饲料中沙门氏菌的检测方法

沙门氏菌的检测及鉴定

杨淑霞

设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 2.1 冰箱：2 ℃~5 ℃。 2.2 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃,42 ℃±1 ℃。 2.3 均质器。 2.4 振荡器。 2.5 电子天平：感量0.1 g。 2.6 无菌锥形瓶:容量500 mL,250 mL。 2.7 无菌吸管：1 mL(具0.01 mL刻度)、10 mL(具0.1 mL刻度)或 微量移液器及吸头。 2.8 无菌培养皿：直径90 mm。 2.9 无菌试管：3 mm×50 mm、10 mm×75 mm。 2.10 无菌毛细管。 2.11 pH计或pH比色管或精密pH试纸。 2.12 全自动微生物生化鉴定系统。

3 培养基和试剂 3.1 缓冲蛋白胨水(BPW)。 3.2 四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液。 3.3 亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液。 3.4 亚硫酸铋(BS)琼脂。 3.5 HE琼脂：见附录A中A.5。 3.6 木糖赖氨酸脱氧胆盐(XLD)琼脂。 3.7 沙门氏菌属显

沙门氏菌检验中血清学试验常见问题

发布日期：2012-09-24 来源：北京陆桥技术有限责任公司 浏览次数：135

核心提示： 沙门氏菌检验中血清学试验常见问题

血清学鉴定是沙门氏菌检验中的重要鉴定方法，包括菌体抗原（O）鉴定、鞭毛抗原（H）鉴定和Vi抗原鉴定。由于血清学试验涉及的内容很多，所以我们在此给大家列出几个常见问题，以供大家在日常工作中参考。

1、沙门氏菌判定时以生化试验结果为主还是血清学试验结果为主？

我们在判定时应该以生化试验结果为主，在生化试验的基础上进行血清学判定。有的试验人员会直接用多价血清进行试验，不进行生化试验，这是绝对不可取的。因为血清学的原理是抗原抗体结合，非沙门氏菌的微生物也有可能带有沙门的类似抗原的。所以我们做鉴定的时候，必须先进行生化试验，在生化试验的基础上进行血清学鉴定。

2、血清学试验要做到什么程度？

如果我们只需要鉴定某个菌株是否属于沙门氏菌，那只需要做O多价和H多价血清就可以了。如果需要鉴定某个菌株具体是什么沙门氏菌，比如是否为鼠伤寒沙门氏菌或是否为肠炎沙门氏菌，那就需要进行血清学分型试验，从多价血清一直做到O抗原和H抗原的单因子，然后参照GB 4789.4-2010沙门氏菌检验标

沙门氏菌检测（FDA与ISO对比）

沙门氏菌属简介

1880年E. Berth首先发现伤寒沙门氏菌，1885年Salmon与Smith又分离出猪霍乱沙门氏菌，以后取Salmon氏之名为本菌属之名。

沙门氏菌属是一群符合肠杆菌科定义并与其血清学相关的革兰氏阴性、需氧性、无芽孢杆菌。本菌属种类繁多，抗原结构复杂，现已发现2000多个血清型，我国已发现血清型近200个。

沙门氏菌属——生物学特性

形态特征：

革兰氏阴性，大小为1~3×0.4~0.9μm的两端钝圆的短杆菌，无芽孢，一般无荚膜，除鸡沙门氏菌和雏沙门氏菌以外，都有周身鞭毛，运动力强。

培养特性：

沙门氏菌需氧或兼性厌氧，10-42 ℃都可生长，最适生长温度为37℃，最适pH为6.8~7.8。

营养琼脂平板上：35~37℃培养18~24h，其菌落大小一般为2~3mm，光滑、湿润、无色、半透明、边缘整齐。 血平板上：中等大小的灰白色菌落。

沙门氏菌属的抗原

菌体抗原（O抗原）

表面抗原（K抗原）：Vi抗原和M抗原 鞭毛抗原（H抗原） 纤毛抗原

FDA BAM沙门氏菌检验流程

1、 前增菌：25g样+225mL乳糖肉汤 （肉制品、肉副产品、动物产品），匀质2min，室

大肠杆菌病与沙门氏杆菌病，如何鉴别？

大肠杆菌病与沙门氏杆菌病，是临床上常见的两个以肠道病变及败血症为特征的疾病。分别是由大肠杆菌和沙门氏杆菌为其特定病原体，其典型病例特征很好鉴别。但是随着疾病向着非典型化的发展和混合感染的发生，非介助实验室内的病原体分离，病原体生化特性分析及药敏试验等特殊手段很难做出判断。在缺乏这种特殊诊断手法的前提下，如何尽快的做出尽可能接近事物本质的鉴定，并做出相应的防治策略，是我们需要解决的一个话题。本文作者试图结合临床上所见到的病例特证，结合中医的认识观，提出对这两种病的签别原则和方法，以求对临床实践有所帮助。

其实，这两种病恰好是内伤性疾病的一对矛盾的对立统一体，即一个事物的正反两个方面。脾胃为后天之本，二者共处中焦，组成机体气机计降之枢纽，阳明胃士为阳为火，主天之气以降；太阴脾土为阴为湿，主地之气以升，二者共同完成水谷精微的腐熟运化。组成机体阴阳的一个基本配对。因而有人说脾胃为体内的太极两仪，不无道理。当脾气旺而胃气受损，下降无权而引起湿热内蕴之时，则多为大肠杆菌病；反之，当脾气受损，升清受阻而胃气受损时，则多发生沙门氏杆菌病。简言之，两种病虽然都有可能首发于中焦而引起水湿内瘀，大肠杆菌病的特性是热大

标准操作规程 SOP 88888888888

题目：沙门氏菌检验标准操作规程 Title: 编码Code：888888888888 版次Version No.:A.0 Page 1 of 3 1 目的PURPOSE

规范888物料、产品的沙门氏菌检验操作，确保检验结果的可靠性。

2 范围SCOPE

适用于888物料、产品的沙门氏菌检验工作。

3 责任RESPONSIBILITY

微生物检验员严格执行本规程，品质部负责人监督执行。

4 程序PROCEDURE

4.1定义和原理

沙门氏菌广泛存在于动物的肠道和内脏，以及被粪便污染的水和土壤中，是细菌性食物中毒的主要病因。本方法利用沙门氏菌呈辛酸酯酶阳性，而氧化酶和脂肪酶均呈阴性的特性，对物料、产品进行沙门氏菌检验。 4.2材料和设备

4.2.1紫外灯：波长366nm，功率不小于6W。 4.2.2放大镜：3至4倍。 4.2.3毛细滴管。

4.2.4LX-B35L压力蒸汽灭菌锅。 4.2.5无菌的培养皿。 4.2.6无菌的接种环。 4.3培养基和试剂

4.3.1SCDLP液体培养基：按《化妆品卫生规范》（2007版）或使用商品培养基干粉配制。

4.3.2四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液：按GB4789

鼠伤寒沙门氏菌试验

文献综述：

鼠伤寒沙门氏菌试验（Ames试验）

转载请注明出处：altinawu

摘要：食品安全无论如何怎样强调都不会过分，迅速而准确地检测致癌物质是食品安全问题

的重要方面。美国科学家Dr. Bruce Ames及其同事创立了一种方法，叫鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验（Ames试验），它是利用一组组氨酸营养缺陷型菌株加入待测物在有或没有微粒体活化系统条件下，发生回复突变的特征鉴定化学物质的诱变活性，现已成为初步筛选化学物潜在致突变的首选方法。 关键词：鼠伤寒沙门氏菌试验；基本原理；一般步骤

1 前言

污染物对人体的潜在危害，引起人们的普遍关注。世界上已发展了百余种短期快速测试法，检测污染物的遗传毒性效应。美国科学家Dr. Bruce Ames等经十余年努力，于1975年建立并不断发展完善的沙门氏菌回复突变试验（亦称Ames试验）已被世界各国广为采用。该法比较快速、简便、敏感、经济，且适用于测试混合物，反映多种污染物的综合效应。

众多学者有的用Ames试验检测食品添加剂、化妆品等的致突变性，由此推测其致癌性；有的用Ames试验检测水源水和饮用水的致突变性（比如，美国派斯净水器就通过了Ames试验），探索较现行方法更加

2006年9月,我校动物医院接诊一蛋鸡病例,经临床症状、剖检变化和实验室检验,综合诊断为蛋鸡新城疫与沙门氏菌病混合感染。现将发病情况报告如下：

维普资讯

禽业辱航

器新赫.

混合感染的防治张娜，祥法魏

f.东农业大学动物医学院。东泰安 2 11; .东省农业科学院家禽研究所，东济南 20 0 1山山 7 08 2山山 50 0)

20年 9 . 06月我校动物医院接诊一蛋鸡病例， 经临床症状、剖检变化和实验室检验，综合诊断为蛋鸡新城疫与沙门氏菌病混合感染。将发病情况现报告如下：1发病情况 20 0 6年 9月下旬，泰安地区一养殖户饲养罗曼蛋鸡 3 0 0 0只，4 1 6日龄，发病前， 产蛋率低且增蛋速度慢。发病后，食量采

无菌条件下，钓取分离的单菌落接种于微量生化反应管中，利用微量生化反应管 (白杭州天河购微生物试剂有限公司，号 200 0 )批 06 82对细菌进行生化鉴定，果如下：结细菌生化鉴定实验表

和产蛋量均降低，饮水量增加，明显但有呼吸道症状，便稀薄。至接诊时已死粪截亡 8只。曾用盐酸环丙沙星、霉素等抗土生素进行治疗 .疗效不佳，于发病的第四天来我院就诊。 2临床症状蛋鸡精神沉郁、羽毛逆立、两翅下垂，有明显的 呼吸道症状。鸡贫血，病少食或不

沙门氏菌调查

海峡预防医学杂志2000年第6卷第2期　　StraitJournalofPreventiveMedicine2000Vol.6No.2

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心报告至1987年底已发现2213个血清型[5],由于沙门氏菌是广泛分布于自然界的病原菌,世界各国对此均较重视,因此新的菌型不断被发现,目前国际沙门氏菌中心已报告沙门氏菌有2500个以上血清型[6]。我国解放前仅检出28个血清型,解放后至1975年已检出60个血清型,1975～1979年全国20个省、市、自治区卫生防疫站和6个商品检验局,检出沙门氏菌26个菌群162个血清型(变种)[7],1991年底,全国已发现沙门氏菌37个群(亚群)255个血清型或变异型[8]。福建省1975～1979年,检出沙门氏菌27个型,1980～1986年又首次检出4个型,达31个血清型。1987年以来,由于对沙门氏菌认识水平提高,检验技术的改善[1],从而使沙门氏菌检出率大为提高。1987～1993年发现省

分为A～F群和非A～F群。80年代以前,人们大多把注意力集中于DNA同源群Ⅰ和A～F群菌,80年代以来,随着人们认识水平及技术水平提高,DNA同源群Ⅰ以外及非A～F群沙门氏菌检出率呈上升趋势。本文首次检出沙门氏菌

饲料中钙的测定方法

饲料中钙含量的测定———乙二胺四乙酸二钠络合滴定法 1 范围

本方法规定了用乙二胺四乙酸二钠络合滴定法测定饲料中钙含量。

本方法适用于饲料原料和饲料产品。本方法钙的最低检测限为150mg/kg(取试样1g 时)。 2 引用标准

GB/T 6682-1992 分析实验室用水规格和实验方法

GB/T 601-1988 化学试剂滴定分析(容量分析)用标准溶液的制备 3 原理

将试样中有机物破杯，钙变成溶于水的离子，用三乙醇胺、乙二胺、盐酸羟胺和淀粉溶液消除干扰离子的影响，在碱性溶液中以钙黄绿素为指示剂，用乙二胺四乙酸二钠标准溶液络合滴定钙，可快速测定钙的含量。 4 试剂

实验用水应符合GB/6682 中三级用水规格，使用试剂除特殊规定外均为分析纯。 4.1 盐酸羟胺。 4.2 三乙醇胺。 4.3 乙二胺。

4.4 盐酸水溶液，1+3。

4.5 氢氧化钾溶液(200g/L)，称取20g 氢氧化钾溶于100mL 水中。

4.6 淀粉溶液(10g/L)，称取1g 可溶性淀粉入200mL 烧杯中，加5mL 水润湿，加95mL 沸水搅拌，煮沸，冷却备用(现用现配)。 4.

发酵饲料中乳酸含量的测定方法

微生物发酵饲料的生产菌种主要有乳酸菌、酵母菌和芽孢菌，其中乳酸菌包括发酵乳杆菌、嗜酸乳杆菌和粪肠球菌3种。乳酸菌是发酵的主角，其在厌氧条件下大量繁殖占支配地位时产生大量的乳酸，抑制其他不良微生物的生长繁殖，从而制成了优质的微生物发酵饲料。豆粕中加入乳酸菌后，产品不仅小肽含量高，而且具有乳香味，诱食性极佳。因此，发酵饲料中乳酸含量的高低是判断微生物发酵饲料品质优劣的一个重要指标。

1 原理

乳酸在铜离子的催化下，与浓硫酸作用生成乙醛，乙醛能与对羟基联苯作用生成在565nm 处有特征吸收的紫色物质。在一定浓度范围内，乳酸含量与565nm 处吸光度呈线性关系，因此可以通过测定565nm 处的吸光度来测定乳酸的含量。

2 材料、试剂与仪器

无水乳酸锂、对羟基联苯、钨酸钠、硫酸铜、氢氧化钙、浓硫酸均为分析纯试剂。 钨酸溶液：0.667mol/L硫酸及10%(W/V)钨酸钠溶液等体积混合，使用前配制；20%(W/V)硫酸铜溶液：称取硫酸铜20g，加蒸馏水定容至100ml；对羟基联苯溶液：称取对羟基联苯1.5 g溶于100ml 的0.125mol/L氢氧化钠溶液中( 配制时加热助溶，溶解后为澄清液体)，贮存于棕色瓶中，保存于4