包涵体蛋白纯化试剂盒

1．菌体的收集和破碎

用50 ml离心管分别收集诱导表达后的培养物，8000 rpm 4℃离心10 min(离心时间和速度应该都不够)。沉淀用适量的超声破菌缓冲液重悬。

【备注】超声破菌缓冲液：20 mmol/L Tris-HCl pH8.0、0.5 mol/L NaCl、1 mmol/L EDTA、1 mg/mL溶菌酶（暂时我没用）

重悬后的菌液于冰浴中进行超声波破碎，其条件为：功率为300W，占空比50%，每个循环30 s，总时间20 min。破碎后的匀浆， 4℃、 12000 rpm离心15 min。分别取上清液和沉淀进行12% SDS-PAGE分析，确定目的蛋白是否以包涵体的形式表达。

2．包涵体的处理

洗涤：沉淀用适量的包涵体洗涤缓冲液重悬后，搅拌洗涤20~30 min，于4℃，12000 rpm离心15 min，弃去上清液。重复一次。再用适量的50 mmol/L Tris pH8.0溶液洗涤一遍（以去除残留的EDTA），于4℃ 12000 rpm离心15 min，弃去上清液。

【备注】包涵体洗涤缓冲液（20 mmol/L Tris－HCl pH 8.0，0.5 mol/L NaCl，2 mol/L尿素，2％ Triton）

2％T

胃蛋白酶原(pepsinogen,PG)是胃分泌的一种消化酶前体,是胃液中胃蛋白酶的无活性前体,为一由375个氨基酸组成的蛋白多肽链,平均相对分子质量为42,000,人胃粘膜中有7组胃蛋白同工酶原。PG在核糖体上合成,由高尔基体分泌出细胞,被盐酸激活后变成胃蛋白酶。根据生化性质、免疫原性、细胞来源及组织内分布可分成PGⅠ、PGⅡ两个亚群,1～5组分免疫原性近似,称为PGⅠ(PGA),主要由胃腺的主细胞的粘液颈细胞分泌。

胃蛋白酶原Ⅰ/Ⅱ（PGⅠ/PGⅡ）定量检测

试剂盒（化学发光法）

一、什么是胃蛋白酶原PGⅠ. PGⅡ

PGI主要来源于胃底腺的主细胞和颈黏液细胞，PGII则来源于全胃腺(胃贲门腺、胃底腺、胃窦幽门腺)和近端十二指肠腺，前列腺和胰腺也产生少量PGII。

血清PG水平反映了不同部位胃粘膜的形态和功能。因此，联合测定PG I和PG I/II比值可起到胃底腺粘膜“血清学活检”的作用。

PG I是检测胃泌酸腺细胞功能的指针，胃酸分泌增多PG I升高，分泌减少或胃粘膜腺体萎缩PGI降低；

PG II与胃底粘膜病变的相关性较大(相对于胃窦粘膜)，其升高与胃底腺管萎缩、肠上皮化生或假幽门腺化生、异型增生有关；

PGI/II比值进行性降低与胃粘膜萎缩进展相关

碧云天 BCA蛋白浓度测定试剂盒

BCA蛋白浓度测定试剂盒 产品编号 产品名称 包装

蛋白浓度测定试剂盒次

产品简介：

¾

¾

¾

¾ BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而 成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。 灵敏度高，检测浓度下限达到25µg/ml，最小检测蛋白量达到0.5µg，待测样品体积为1-20µl。 在50-2000µg/ml浓度范围内有较好的线性关系。 BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的

Tween 20, 60, 80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1mM，β-巯基乙醇低于0.01%。不适用BCA法时建议试用碧云天生产的Bradford蛋白浓度测定试剂盒(P0006)。

BCA蛋白浓度测定试剂盒对样品中各种物质的详细的兼容性，请参见碧云天如下网页:

/Compatibility Chart For B

微生物检测试剂盒

核

酸 产品编

项目

种号 类

产品名称

方 法

规 格 价 格

SA-6131 沙门氏菌(Spp)核酸检测试剂盒

沙门氏菌 DNA

SA-6132 沙门氏菌(Spp)核酸检测试剂盒 副溶血性弧菌(VP)核酸检测试剂

SA-7051

副溶血性盒

DNA

弧菌 副溶血性弧菌(VP)核酸检测试剂

SA-7052

盒 SA-7061 霍乱弧菌(VC)核酸检测试剂盒

霍乱弧菌 DNA

SA-7062 霍乱弧菌(VC)核酸检测试剂盒 大肠杆菌(O157:H7)核酸检测试剂

SA-7071

盒

大肠杆菌 DNA

大肠杆菌(O157:H7)核酸检测试剂

SA-7072

盒

单增李斯特菌(LM)核酸检测试剂

SA-7081

单增李斯盒

DNA

特菌 单增李斯特菌(LM)核酸检测试剂

SA-7082

盒

金黄色葡萄球菌(MRSA)核酸检测

SA-7091

金黄色葡试剂盒

DNA

萄球菌 金黄色葡萄球菌(MRSA)核酸检测

SA-7092

试剂盒

口腔变形链球菌(SM)核酸检测试

SA-7111

口腔变形剂盒

DNA

链球菌 口腔变形链球菌(SM)核酸检测试

SA-7112

剂盒

幽门螺旋杆菌(HP)核酸检测试剂

SA-7121

幽门螺旋盒

DNA

杆菌 幽

His标签蛋白纯化步骤

若目的蛋白在上清表达，则使用试剂盒buffer（Novagen His?Bind Purification Kit, 70239）；若为包涵体，则需自配buffer。 （1）试剂准备 ① 12.5mL 1×charge buffer （1.6mL原液+10.9mLSW） ② 32.5mL 1×binding buffer （4mL原液+28.5mLSW） ③ 15mL 1×wash buffer （1.9mL原液+13.1mLSW） ④ 15mL 1×Elute buffer (3.8mL原液+11.2mLSW) （2）装柱

①盖上下盖，轻轻混匀His-bind Resin（若柱子不是首次使用，只需把已再生的柱床小心重悬，同样过夜沉降即可）。

②转移4mLHis-bind Resin至柱中，沿管壁流下，一次性加足，否则胶面会形成断面，影响吸附效果。

③用封口膜封住上口，置4℃冰箱，沉降过夜。 （3）过柱前准备（大约1h）

①使胶床上液依重力自动流下。

②待留至床顶时，依次加入以下溶液（用滴管沿管壁小心加入，且要一次性加足） a.7.5mL无菌SW b.12.5mL 1×charge buffer c.7.5mL 1×b

29载脂蛋白B液体试剂盒7060操作规程

载脂蛋白B液体试剂盒 （免疫透射比浊法）

Apolipoprotein B (Apo B)

【方法】

免疫透射比浊终点测定法。

【原理】

使用抗Apo B抗体和样品中的Apo B进行抗原－抗体反应。反应完成后，用透射比浊法检测吸光度的变化反映Apo B浓度。

【操作步骤】

R1（试剂1） R2（试剂2）

〃记录吸光度A2 A1，然后加R2: 50 l : 3 l 〃R1: 250 l

ΔA=[(A2－A1) 校准品管或样品管] – [(A2－A1)空白管]

【计算】

按照公司配套校准品使用要求，用3个不同水平的校准液，并以9g/L氯化钠溶液为空白，经校准测定，仪器自动对校准品响应量通过合适的数学模型如Logit/Log，拟合成校准曲线。校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。

【订货信息】

25171002101 25171001001 10 710021

171029910730 171029910735 171009910041

货 号 试剂盒规格

试剂1 5×25ml＋试剂2 试剂1 5×25ml＋试剂2 试剂1 4×20m

板块一、大肠杆菌

（这里讨论的大肠杆菌为非分泌到培养基中的重组蛋白，是否有重组蛋白分泌到培养基中的工程菌我没有见过。）

一、关于菌体的量

大肠杆菌表达的基因工程蛋白是纯化人员最方便获得的原料，对纯化工艺开发来说几乎没有原料方面的限制。常看到有战友用个几毫升的菌液去做纯化，对此我十分不解，同样要做，为什么不多做点呢？很少的菌体会给纯化带来一些难以估计的问题，工艺的重复性和放大往往出现问题。因此，要做个好工艺就多发酵表达一些菌体吧。我做纯化时，初始工艺摸索用的菌体量一般为10g左右。

二、关于是否包涵体表达

包涵体的定义我就不讲了。我要讲的是，一个基因工程蛋白是否是包涵体表达的说法本身就不完全准确。至于包涵体在电镜下的晶体颗粒表现等等对我们纯化来说毫无意义，我相信做纯化工艺的人没有谁去看这个电镜，也不关心。我们判断的依据只是SDS-PAGE，目的蛋白在破菌沉淀中，我们就认为是包涵体表达，但这是一个似是而非的结论。看着没问题，实际上是有毛病的。关键在于你用的是什么破菌缓冲液！有些蛋白在用缓冲液A破菌时是在破菌沉淀中，而用缓冲液B破菌时却在破菌上清中。缓冲液A和B的差别可能只是pH上相差1-2个单位。那么它是包涵体表达还是可溶上清表达呢？ 说这

板块一、大肠杆菌

（这里讨论的大肠杆菌为非分泌到培养基中的重组蛋白，是否有重组蛋白分泌到培养基中的工程菌我没有见过。）

一、关于菌体的量

大肠杆菌表达的基因工程蛋白是纯化人员最方便获得的原料，对纯化工艺开发来说几乎没有原料方面的限制。常看到有战友用个几毫升的菌液去做纯化，对此我十分不解，同样要做，为什么不多做点呢？很少的菌体会给纯化带来一些难以估计的问题，工艺的重复性和放大往往出现问题。因此，要做个好工艺就多发酵表达一些菌体吧。我做纯化时，初始工艺摸索用的菌体量一般为10g左右。

二、关于是否包涵体表达

包涵体的定义我就不讲了。我要讲的是，一个基因工程蛋白是否是包涵体表达的说法本身就不完全准确。至于包涵体在电镜下的晶体颗粒表现等等对我们纯化来说毫无意义，我相信做纯化工艺的人没有谁去看这个电镜，也不关心。我们判断的依据只是SDS-PAGE，目的蛋白在破菌沉淀中，我们就认为是包涵体表达，但这是一个似是而非的结论。看着没问题，实际上是有毛病的。关键在于你用的是什么破菌缓冲液！有些蛋白在用缓冲液A破菌时是在破菌沉淀中，而用缓冲液B破菌时却在破菌上清中。缓冲液A和B的差别可能只是pH上相差1-2个单位。那么它是包涵体表达还是可溶上清表达呢？ 说这

产品详细说明书

小鼠IL-2定量分析酶联免疫检测试剂盒

本试剂盒仅供科研使用。用于体外定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的IL-2浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整,如有疑问请与北京博凌科为生物科技有限公司联系，我们将提供力所能及的帮助。

如您有其它需求，请登录北京博凌科为生物科技有限公司网站或致电本公司。

IL-2简介：

IL-2是一种主要由T淋巴细胞产生的多效性的细胞因子，成熟的鼠IL-2是149个氨基酸的糖蛋白，由169个氨基酸的前体蛋白通过剪切而成为成熟的蛋白。

IL-2在抗体刺激引起的不同反应阶段的T细胞，自然杀伤细胞和B细胞的细胞增殖方面起重要的作用，此外，IL-2还可调节γ干扰素、主要组织相容性抗原的表达，刺激活化的B细胞的增殖和分化，提高自然杀伤细胞的活性和抑制粒细胞/巨噬细胞的的增殖。IL-2还可诱导少胶突细胞的增殖和分化。

检测原理:

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中小鼠IL-2的浓度。小鼠IL-2捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的小鼠IL-2会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗小鼠IL-2抗体后，抗小鼠IL-2抗体与小鼠IL-2接合，形成夹心的免

一、试剂盒打开后需要准备的工作

1、Proteinase K（蛋白酶K）的溶解

①取4.5ml双蒸水加入蛋白酶K粉中使其充分溶解

②将溶解好的蛋白酶K溶液分装进小离心管，每管100ul～200ul

③将分装好的Proteinase K放入-20℃冰箱中保存，使用期限为12个月 2、组织抑制剂（Inhibitor Removal buffer）的调配

加入20ml无水乙醇（absolute ethanol）颠倒混匀并在空白方框处打钩 3、洗液（wash buffer）的调配

加入80ml无水乙醇（absolute ethanol）颠倒混匀并在空白方框处打钩

二、组织DNA提取（试剂盒）

1、组织样品处理与消化

①将采集来的样品剪碎（≤0.1cm）洗净保存液。

②加入组织破解液Tissue-lysis 200ul 蛋白酶K 40ul然后放入55℃水浴锅内3

个小时使其充分消化。

2、DNA提取

①在消化好的组织样品中加入结合液binding buffer 200ul 然后放入70°水浴

锅中10分钟。

②再加异丙醇100ul 混合均匀吸取上清液放入柱体中，然后离心8000g一分钟。 ③倒掉底液，加500ul组织抑制剂Inhibitor