土壤微生物分离实验注意事项

钼矿周围土壤中微生物的分离与鉴定

步骤一 钼矿周围土壤的采集与处理

一、采集地点：河南省、洛阳市、栾川县钼矿区土壤。

二、实验器材：无菌牛皮纸袋，无菌铲，长线，标杆，标签，尺子，冰箱。 三、样本采集及处理方法: 1.取样：2012 年3月于洛阳市栾川县钼矿区土地选择2 个不同的地点进行采样，

分别在4个方向选取3点，每个地点在不同位置各取3 个样，直取5~20cm深度的土壤，每点按1m×1m取样，每点取样量一致，将样点土壤混均后取200 g装入无菌牛皮纸袋中封好，带回实验室放入灭菌的袋中或放在4℃冰箱中暂存备用。 采样注意事项：

(1)样品标记：采集的样品放入统一的灭过菌的牛皮纸袋样中，用铅笔填写好标签，袋内外各具一张。

(2)一个混合土样以取土1公斤左右为宜，如果样品数量太多，可用四分法将多余的土壤弃去（方法是将采集的土壤样品放在洁净的塑料布上，弄碎、混匀，铺成四方形，划对角线将土样分成四份，把对角的两份分别合并成一份，保留一份，弃去一份，果所的样品依然很多，可用四分法处理，直至所需数量为止）。

(3)采样深度，对一般土地采样深度5—30cm即可，采样时深度要垂直，上下取土量要一致，每个采样点的取土深度及采样量应均匀一致，土壤上层与下层的

钼矿周围土壤中微生物的分离与鉴定

步骤一 钼矿周围土壤的采集与处理

一、采集地点：河南省、洛阳市、栾川县钼矿区土壤。

二、实验器材：无菌牛皮纸袋，无菌铲，长线，标杆，标签，尺子，冰箱。 三、样本采集及处理方法: 1.取样：2012 年3月于洛阳市栾川县钼矿区土地选择2 个不同的地点进行采样，

分别在4个方向选取3点，每个地点在不同位置各取3 个样，直取5~20cm深度的土壤，每点按1m×1m取样，每点取样量一致，将样点土壤混均后取200 g装入无菌牛皮纸袋中封好，带回实验室放入灭菌的袋中或放在4℃冰箱中暂存备用。 采样注意事项：

(1)样品标记：采集的样品放入统一的灭过菌的牛皮纸袋样中，用铅笔填写好标签，袋内外各具一张。

(2)一个混合土样以取土1公斤左右为宜，如果样品数量太多，可用四分法将多余的土壤弃去（方法是将采集的土壤样品放在洁净的塑料布上，弄碎、混匀，铺成四方形，划对角线将土样分成四份，把对角的两份分别合并成一份，保留一份，弃去一份，果所的样品依然很多，可用四分法处理，直至所需数量为止）。

(3)采样深度，对一般土地采样深度5—30cm即可，采样时深度要垂直，上下取土量要一致，每个采样点的取土深度及采样量应均匀一致，土壤上层与下层的

钼矿周围土壤中微生物的分离与鉴定

步骤一 钼矿周围土壤的采集与处理

一、采集地点：河南省、洛阳市、栾川县钼矿区土壤。

二、实验器材：无菌牛皮纸袋，无菌铲，长线，标杆，标签，尺子，冰箱。 三、样本采集及处理方法: 1.取样：2012 年3月于洛阳市栾川县钼矿区土地选择2 个不同的地点进行采样，

分别在4个方向选取3点，每个地点在不同位置各取3 个样，直取5~20cm深度的土壤，每点按1m×1m取样，每点取样量一致，将样点土壤混均后取200 g装入无菌牛皮纸袋中封好，带回实验室放入灭菌的袋中或放在4℃冰箱中暂存备用。 采样注意事项：

(1)样品标记：采集的样品放入统一的灭过菌的牛皮纸袋样中，用铅笔填写好标签，袋内外各具一张。

(2)一个混合土样以取土1公斤左右为宜，如果样品数量太多，可用四分法将多余的土壤弃去（方法是将采集的土壤样品放在洁净的塑料布上，弄碎、混匀，铺成四方形，划对角线将土样分成四份，把对角的两份分别合并成一份，保留一份，弃去一份，果所的样品依然很多，可用四分法处理，直至所需数量为止）。

(3)采样深度，对一般土地采样深度5—30cm即可，采样时深度要垂直，上下取土量要一致，每个采样点的取土深度及采样量应均匀一致，土壤上层与下层的

微生物实验报告

——土壤微生物的分离筛选纯化与鉴定

山东大学生命科学学院2011级生物基地

（周一下午*组）

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同组者： 指导老师：

时间：2012年12月9日——2012年12月21日

1

摘要

利用分离纯化微生物的基本操作技术对土壤中的微生物进行分离与纯化，通过对菌落形态的观察、染色鉴定以及一系列的生理生化试验的结果，通过查阅《伯杰氏系统细菌学手册》对照种属特征最终判断所分离纯化的细菌所属的属。 关键词

土壤微生物，分离鉴定，生理生化，酶活测定，《伯杰氏系统细菌学手册》 前言

土壤是微生物的良好生境，土壤中有多种类群的微生物，它们对自然界物质的转化和循环起着极为重要的作用，对农业生产和环境保护有着不可忽视的影响。土壤中微生物的数量因土壤类型、季节、土层深度与层次等不同而异。一般地说，在土壤表面，由于日光照射及干燥等因素的影响，微生物不易生存，离地表10 cm～30 cm的土层中菌数最多，随土层加深，菌数减少。

通过土壤微生物的分离纯化，得到纯种，再进行相关的实验，如：菌落观察、革兰氏染色、芽孢染色、生理生化试验等，根据实验结果，查阅《伯杰氏系统细菌学手

土壤微生物分离纯化及测数

作者：土壤微生物|分离纯化及测数 来源：生物秀 时间：2008-5-28

一、实验目的要求

1 了解土壤微生物的分离纯化及测数的基本原理。 2 学习并掌握微生物分离纯化技术方法。 3 学习并掌握微生物平板菌落计数的技术方法。 二、基本原理

土壤是微生物生活的大本营，其中含有大量不同类型的微生物，可按照一定的方法将各类微生物通过分离进行纯培养，并能对特定类群进行数量测定。基本原理是通过稀释使菌体细胞充分分散，单细胞得以生长发育形成菌落，可使用稀释法或平板划线法进一步纯化，还可通过平板菌落计数，推算单位重量土壤样品含有微生物的数量。 三、实验步骤 （一）土壤样品采集

在待测田块上，若田块面积小于50平方米则按对角线三点采样，若田块面积大于50平方米按对角线五点采样。采样一般定点于耕作层0--20cm，先除去表土1--2cm，以无菌铲采土足量充分混匀后用无菌塑料袋分装。 （二）好气性细菌的分离纯化及测数 1.制备土样稀释液 吹吸三次混匀 无菌操作

另留一管不稀释留作对照（CK）

2.培养基的准备

融化牛肉膏蛋白胨培养基，融化后保温在48℃。并取6个无菌培养皿，分别在皿底贴好标签，注明10-5、10-6、CK（每个稀释

土壤微生物测定

土壤微生物活性表示土壤中整个微生物群落或其中的一些特殊种群状态，可以反映自然或农田生态系统的微小变化。土壤微生物活性的表征量有:微生物量、C/N、土壤呼吸强度和纤维呼吸强度、微生物区系、磷酸酶活性、酶活性等。

测定指标：

1、土壤微生物量 (Mierobia lBiomass，MB)

能代表参与调控土壤能量和养分循环以及有机物质转化相对应微生物的数量，一般指土壤中体积小于5Χ103um3的生物总量。它与土壤有机质含量密切相关。

目前，熏蒸法是使用最广泛的一种测定土壤微生物量的方法阎，它是将待测土壤经药剂熏蒸后，土壤中微生物被杀死，被杀死的微生物体被新加人原土样的微生物分解(矿化)而放出CO2，根据释放出的CO2:的量和微生物体矿化率常数Kc可计算出该土样微生物中的碳量。因此碳量的大小就反映了微生物量的大小。

此外，还有平板计(通过显微镜直接计数)、成份分析法、底物诱导呼吸法、熏蒸培养法(测定油污染土壤中的微生物量—碳。受土壤水分状况影响较大，不适用强酸性土壤及刚施用过大量有机肥的土壤等)、熏蒸提取法等，均可用来测定土壤微生物量。

熏蒸提取-容量分析法 操作步骤： （1）土壤前处理和熏蒸 （2）提取

将熏蒸土壤无损地转移到20

土壤微生物的分离与鉴定

组员：阚能涛，户红通，郭晓辉，耿静，孔桂慧，兰欣玉 关键词：土壤微生物，分离鉴定，生理生化， 实验摘要：

土壤是微生物的良好生境，土壤中有多种类群的微生物，它们对自然界物质的转化和循环起着极为重要的作用，对农业生产和环境保护有着不可忽视的影响。根际微生物与植物的关系特别密切，不同的土壤和植物对根际微生物产生显著影响，而不同的根际微生物由于其生理活性和代谢产物的不同，也将对土壤肥力和植物营养产生积极或消极的作用。土壤微生物不仅对土壤的肥力和土壤营养元素的转化起着重要作用，而且对于进入土壤中的农药及其他有机污染物的自净、有毒金属及其化合物在土壤环境中的迁移转化等都起着极为重要的作用。

土壤中微生物的数量因土壤类型、季节、土层深度与层次等不同而异。一般地说，在土壤表面，由于日光照射及干燥等因素的影响，微生物不易生存，离地表10 cm～30 cm的土层中菌数最多，随土层加深，菌数减少。

土壤中微生物以细菌数量最多，为几百万个/克土至几亿个/克土，有各种生理类群，营养类型多属异养型，鉴别染色多为革兰氏阳性。放线菌含量为几万个/克土至几百万个/克土，但其生物量不比细菌低，因为菌丝体积较大。土壤中真菌含量为几千个/克土至几十万个/克

土壤微生物研究规范——II. 土壤样品的运输和贮存

1. 土壤微生物样品的运输

土样从采集点到实验室往往需要经历一定时间的运输，土样运输过程中难免影响土壤的温度、水分、氧气等环境条件，所以要尽快置于黑暗、低温（4℃）的密闭环境，尽量维持土壤含水量稳定不变，黑暗环境是为了避免光照下藻类在土壤表明的生长，低温是为了减少细菌繁殖，维持微生物区系稳定。一般装于聚乙烯袋子，并松扎。另外，储存时尽可能避免物理压实，样品袋不要堆叠过多，以免破坏土壤原有的团粒结构，并导致底层样品处于厌氧环境。

微生物取样的土壤样品需要在0-4℃的条件下保存，所以土壤样品应及时保存在保温箱或冰箱中（设置0-4℃），并最好在一周内完成前期处理。

如果采集地有冰箱、熏蒸所需的真空干燥器和通风橱等设施，建议将微生物土壤样品熏蒸浸提后，以冷冻的浸提液保存在塑料小瓶中，以方便运送。

如果采集地没有通风橱等设施，建议将所取的土壤样品过筛后冷藏在保温箱中，以方便运送。具体的流程如下：

（1）提前准备好保温箱及冷冻好的冰板。冰板需要提前1-2 d冷冻，可以再用自封袋装一定量水分放平冷冻为规则的冰块备用。

（2）按照微生物取样规范进行取样，及时过筛去除根系、土壤动物等杂质，放置在0-4℃保鲜冰

哈尔滨师范大学

学 年 论 文

题 目 植物与微生物关系研究进展 学 生 李春葳 指导教师 王全伟 副教授 年 级 2009级 专 业 生物科学 系 别 生物科学系

学 院 生命科学与技术学院

哈尔滨师范大学 2012年5月

论 文 提 要

植物与其生长环境中的微生物关系密切，两者形成了植物—微生物共生体系统。植物影响着其周围及体内的微生物的群落结构，这些微生物又通过其生命活动影响植物的生长发育。了解与认识植物与微生物的相互作用对于农业生产具有重要意义。本文就植物类型及植物根系分泌物对微生物群落结构及多样性的影响,植物根际微生物、叶围微生物和内生菌(包括内生真菌、内生细菌以及内生放线菌)对植物生长发育的影响等进行综述，并就其将来的研究方向做了展望。

植物与微生物关系研究进展

李春葳

摘 要: 植物与其生长环境中的微生物关系密切,两者形成了植物—微生物共生体系

统。植物影响着其周围及体内的微生物的群落结构,这些微生物又通过其生命活动影响植物的生长发育。了解与认识植物与微生物的相互作用对于农业生产具有重要意义。本文就植物类型及植物根系分泌物对微生物

土壤微生物及微生物量研究综述

陈建国 20092133 水保09级

一、研究背景

土壤微生物是生态系统的重要组成部分。土壤微生物一方面对土壤有机物质起分解作用，使有机物质转化成有效养分，另一方面，对土壤中的无机营养元素起固持和保蓄作用

[1-4]

[1]

。

土壤微生物在土壤养分转化与循环、维护生态平衡和保护环境等方面具有非常重要的意义。

土壤微生物与植物在根际微环境中进行着复杂频繁的互作。土壤有益微生物通过其代谢活动提高土壤中植物营养元素的有效性，改变了植物根系生理状态，最终促进了植物的定植、生长和发育；植物通过其根际分泌物影响着土壤微生物的群落结构和代谢活性。土壤微生物与植物相互作用不是完全独立的，还受到土壤、温度、水分等多种环境因素影响，进一步研究植物、土壤微生物与环境关系，特别是研究植物一土壤一微生物所构成的系统可为今后进行绿色农业、林业保护和环境保护等提供更有价值的信息

[17]

。

森林土壤微生物是森林生态系统的重要组成部分之一，在林地枯枝落叶分解、腐殖质合成、土壤养分循环和能量转化中起着重要作用，其数量不仅直接影响土壤的生物化学过程和土壤养分的组成与转化，也是土壤中生物活性的具体体现，是维持和恢复林地生产力的主要因素。森