细胞培养用到的仪器设备有哪些

AEP对LPS诱导的Raw264.7细胞炎症模型抗炎实验

一、试剂与仪器 （一）细胞系 RAW264.7。 （二）试剂 胎牛血清

DMEM HyClone，美国 10000 U/mL 青霉素/链霉素Gibco，美国

DMSO Sigma，美国 lipopolsaccharide Sigma，美国 甲基四唑蓝(MTT) Sigma，美国 对氨基苯磺酸 Sigma，美国 N-α-萘乙二胺 Sigma，美国 （三）仪器 超净台 酶标仪

CO2恒温细胞培养箱 显微镜 离心机

（四）供试品配置

LPS 溶液配置：称取 LPS 粉末 5 mg，溶于 1 mL DMSO 中，得 5 mg/mL 母液。用时将母液用培养基稀释至 2 μg/mL（DMSO＜0.1%）。

MTT 溶液配置：称取 MTT 50 mg，溶于 10 mL PBS

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细胞培养从头学

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常用设备

准备室的设备：

单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。

培养室的设备：

液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、CO2孵箱（孵育培养物）、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱（放置serum和培养用液）。

无菌操作

无菌室的灭菌：

1.定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5％过氧乙酸擦拭。

2.CO2孵箱（培养箱）灭菌：先用3‰新洁尔灭擦拭，然后用75％酒精擦拭或者0.5％过氧乙酸，再用紫外灯照射

3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟

4.实验后灭菌：用75％酒精（3‰新洁尔

主要介绍设备维护保养的一些条例,以及列举了一些常用仪器设备的注意事项

仪器设备的维护保养

仪器设备维护保养制度

一、操作人员和维（检）修人员应以主人翁的态度，做到正确使用，精心维护，用严肃的态度和科学的方法维护好设备。严格执行岗位责任制，实行设备包机制（各值日安全员管理好所负责区域内的仪器设备），确保在用设备完好无损。

二、操作人员应正确使用设备，严格遵守操作规程，启动前认真准备，启动中反复检查，停机后妥善处理，运行中做好调整，认真执行操作规程与指标，不准超温、超压、超速、超负荷运行。通过操作练习和技术学习，做到懂结构、懂性能、懂用途；会使用、会维护保养、会排除故障。

三、操作人员在使用仪器设备时，应掌握设备故障的预防、判断和紧急处理措施，保持安全防护装置完整好用；使用完毕后，应切断工作电源，保持零件、附件及工具完整无缺；并认真填写设备运行记录、缺陷记录，以及操作日记。

四、操作人员必须认真执行交接班制。假如在仪器设备运行时有事离开，需委托其他实验工作人员代替看管，确保在仪器设备运行有故障或意外时，能及时采取补救行动，避免事故发生跟不必要的损失出现。

五、设备检修人员对所负责包修的设备，应按时进行巡回检查，发现问题及时处理，配合操作人员搞好安全生产。

六、值

细胞培养

相关疾病：

每天对待细胞比孝敬爹妈还用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丢了 ，培养细胞时有哪些惨痛经验教训可以分享呢?

早走早脱身，从此专注黑生物

1. 严格无菌操作，多喷喷酒精，要是对灭菌的东西不放心，自己包自己送自己烘干。

2. 不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套。

3. 有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测。

4. 水浴锅很脏，生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏，勤换 (灭菌水加进去)。

5. 晚上离开的时候最好给细胞房照紫外，超净台是用完就开。

6. 最好的是同一时间就你一个人在用细胞房在养细胞。

非科班出身经验分享

1. 别怕浪费。枪头什么的只要有可能污染就换，如果用酒精灯就什么都稍微烤一下，别直接放到火上，离一段距离。

2. 动作要既轻柔又有力。动作太重会有一堆一堆的气泡，动作太轻就吹不下来... 刚开始的时候吹细胞太痛苦了，稍微一下就起泡。后来就是吹的时候枪里的培养基不要一次全都压出来，留一点，枪的最头部尽量深的在液面以下。

3. 离开过操作台的东西再进操作台之前一定要用酒精喷一遍，包括一切实验耗材、仪器、以及你带着手套的手。

4. 实验结束后对实验台的消毒。紫外什么的，用前用后都照个 30 分钟。

5.

鸡胚培养

第一节 鸡胚接种

一、鸡胚的结构

鸡胚是正在发育的活的机体，组织分化程度低，细胞代谢旺盛，适于许多人

类和动物病毒的生长增殖，是常用的病毒分离培养方法之一（衣原体、立克次体的分离亦用鸡胚）。目前，鸡胚在正粘病毒、副粘病毒、痘病毒、疱疹病毒及脑炎病毒，尤其在禽类病毒的研究上应用较多。可用于病毒的分离、鉴定，抗原和疫苗制备，以及病毒性质的研究等。虽然随着组织培养技术的不断发展，不少病毒已不再用鸡胚来分离培养，但对某些病毒来说，鸡胚仍是一种不可缺少的培养手段。鸡胚培养的优点是，来源充足，价格低廉，操作简单，无需特殊设备或条件，易感病毒谱较广，对接种的病毒不产生抗体等。当然，鸡胚培养也有其缺点，即除痘斑和鸡胚死亡是特异性感染指征外，多需用第二试验系统来测定病毒存在与否；非 SPF 鸡胚，亦可能含有对某些家禽病毒的母源抗体，甚至还可能带有鸡白痢沙门氏菌、霉形体、鸡白血病等病毒。因此，用鸡胚分离培养病毒时，必须考虑这些问题。原则上应使用非免疫蛋来孵鸡胚，最好用 SPF 鸡胚。

一般说来，孵育至 8-14 天的鸡胚最有利于病毒的生长，因为此阶段鸡胚发

育日趋完善，各种脏器均已形成，已能经受接种物的适当刺激，同时胚胎细胞幼嫩，骨胳不健全，还未长出羽毛，很利于

细胞培养中常见的问题 2006-11-23 15:53

细胞中的颗粒到底是怎么回事？

我的细胞总有颗粒，开始是细胞中有，后来细胞之间也好像有许多颗粒。好像是细胞碎片一样。是什么东西啊？是支原体污染吗？这可是我刚买回来的细胞啊! 我们实验室也有这种情况，是不是黑的小碎片，有人说是细胞代谢产物，后来拿到高倍镜下看还会动，就怀疑是污染了，也想问问大家到底是什么

是黑色的小碎片。我没注意到它会动，只是觉得不像是活的微生物。我觉得是由于某种污染或外界因素导致的细胞状态变差，裂解出的东西。但是，是什么东西不清楚。

的确很常见

在以前帖子见到说是“黑焦虫”。长时间培养的很容易出现，我根据自己的经验估计是一种污染，因为随着黑点增多，本来生长旺盛的细胞逐渐停滞甚至死亡。而且我后来原代培养的几批细胞并没有发现，我怀疑有好多细胞系本身就是污染的。不过增加换液次数的情况下，好象一般不太娇气的细胞生长不是很受影响。 以前听很有经验的老师说黑焦虫是国产血清的问题，可以有条件换进口血清试试，或者离心一下也可能能解决问题。那么所谓的“黑焦虫”到底是什么东西啊？有谁知道？

我培养的细胞也出现过此中问题，放到高倍镜下看时有东西在动，但培养液不混浊，估计不是细菌污染，可能是血清

Hela细胞传代培养操作步骤

1．观察培养基是否正常，细胞状态如何，细胞密度如何，决定是否传代。观察时拧紧盖子。 2．加热PBS、versene、培养基，(提前做好) 瓶子不要倒着放，不要让液体接触到瓶塞。

3．打开超净台（先开风机，后开照明），用75%乙醇清洁台面，点燃酒精灯。不要把废液缸拿出去倒，如果废液太多，可以用其他容器先装废液。取小离心管一个，置于架子上。

4．取尖吸管、吸量管各一支，放置在专用的架上。放置的方式，注意吸管、吸量管前端都不要与架子接触。 5．取待传代的细胞。打开versene，用酒精灯外焰烧。烧吸管时距离酒精灯心远些，不要把渣滓带进去。把试剂拿入台子的时候，尽量平稳，不要让试剂碰到瓶口。

6．用吸量管吸取旧的培养基，置离心管中，吸量管加入versene，然后将versene瓶收起来。（加versene主要是为了将旧培养基洗去）。在离心管中间部分将液体加入。吸液体和加液体时都不要对着细胞。 7．打开胰酶，然后将versene弃掉。换新管，用尖吸管吸取适量胰酶加入。加胰酶后，尽快放平，使细胞消化时间一致。

8．将细胞放入37度孵箱。放孵箱2min, 收胰酶，打开PBS. 之后拿出来镜下随时观察。使用二次消化法，去除容器中

仪器设备报废制度

一、凡符合下列条件之一的仪器设备，可以申请报废

1．使用期已超过规定年限，并已不能达到应有技术指标且无使用价值的仪器设备；

2．损坏严重无法修复或修理费用昂贵且无修理价值的仪器设备；

3．腐蚀过甚无修复价值或继续使用易发生危险者；

4．绝缘老化，磁性失效，性能低劣且无修复价值者；

5．因事故或其它灾害，使设备遭受严重损坏列修复价值者；

6．国家规定强制报废的仪器设备。

7．国家规定应淘汰的技术性能落后、高耗能、低效率、不能迁移或者继续使用发生危险的设备。

二、仪器设备报废手续

1．凡需报废的仪器设备，使用人应填写设备报废申请表，注明报废原因以及仪器设备状况，经设备管理处对设备性能技术鉴定签字后由部门领导、公司负责人审批决定。（购置原价在千元以上的仪器设备，需由公司主管领导审批，万元以上报公司总经理审批；）

2．凭审批过的设备报废申请单到设备管理处办理报废手续并做销帐处理；

3．报废单一式两联：一联交公司财务、一联交设备管理处留存销帐。

三、报废仪器设备的处理

1．报废的仪器设备一律上交设备管理处废品库，由设备管理处按规定进行处理，使用部门不得拆零或自行处理。丢失报废的仪器设备按“仪器设备损坏丢失赔偿制度”酌情处理。

2．仪器设备批准报废后，要及时销帐，做

你还在为没有做过细胞培养实验而烦恼吗？你还在为做细胞实验而痛苦吗？看了这个《细胞培养的有关名词及其概念》相信一定会释疑我的烦恼

细胞培养的有关名词及其概念

1．原代培养（primary culture）

直接从有机体中取出的细胞、组织或器官开始进行体外培养直到第一次传代为止。这种培养称之为原代培养。

2．传代培养（subculture）

细胞从一个培养皿以1：2或1：2以上的比率转移或移植到另一个器皿的培养，这种培养称之为传代培养。

3． 悬浮培养（suspension culture）

细胞培养的一种类型。培养时通过一特殊的装置，使细胞瓶按一定的速度不断地转动，使细胞始终处于悬浮状态中进行增殖。

4．克隆（clone）

克隆指的是从一个细胞靠有丝分裂获得的一个细胞群体（population）。

5．细胞系（cell line）

在第二届细胞和组织培养专题讨论会上提出细胞系的概念为“原代培养物经首次传代成功后即成为细胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系（lineages of cells）所组成。如果不能继续传代或传代数有限，可称有限细胞系（finite cell line），如果可以连续传代，则可称为连续细胞系（continous cell line）。以

植物细胞培养技术的应用及前景

09生物科学 叶跃磷

摘要：植物细胞培养技术是应用生物工程研究成果，在细胞水

平上生产植物生物制品的技术。细胞工程是生物技术的四大领域之一 ,随着社会的不断进步和科学的不断发展,细胞工程在生命科学研究中起着不可估量的作用。植物细胞培养技术作为细胞工程中的重要技术现已广泛应用于生命科学的各个研究领域,是生物技术最新发展的重要组成部分。本文着重介绍了植物细胞培养技术的应用及其发展前景。

关键词：植物细胞培养、次生代谢产物、技术、生物转化、植物、人工种子、植物细胞培养、应用

前言：植物细胞培养技术作为细胞工程中的重要技术现已广泛应用于生命科学的各个研究领域,是生物技术最新发展的重要组成部分。植物细胞离体培养包括细胞、组织和细胞融合。[2]植物细胞的大量培养是利用植物细胞体系、通过现代生物工程手段,进行工业规模生产,以获得各种产品的一门新兴的跨学科技术。十九世纪九十年代, Haberlandt首先进行了植物细胞的培养; 1939 年, White, Nobecourt, Gau theret分别发表论文, 提出非分化的植物细胞可以无限期地进行培养, 为植物细胞培养的发展奠定了基础 。1942 年,Gau the