲间 5、下列哪项措施不是减少气溶胶产生的有效方法： （ ）

A、规范操作 B、戴眼罩 C、加强人员培训 D、改进操作技术 6、二级生物安全实验室必须配备的设备是 ( )

A、生物安全柜、培养箱 B、生物安全柜和水浴箱 C、生物安全柜和高压灭菌器 D、离心机和高压灭菌器

7、PCR实验室要求严格分区，一般分为以下四区 （ ） A、主实验区、样本置备区、产物扩