酶免疫技术和酶联免疫吸附试验

非标记抗体酶法

由于酶标抗体存在一些缺点，例如①酶与抗体间的共价连结可损害部分抗体和酶的活性；②抗血清中的非特异性抗体被酶标记后，与组织成分结合，可致背景染色等。为此Sternberger等在酶标法的基础上，发展了非标记抗体酶法。包括酶桥法（Enzyme Bridge Method）和过氧化物酶抗过氧化物酶法（Peroxidase Antiperoxidase Method, PAP法）。现分述如下。 （一）酶桥法

1．基本原理 首先用酶免疫动物，制备效价高、特异性强的抗酶抗体，然后使用第二抗体作桥，将抗酶抗体连结在与组织抗原结合的第一抗体上，再将酶结合在抗酶抗体，经呈色显示抗原的分布。在此过程中，任何抗体均未被酶标记，酶是通过免疫学原理与抗酶抗体结合，避免了共价连结对抗体和酶活性的损害，提高方法的敏感性，且能节 省第一抗体的用量。

2．染色步骤 主要程序如图4-4

图4-4 酶桥法主要染色步骤

（1）切片准备及第一抗体孵育前处理同间接法，第一抗体（假设来自种属A）孵育24h（4℃）。第一抗体的稀释度可高些，使抗体的两个Fab段均与组织抗原结合，较牢固，漂洗时不易丢失。

（2）切片与第二抗体（也称桥抗体，抗种属a I

全自动酶联免疫分析仪与手工酶联免疫法的检测结果比较

王胜虎1） 陈琪 1） 李媛 2）

1）昆明医科大学附属延安医院检验科，云南昆明 650051； 2）昆明医科大学海源学院基础部，云南昆明

650500

[摘要] 目的 通过比对全自动酶联免疫分析仪与手工酶联免疫法检测临床标本结果的相关性及符合率，探讨更科学可靠的检验方法。 方法 随机抽取90份临床与体检标本，经Tecan Freedom Evolyzer-2200全自动酶联免疫分析仪和手工加样操作的IMARK2酶标仪测定甲肝、乙肝5项、丙肝、戊肝2项、TP及HIV的结果，并对结果进行相关性及合率的分析 。结果 对所检测项目中的HBsAg、HBsAb、HBeAg、TP、HIV的相关性系数r>0.9 ，其数据显示相关性较好；而HAV-IgM、HBeAb、HBcAb、HCV、HEV-IgM、HEV-IgG、的相关性系数为 0.9>r >0.6 ；Tecan Freedom Evolyzer-2200全自动酶联免疫分析仪与手工酶联免疫法操作比对90个样本的11项检测结果总符合率达96.9％。 结论 全自动酶联免疫分析仪与手工酶联免疫法有较好的相关性。全自动酶联免疫分析仪的使用还大大的

临床免疫学和免疫检验综合试卷3

一、名词解释 （每题3分，共18分）

1．佐剂：

2．单克隆抗体：

3．细胞因子：

4．超敏反应：

5．单克隆免疫球蛋白（M蛋白) ：

6．肿瘤特异性抗原（TSA）：

二、填空题 （每空1分，共22分）

7．抗原抗体反应的特点包括（ ）、（ 第 1 页，共 11 页

）。 ）和（

8．纯化可溶性抗原的方法主要有（ ）、（ ）和（ ）。 9．目前酶免疫技术中最常用的酶是（ ），其作用底物为H2O2，（ ） 作为供氢体，被氧化后由无色变为（ ）色。

10．外周血单个核细胞主要包括（ ）细胞和（ ）细胞。 11．流式细胞仪产生分析的电信号主要是（ ）信号和（ ）信号。 12．Ⅰ型超敏反应主要由（ ）抗体介导，Ⅳ型超敏反应主要由（ ）细 胞介导。

13．补体不参与（ ）和（ ）型超敏反应。

第十一章 抗原提呈细胞与抗原的处理及提呈

一、是非题

1.IL-8是由活化巨噬细胞产生的对巨噬细胞具有趋化和激活作用的细胞因子（ ） 2.巨噬细胞既具有杀菌作用又有抗原加工提呈作用。（ ）

3.NK细胞表面的杀伤细胞抑制受体可识别自身组织细胞表面的MHCⅡ类分子。（ ） 4.B-1B细胞主要分布于淋巴结浅皮质区淋巴滤泡中。 （ ） 5.树突状细胞除了表达FcγRⅡ受体外，还表达甘露糖受体。（ ） 6.巨噬细胞、B细胞、树突状细胞和内皮细胞都是抗原递呈胞。（ ）

7.树突状细胞能够显著刺激已活化的或记忆性T细胞增殖，而巨噬细胞、B细胞仅能刺激初始型T细胞增殖。（ ） 8.巨噬细胞递呈抗原给T细胞受MHC-Ⅰ类抗原的限制。（ ）

9.髓系来源的树突状细胞和淋巴系来源的树突状细胞的区别在于前者前体能分化发育为吞噬细胞，而后者前体能分化为淋巴细胞。（ ） 10.外源性抗原被摄取后主要通过MHCⅡ类途径加工处理和提呈，内源性抗原主要通过MHCⅠ类途径加工处理和提呈，但也存在交叉提呈现象。（ ） 二、填空题

1.参与固有免疫的细胞主要包括________、_________、_________和_____

5

1 下列有关正向间接凝集抑制反应叙述正确的是 A.用抗体致敏载体 B.主要用于抗体检测

C.出现凝集为阳性 D.不出现凝集说明标本中有待测抗原 E.以上都不对

2 关于反向间接凝集试验说法错误的是

A.抗体致敏载体 B.用于检测标本中抗原

C.出现凝集为阴性 D.敏感性高 E.特异性强 6

1 杂交瘤细胞含有

A.两亲本细胞各一半染色体 B.两亲本细胞全部染色体 C.两个染色体 D.融合特有基因信息 E.亲代某些特性基因

2 关于单克隆抗体描述下面哪项是错误的

A.生物活性专一 B.纯度高 C.特异性高 D.可识别多个表位 E.可用于诊断和治疗 8

1 荧光效率是（ ）

A 荧光素产生荧光的强度

B 荧光素将吸收的光能转变为荧光的百分率 C 物质产生荧光的效率

D 特异性荧光和非特异性荧光的强度比 E 荧光素接受激发光后，产生的荧光色调 2 最早出现的免疫标记试验是（ ）

A 放免 B 荧免 C 酶免 D 化学发光免疫 E 胶体金免疫 11

1.HRP催化的反应式为DH2+H2O2→D+2H2O,何者习惯上被称为底物A.DH2

颗粒性抗原及其抗体的制备以及相

应的凝集反应试验

一．制备颗粒性抗原

【原理】

抗原是（Ag）是指能与T细胞、B淋巴细胞的TCR或BCR结合，促使其增值、分化，产生抗体或致敏淋巴细胞，并与之结合，进而发挥免疫效应的物质。抗原诱导机体产生抗体，并能与抗体发生反应。抗原是多种多样的，就抗原性而言，有完全抗原和不完全抗原。不同抗原，其免疫原性的强弱不相同，这取决于抗原的相对分子量、化学活性基团、和空间立体结构等。这就将抗原分为颗粒性抗原、可溶性抗原。颗粒性抗原主要是指人、动物、微生物或者寄生虫的细胞。可溶性抗原主要包括蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶类、补体、脂多糖、细菌外毒素和核酸，它们有相当部分来源于组织和细胞，成分复杂。制备这类免疫原时，首先将组织和细胞破碎，然后再从组织和细胞匀浆中提取目的蛋白或其他抗原，提纯的抗原需鉴定后才能做免疫原。

【制备方案】

10%鸡红细胞制备：

（1） 采健康鸡的翼根经脉血10ml注入离心管中（加抗凝剂）； （2） 将离心管用2000r/min，离心5min，弃上清；

（3） 下层的红细胞加等量的PBS缓冲液（或无菌生理盐水）

洗细胞2～3次（每次2000r/min,5min）；

（4） 取积压红细胞，用无菌生理盐水稀释至

免疫分析检测技术

原理：

基于抗原、抗体的特异性识别和结核反应的分析方法，通过对抗原或抗体进行标记（酶、荧光物质、放射性同位素标记等），利用标记物的信号放大作用，与现代测试技术相结合，对样品中特定的目标物进行一定的目标物进行定性定量测定。 特点：

1) 特异性强、灵敏度高

2) 方法便捷、分析容量大、检测成本低

3) 可提供系列化的产品以及技术，产品可以商业化。

1. 免疫检测技术按标记抗原或抗体标记物的不同可区分为放射免疫分析法（RIA）、酶免疫分析法（EIA）、荧光免疫分析法（FIA）等，并由这些方法延伸形成了免疫传感器、免疫亲和层析法等。最早残留免疫检测中，RIA占了很大比重，但由于该方法存在放射性防护和废物处理等问题，应用受到较大限制。免疫检测法特别是酶联免疫吸附法（ELISA）按抗原、抗体的特异性结合过程中是否有两种抗体（抗原）同时与一种抗原（抗体）竞争结合的情况，而区分为非竞争性ELISA法和竞争性ELISA法两种类型。一般目标检测物是大分子的常用非竞争性ELISA法，而目标检测物是小分子的则常采用竞争性ELISA法。大部分残留物质分子量小于1000，不具备免疫原性，以此制备的抗体，进行农药残留免疫检测时多用竞争性酶联免疫反应。

兽医免疫学模拟试题 一、 填空题 填空题 1．能够通过人和兔胎盘的免疫球蛋白是▁▁▁▁▁，在黏膜免疫中起重要作用的免疫球蛋白是▁▁▁▁▁，分子量最大的免疫球蛋白是▁▁▁▁▁。 2．B细胞分化的终末效应细胞是▁▁▁▁▁，介导▁▁▁▁▁免疫；T细胞介导▁▁▁▁▁免疫，发挥作用的效应细胞是▁▁▁▁▁T细胞和▁▁▁▁▁T细胞。 3．免疫监视功能异常是可发生▁▁▁▁▁。 答案 IgG，分泌型IgA，IgM 浆细胞，体液；细胞，杀伤性，迟发变态反应性 肿瘤 4．半抗原只具有▁▁▁▁▁原性，不具有▁▁▁▁▁原性。 反应，免疫 5．免疫球蛋白分子中轻链的两型是▁▁▁▁▁和▁▁▁▁▁。 κ，λ 6．能使补体灭活而不使抗体灭活的温度是▁▁▁▁▁作用▁▁▁▁▁分钟。 7．特异性免疫应答过程可分为三个阶段，即▁▁▁▁▁、▁▁▁▁▁和▁▁▁▁▁。 8. 免疫荧光技术中最常用到的荧光素是▁▁▁▁▁；免疫酶技术中最常用到的标记酶是▁▁▁▁▁。 9．世界上最早研制成功三大弱毒疫苗的是▁▁▁▁国科学家▁▁▁▁。 10．特异性免疫应答的三大特点是▁▁▁▁、▁▁▁▁和▁▁▁▁。 12．抗原递呈细胞主要包括▁▁

一 简答题

1.简述免疫器官的组成及其在免疫中的作用.

根据功能分中枢和外周免疫器官;中枢免疫器官是免疫细胞发生,分化,发育,成熟的场所,哺乳动物的中枢免疫器官有骨髓和胸腺;外周免疫器官是成熟免疫器官定居和发生免疫应答的场所,主要包括脾,淋巴结和粘膜相关淋巴组织.

2.简述T细胞表位和B细胞表位主要特点.

受体 表位类型 MHC递呈 表位性质 T细胞表位 TCR 顺序表位 必需 线形短肽 B细胞表位 BCR 顺序表位,构想表位 不需 天然多肽，多糖，脂多糖，有机化合物 表位位置 抗原分子任意部位 抗原分子表面 3．TD-Ag与TI-Ag比较

组成 TD-Ag T细胞表位，B细胞表位 抗体类别转换 抗体亲和力 抗体类型 记忆Bcell 有 高 IgM，IgG 有 无 低 IgM 无 TI-Ag B细胞表位 抗原类型 免疫应答 蛋白类 体液免疫应答，细胞免疫应答 多糖类 体液免疫应答 Thcell的辅助 4．试述Ig的生物学功能.

必需 不需 V区：

1） 识别并特异性结合抗原 2） 中和作用（病毒，毒素） 3） 阻止黏附 4） 凝集细菌

C区：

1． 激活补体

2． 结合细胞上的FcR 1） 调理作用 2） ADCC

3） 介导I型超敏反

目录

1

选题依据和意义 ................................................................................................... 2 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1.6 2

研究背景及意义 .......................................................................................... 2 免疫算法的概述 .......................................................................................... 2 免疫算法的研究现状 ................................................................................... 3 物流配送中心选址的概述 .............................................................................