问天实验舱生物技术实验柜

实验1 糖化酶固定化技术

1 实验目的

(1)熟悉酶的固定化技术和原理。 (2)掌握糖化酶的固定化操作。

2 实验原理

在一定pH条件下，带正电荷的明胶与海藻酸根阴离子形成聚合物，同时，海

藻酸钠与钙离子在一定条件下结合形成不溶于水的微球，从而使混合于其中的糖化酶通过包埋固定化。戊二醛含有两个醛基，可与蛋白质中的氨基、酚基、巯基发生反应，相互交联而使固定化酶硬化，由于带正电荷的明胶与海藻酸根阴离子形成聚合物已将绝大部分游离酶包埋起来，因此这种交联主要发生在明胶与戊二醛之间，使固定化酶的使用时间延长、机械强度增大、稳定性提高。

3 仪器和试剂

3.1 主要仪器

磁力搅拌器，pH计，水浴锅，500mL烧杯，50mL注射器，12号注射器针头，冰箱。 3.2 药品及配制

（1）所需药品：糖化酶，明胶，海藻酸钠，氯化钙，戊二醛，生理盐水。 （2）活力单位为70U/mL的糖化酶酶液100ml：用所给糖化酶配制。 （3）浓度为3%的明胶溶液150ml：称取明胶4.5g，放入装有150mL蒸馏水的烧杯中，静止10分钟，水浴加热使明胶溶解，注意水浴的温度不超过70℃。

（4）3%的海藻酸钠溶液150ml：称取海藻酸钠4.5g，放入装有

《 生物技术专业大实验 》课程

课程编号：0741524966

实 验 指 导 书

主撰人 韩军丽 王雪青 金玉莲 赵培 审核人 王素英

天津商业大学 生物技术与食品科学学院

二零零九 年 十一月

前 言

1． 实验总体目标 使学生掌握基因工程、分子生物学、细胞生物学及细胞工程实验技术，

提高学生实验动手能力、以及在实验中分析问题和解决问题的能力，为今后从事生物技术相关工作和研究打下坚实的基础。

⒉ 适用专业年级 生物技术专业第6学期

⒊ 先修课程 生物化学、微生物学、遗传学、细胞与分子生物学、基因工程、细胞工程 ⒋ 实验课时分配

实验项目 实验一 目的基因的PCR扩增 实验二 DNA片段的回收 实验三 DNA的连接 实验四 大肠杆菌感受态细胞的制备 实验五 重组DNA的转化 实验六 快速分离大肠杆菌中的重组质粒 实验七 重组质粒的酶切鉴定 实验八 外源基因诱导表达及蛋白质检测 实验九 细胞凝集反应 实验十 细胞膜的渗透性 实验十一 细胞工程基础实验技术 实验十二 无菌操作及愈伤组织诱导技术 实验十三 微藻规模化培养 实验实验每组实验 要求 类型 人数 学时 必做 综合 2 必做 综合 2 必做 综合 2 必做

实验一 纤维素酶在果汁制备中的应用

一、实验目的：了解影响果汁出汁率、固形物含量及澄清度的各因素；掌握果胶酶、纤维素酶在果汁生产中的应用。

二、实验原理：水果中含有纤维素、果胶等大分子物质，在榨汁时，这些物质会影响出汁率并使榨出的果汁浑浊，易出现沉淀。添加纤维素酶、果胶酶可以将果胶、纤维素分解成小分子的可溶性的物质，从而提高出汁率并使果汁饮料澄清。 三、实验器材

1．实验材料：新鲜桔子

2. 主要仪器：榨汁机、恒温水浴锅、分光光度计 3．实验药品：纤维素酶、5%柠檬酸、10%柠檬酸钠 四、实验内容 1.工艺流程

桔子→清洗→去皮→榨汁→过滤→酶处理→比较酶处理前后果汁澄清情况，并测透光率 2.方法步骤

（1）清洗、去皮和榨汁：每小组同学取桔子2-3个（重约200g），冲洗干净，去皮后用榨汁机榨汁。

（2）过滤：用滤布将果汁过滤到烧杯中，用5%柠檬酸或10%柠檬酸钠将果汁pH调到纤维素酶的最适pH值，一般为pH 3.0左右。

（3）酶处理：取由（2）所得果汁20ml，加入0.1%的纤维素酶，在所用纤维素酶的最适作用温度（看包装说明）下保持30min，中间注意不断搅拌或震荡。

（4）测透光率：取加酶处理后的果汁上清液，以

蚌埠医学院

《生物技术一》实验教案2010/2011学年第二学期

选用教材医用生物化学实验（自编，3版）

生物化学实验（上海交通大学出版社）授课教师夏俊

职称教授

授课专业2009级生物科学本科

教研室检验系生物化学与分子生物学

蚌埠医学院教案

2010-2011年度第二学期

教师姓名：职称：系（部）：生物科学系教研室：实验中心

授课对象：08生物本科专业生物班级授课时间：2011 年 3 月4 日

蚌埠医学院教案

2010-2011年度第二学期

教师姓名：职称：系（部）：生物科学系教研室：实验中心

蚌埠医学院教案

2010-2011年度第二学期

教师姓名：职称：系（部）：生物科学系教研室：实验中心

授课对象：08生物本科专业生物班级授课时间：2011 年 3 月4 日

复习旧课：

新课导言：细胞培养概念和意义

细胞培养是生物学和医学研究中最常用的手段之一。分为原代培养和传代培养两种。

体获取组织或器官的一部分进行培养。

刚刚从活体组织分离出来，

状态。这一方法可为研究生物体细胞生长，代谢，繁殖提供有力的手段，同时也为以后传代培养创造条件。举例：细胞各种生理活动如增殖的研究

讲授新课：

实验九：胎鼠细胞原代培养

织

块培养法和消化培养法；

械

细

胞传代培养、细胞纯化和冷冻保存等实验提供材料。

蚌埠医学院

《生物技术一》实验教案2010/2011学年第二学期

选用教材医用生物化学实验（自编，3版）

生物化学实验（上海交通大学出版社）授课教师夏俊

职称教授

授课专业2009级生物科学本科

教研室检验系生物化学与分子生物学

蚌埠医学院教案

2010-2011年度第二学期

教师姓名：职称：系（部）：生物科学系教研室：实验中心

授课对象：08生物本科专业生物班级授课时间：2011 年 3 月4 日

蚌埠医学院教案

2010-2011年度第二学期

教师姓名：职称：系（部）：生物科学系教研室：实验中心

蚌埠医学院教案

2010-2011年度第二学期

教师姓名：职称：系（部）：生物科学系教研室：实验中心

授课对象：08生物本科专业生物班级授课时间：2011 年 3 月4 日

复习旧课：

新课导言：细胞培养概念和意义

细胞培养是生物学和医学研究中最常用的手段之一。分为原代培养和传代培养两种。

体获取组织或器官的一部分进行培养。

刚刚从活体组织分离出来，

状态。这一方法可为研究生物体细胞生长，代谢，繁殖提供有力的手段，同时也为以后传代培养创造条件。举例：细胞各种生理活动如增殖的研究

讲授新课：

实验九：胎鼠细胞原代培养

织

块培养法和消化培养法；

械

细

胞传代培养、细胞纯化和冷冻保存等实验提供材料。

《生物技术大实验》

实验指导（试行）

四川农业大学农学院

1

目录

第一章 基因克隆技术………………………………………………………3

实验一 植物基因组DNA的提取及检测 ………………………………………………3 实验二 RNA的制备和分析………………………………………………………………6 实验三 蛋白质的提取及检测……………………………………………………………9 实验四 琼脂糖电泳技术…………………………………………………………………11 实验五 PCR基因扩增及其影响因素分析………………………………………………17 实验六 核酸印迹技术-DIG标记探针的分子杂交……………………………………20 实验七 λDNAHindⅢ酶切鉴定…………………………………………………………24 实验八 DNA片段的纯化回收…………………………………………………………26 实验九 DNA体外重组…………………………………………………………………29 实验十 重组DNA的蓝白筛选…………………………………………………………31

第二章 植物基因转化技术………………………………………………35

实验一 农杆菌浸染的油菜花瓣转化表达GUS基因试验…………………………

实验一 牛乳卫生质量的检测

实验目的：

1．学习美蓝还原酶试验对牛乳质量评估的原理和方法 2．学习巴氏消毒法的原理及方法

3．学习利用牛乳中细菌菌落总数判断牛乳是否被污染的指标 实验内容：

1. 美蓝还原酶实验评估牛乳质量 2. 检测巴氏消毒法消毒牛乳的效果 3. 稀释平板计数法测定牛乳含细菌总数 实验仪器设备和材料：

材料：鲜牛奶；纯牛奶；牛肉膏蛋白胨培养基 试剂：美蓝溶液（1:250 000）；无菌水；蒸馏水等；

仪器和用具：试管，试管架，三角瓶，5mL移液枪及枪头，1mL移液枪及枪头，培养平板，高温蒸汽灭菌锅，恒温水浴锅，微波炉，显微镜，载玻片，标记笔等。 实验要求：

1. 掌握根据美蓝还原酶实验的结果评估牛乳质量； 2. 熟悉巴氏消毒法的原理及方法

3．掌握利用牛乳中细菌菌落总数判断牛乳是否被污染的指标 实验方法与步骤：

1 牛肉膏蛋白胨培养基和无菌水的制备与灭菌

制备牛肉膏蛋白胨培养基400mL，分装在两个三角瓶中；取9支试管，每支试管加9mL蒸馏水。将牛肉膏蛋白胨培养基与装有蒸馏水的试管及21个平板一起灭菌，121℃维持20min。 牛肉膏蛋白胨培养基的配方（每1000mL）为：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl5g，琼脂4.4

生物技术药物讲义

前言

生物制药技术是制药工程及药学专业的专业课之一，它内容覆盖了生物技术的许多研究领域，使学生得到生物技术实验操作的全程、全方面训练，以提高学生的学习兴趣、动手能力和工作的责任心。

生物技术药物这门课程通过讲授生物制药技术的基本概念，基本理论入手,使学生理解和掌握如何从基因表达出发,到生产出合格的药品的详细过程,有重点介绍胰岛素,细胞因子等的生产过程,增强学生的学习兴趣,培养学生的综和素质。

实验内容同时将过去简单的验证性实验转变为综合性、设计性实验，旨在实验中提高学生实验设计能力、分析问题、解决问题的能力以及实验数据的处理能力，从而培养和提高学生的实践能力和创新能力。还能大大提高学生对这些热门学科的兴趣，对提高学生的综合素质和创新能力具有重要的作用和意义。

实验一 质粒DNA的提取

一、实验目的

掌握最常用的提取和纯化质粒DNA的方法。 二、实验原理

质粒是染色体外能独立遗传的共价闭合双键DNA分子，它存在于细菌和其他一些生物体内，能够提供给宿主细胞一些表现型如抗药性、分解复杂有机物的能力。细胞质粒是常用的基因工程载体，它的提取可以大致分为：细菌培养物的生长、细菌的收集和裂解以及质粒DNA的纯化几步。

本实验就是

鲁东大学生命科学学院 2010 生物技术专业《生物技术综合实验》实验指导

生物技术综合实验

实验指导

适用专业：生物技术

鲁东大学生命科学学院

编写：应用生物工程教研室

2010年

1

鲁东大学生命科学学院 2010 生物技术专业《生物技术综合实验》实验指导

目 录

第一部分、综合性实验 ....................................................................................................... 4

综合项目一、α-淀粉酶产生菌的分离与筛选 .......................................................... 4

实验一、培养基配制及样品采集 ....................................................................... 4 实验二、样品处理及初筛 ................................................................................... 5 实验

鲁东大学生命科学学院 2010 生物技术专业《生物技术综合实验》实验指导

生物技术综合实验

实验指导

适用专业：生物技术

鲁东大学生命科学学院

编写：应用生物工程教研室

2010年

1

鲁东大学生命科学学院 2010 生物技术专业《生物技术综合实验》实验指导

目 录

第一部分、综合性实验 ....................................................................................................... 4

综合项目一、α-淀粉酶产生菌的分离与筛选 .......................................................... 4

实验一、培养基配制及样品采集 ....................................................................... 4 实验二、样品处理及初筛 ................................................................................... 5 实验