细胞骨架与肿瘤细胞

细胞骨架与肿瘤

一、什么是细胞骨架

细胞骨架是真核细胞中真核细胞内蛋白纤维交织而成的立体网架结构，参

与细胞形态的维持、细胞运动、细胞分裂等几乎所有的细胞生命活动。广义的细胞骨架有：细胞质骨架、核骨架、核纤层、细胞外基质。狭义上可分为：微管、微丝和中间纤维。细胞骨架作为支架可维持细胞的形态，亦可为细胞内细胞器提供附着位点；还分别参与细胞转运、信号转导、细胞分裂等功能。

1、微管，直径约25nm。典型的微管是由,根原纤维形成的一个空管,常延伸到像纤毛、鞭毛或某些原生动物的轴伪足这样一些长细胞突起中,形成有规则构型的复合物。由微管蛋白和微管结合蛋白组成，微管的装配分三个时期：成核期、延长期和稳定期。微管组装的动态调节模型有：非稳态动力模型和踏车模型。影响微管组装的因素有：微管蛋白浓度、GTP、Mg离子、温度和PH。其功能有：维持细胞形态，参与细胞特定结构的形成，参与细胞内物质的运输，参与细胞的运动，参与细胞内信号转导，维持细胞内细胞器的定位和分布。

2、微丝，直径为6一8nm。在微绒毛、褶终膜和微靖等细胞的伸展部分尤为显著。其结构与功能和微管相似。

3、中间纤维，除微丝和微管外,在高等生物细胞中通常还能观察到第三类纤维—中等纤维(其直径界

第七章 细胞骨架

第七章 细胞骨架

一、填空题

A-七-1. 细胞骨架是指存在于真核细胞中的蛋白纤维网架体系，狭义的骨架系统主要包括 微丝 、 微管 和 中间丝 。

A-七-2. 构成微管的蛋白有两类： α微管蛋白 和 β微管蛋白 。

A-七-3. 微管在细胞中有三种存在形式：单管、 二联管 和 三联管 ，其中主要分布在纤毛和鞭毛杆状部位的是 二联管 。

A-七-4. 装配时具有“踏车现象”的细胞骨架是 微丝 和 微管 。

A-七-5. 紫杉醇是作用于 微管 的特异性药物，而鬼笔环肽是作用于 微丝的特异性药物。

A-七-6. 微丝的基本组成单位是 肌动蛋白 ，其在细胞中也有两种存在方式： ① 球状肌动蛋白 ② 纤丝状肌动蛋白 。

A-七-7. 在细胞骨架系统中较为稳定的一种骨架纤维是 中间纤维 。 A-七-8. 中间纤维蛋白分子 八 聚体之间在纵向端对端首尾相连组成一条原纤维， 四 条原纤维侧向相互作用最终形成中间纤维。

A-七-9. 细胞骨架中具有极性的为 微丝 和 微管 。

B-七-10. 鞭毛和纤毛内部是由 微管 组成的轴丝构成的结构。其基部的结构式为__三联管__，而其杆部的结构

Chapter 1０ 细胞骨架与细胞运动

10.1 细胞骨架的组成和功能

10.1.1 细胞骨架的组成和分布

微管：主要分布在核周围,并呈放射状向胞质四周扩散； 微丝：主要分布在细胞质膜的内侧； 中间纤维：分布在整个细胞中。 10.1.2 细胞骨架的功能

①作为支架(scaffold)； ② 在细胞内形成一个框架(framework)结构；③ 为细胞内的物质和细胞器的运输及运动提供机械支持；④ 为细胞的位置移动提供力；⑤ 为信使RNA提供锚定位点，促进 mRNA翻译成多肽；⑥ 是细胞分裂的机器；⑦ 参与信号转导。

10.2 微管(microtuble, MT)

10.2.1 微管的结构和类型

中空的管状；外径约 24 nm，内径约 14 nm, 壁厚 5 nm；长度变化不定。 细胞内微管呈网状和束状分布, 并能与其他蛋白共同组装成纺锤体、基粒、中心粒、纤毛、鞭毛、轴突、神经管等结构。 A 微管的结构

微管是由微管蛋白异源二聚体为基本构件，螺旋盘绕而成；在每根微管中二聚体头尾相接, 形成细长的原纤维(protofilament)； 13条原纤维纵向排列组成微管的壁。

B 微管蛋白(tubulin)类型：

α和β微管蛋白：直径4nm的

[来源学科网ZXXK]

细胞骨架

A型题：

1.细胞骨架是由哪几种物质构成的

A.糖类 B.脂类 C.核酸 D.蛋白质 E.以上物质都包括 2.下列哪种结构不是由细胞中的微管组成

A.鞭毛 B.纤毛 C.中心粒 D.内质网 E.以上都不是 3.关于微管的组装，哪种说法是错误的

A.微管可随细胞的生命活动不断的组装与去组装 B.微管的组装分步进行

C.微管的极性对微管的增长有重要意义

D.微管蛋白的聚合和解聚是可逆的自体组装过程 E.微管两端的组装速度是相同的

4.在电镜下可见中心粒的每个短筒状小体

A.由9组二联微管环状斜向排列 B.由9组单管微管环状斜向排列

C.由9组三联微管环状斜向排列 D.由9组外围微管和一个中央微管排列 E.由9组外围微管和二个中央微管排列 5.组成微丝最主要的化学成分是

A.球状肌动蛋白 B.纤维状肌动蛋白 C.原肌球蛋白 D.肌钙蛋白 E.锚定蛋白 6.能够专一抑制微丝组装的物质是

A.秋水仙素 B.细胞松弛素B C.长春花碱 D.鬼笔环肽 E.Mg+ 7.在非肌细胞中，微丝与

中 国 海 洋 大 学 实 验 报 告

姓名：常天易 系年级：海洋生命学院2012级 专业：生物科学

科目：分子细胞生物学实验 学号：12050011006

植物细胞骨架的观察

一、实验目的：

1. 掌握植物细胞骨架处理及染色方法。 2. 对细胞骨架的形态和分布有一个初步认识。

二、实验原理：

真核细胞胞质中存在的纤维网状结构称为细胞骨架，包括：微管

（直径20-25nm）、微丝（直径6-7nm）、中间丝（直径10nm）、和粗丝等。考马斯亮蓝R250是一种普通的蛋白质染料，它可以使各种细胞骨架蛋白着色，显示微丝组成的张力纤维。张力纤维（直径40nm）在体外培养细胞中普遍存在，与细胞对基质的附着，维持细胞扁平铺展的性状有关。

三、实验材料

洋葱表皮细胞

试剂：

1、0.01mol/L的磷酸盐缓冲液 2、M-缓冲液

3、1%Triton X-100/M-缓冲液 4、30%戊二醛-PBS溶液

四、实验方法

撕取1平方厘米见方的洋葱表皮细胞，在培养皿中浸泡于PBS缓冲液中，使其沉底。 去PBS溶液，加入1% TritonX-100处理30min 去 TritonX-100，使用M-缓冲液洗三遍，每次5min 加入3%戊二醛溶液固定3

第九章 细胞骨架

一、名词解释 1、肌动蛋白

2、中心粒/中心体 3、细胞骨架 4、动力蛋白 5、驱动蛋白 6、微管组织中心 7、踏车行为 二、判断题

1、与微丝不同，中间纤维蛋白合成后，基本上均组装成为中间纤维，没有大量游离的单体存在。

2、通常微管的负极指向中心体

3、微管和微丝都具有极性，在装配时，正极的装配速度较快。

4、微管和微丝的装配需要能量，而中间纤维的自发装配不需要能量。

5、通常细胞内微丝和微管处于动态平衡，在低温条件下，微丝和微管趋向于解聚

6、肌动蛋白单体在临界浓度时，微丝的正极趋于装配，负极趋于解聚，微丝长度保持相对不变。

7、微丝和微管的两端都可以进行装配和解聚。 8、纤毛的运动与微管有关。 9、细胞松弛素可以使细胞变圆

10、纺锤体与染色体的运动有关，其中动粒微管在染色体运动时发生显著变化，而极微管和星体微管变化不大。

11、细胞松弛素的作用是促进微丝的稳定性。

12、与肌动蛋白和微管蛋白不一样，中间纤维蛋白具有组织特异性。 13、肌动蛋白的装配需要ATP提供能量。 14、微管蛋白的装配需要GTP提供能量。 15、微管蛋白的α和β亚基上都具有GTP结合位点，在微管装配时α亚基上的GTP会发生水解。

16、微管的直

植物细胞骨架的光学和荧光显微镜观察

一、实验目的：掌握植物细胞骨架处理及染色方法。

二、实验原理：用适当浓度的TritonX-100处理时，可将细胞内蛋白

质破坏，但细胞骨架系统的蛋白质却被保存，用光学染料考马斯亮兰R250和荧光染料鬼笔环肽染色，在普通光学显微镜和荧光显微镜下观察微丝结构。

三、实验步骤：

光学观察 1、

撕取洋葱鳞茎内表皮细胞（约1cm2大小若干片）置于装有

pH6.8磷酸缓冲液的50ml烧杯中，使其下沉；材料预处理时间太短会影响下一步操作，务必过夜处理。 2、 3、 4、 5、 6、

吸去pH6.8磷酸缓冲液，用1% TritonX-100处理20min； 吸去1% TritonX-100，用M-缓冲液洗三次，每次8min； 3%戊二醛固定30min；

pH6.8磷酸缓冲液洗三次，每次8min；

0.2%考马斯亮兰R250染色20min或者25μg/ mL罗丹明-

鬼笔环肽染色1小时； 7、

用蒸馏水洗1-2次，将内表皮细胞平铺子载玻片上，加盖

玻片，于显微镜下观察。

荧光观察：

1． 固定液中(固定液成份:4 %多聚甲醛, 50 mmol/ L Pipes pH 6.9 ,

5 mmol/ L EGTA , 5mmol/

肿瘤的细胞免疫治疗

□华中科技大学同济医学院附属协和医院干细胞研究与应用中心

湖北省生物靶向治疗研究重点实验室

傅冰洁张萌李欣审校黄士昂教授

（２００７）０４－００６１－０４［中图分类号］Ｒ７３０．５［文献标识码］Ａ［文章编码］１６７１－９４５Ｘ

肿瘤是各种致癌因素诱发细胞恶变和多种免疫细胞抗肿瘤监测杀伤功能两种“阴阳”机制互动失衡导致的恶性疾病。传统的肿瘤治疗主要是通过手术、化疗与放疗来达到早期根除肿瘤和减轻瘤负荷的目的，存在着肿瘤转移与复发的危险性，具有损伤正常组织与免疫功能低下等严重副作用，导致目前临床上肿瘤转移、复发和死亡的几率极高。肿瘤的免疫细胞治疗是通过恢复与增强肿瘤患者自身的免疫监测和杀瘤功能，可以有效地杀灭患者术后和放化疗后体内残存的肿瘤细胞，达到治疗肿瘤、预防复发与转移和最终根治肿瘤的目的，具有特异性强、副作用轻等优点，正在逐步成为肿瘤综合治疗中的一个重要环节，也是当前肿瘤治疗基础研究和临床应用的热点与发展方向。

目前的肿瘤免疫细胞治疗主要包括：细胞因子诱导杀伤细胞、淋巴因子激活杀伤细胞、自然杀伤细胞和特异性更强的肿瘤浸润细胞等具有直接杀伤肿瘤细胞效应的免疫细胞，可呈递肿瘤特异性抗原以活化具杀伤效应的Ｔ细胞的ＤＣ细胞，以及具有负向免疫调

细胞自噬和肿瘤

摘要：近年来，细胞自噬与肿瘤的关系是研究热点。研究表明，自噬是肿瘤的双刃剑；自噬调节剂与细胞毒性药物联用在临床应用上具有很大潜力。对于细胞自噬和癌症发生之间关系还需要更加深入的研究，这将会有助于人类更好地认识并最终攻克癌症。本文将针对细胞自噬在肿瘤发生过程的作用、主要的信号调节通路以及其在治疗中的作用进行简单介绍。

关键词：细胞自噬、肿瘤、信号调节通路、治疗

一、细胞自噬和肿瘤的关系

细胞自噬(autophagy)是指真核生物中的一些受损或衰老的蛋白质以及细胞器被双层膜结构的自噬小泡包裹后，送入溶酶体中进行降解并得以循环利用的过程。细胞自噬过程大致分为4个阶段:首先，细胞浆中出现游离前自噬泡，诱导起始与成核；前自噬泡包裹受损或衰老的蛋白质以及细胞器，逐渐发展成为由双层膜结构形成的自噬泡；自噬泡与溶酶体膜融合后，内膜及其包裹的物质进入溶酶体，被其中的酶水解；最后，溶酶体的物质分解为细胞生存所必需的组成成分，底物降解再循环。

肿瘤发生的机制很复杂，主要表现为细胞过度增殖，具有高代谢的特点，对营养和能量的需求很高；另外肿瘤细胞在恶劣的细胞外环境下（如代谢压力、缺氧、缺乏血供、养分及生长因子不足、抗肿瘤治疗等）具有很强的凋亡抵抗能

临床病理工作中，我们常用到“肿瘤细胞免疫组化耐药预后标记”，但是许多单位只写阳性结果，不写临床意义，其结果对临床帮助不大，因为许多医生不懂得这些结果的意义，因此建议大家在出此类报告时，把“肿瘤细胞免疫组化耐药预后标记”的意义打印在报告中，以增加病理报告的使用价值。

1、恶性肿瘤免疫组化耐药预后标记，全套4项：P-gP，GSTπ，TOPOⅡ，Ki-67。

2、乳癌免疫组化耐药预后标记，全套7项：P-gp，GSTπ，TOPOⅡ，Ki-67，ER，PR，C-erbB-2。

3、意义：标记物--作用--阳性部位--临床意义

多药耐药基因蛋白（P-Gp）--药泵作用--胞膜/胞浆--阳性率越高，对下列药物耐药性越强：阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、米托蒽醌、长春花碱、长春新碱、紫彬醇、泰素帝。

谷光甘肽S转移酶（GST π）--解毒作用--胞浆--阳性率越高，对下列药物耐药性越强：阿霉素、顺铂、氮芥、环磷酰胺、瘤可宁。

拓扑异构酶Ⅱ（TOPOⅡ）--靶点作用--胞核--阳性率越高，对下列药物越有效：蒽环类抗生素和鬼臼毒素类，如VP16、替尼泊苷、玫瑰树碱、新霉素、柔红霉素、表阿霉素、阿霉素、VM26。阳性率高者对VP16尤其有效。

雌激素受体（ER）--性激素作用--胞