动物免疫实验

动物免疫学实验指导

第二版

徐春厚 谢为天 雍艳红 编 动物医学 生物技术专业用

广东海洋大学教材科出版 二00七年二月二十八日

目 录

实验一实验二实验三实验四实验五实验六实验七实验八实验九实验十

凝集试验?????????????????????1 沉淀试验?????????????????????4 溶血试验?????????????????????8 病毒的血凝及血凝抑制试验 ????????????10 玫瑰花环试验 ?????????????????13 玫瑰花环试验 ?????????????????15 玫瑰花环试验?????????????????17 酶联免疫吸附试验 ????????????????18 荧光抗体技术 ??????????????????20 多克隆抗体（免疫血清）的制备 ??????????22

1

E- EA EAC 实验一 凝集试验

颗粒性抗原(细菌、螺旋体、红细胞等)与相应抗体结合后，在有适量电解质存在下，抗原颗粒可相互凝集成肉眼可见的凝集块，称为凝集反应(Agglutination reaction)或凝集试验。参与凝集反应的抗原称为凝集原（

兽医免疫学模拟试题 一、 填空题 填空题 1．能够通过人和兔胎盘的免疫球蛋白是▁▁▁▁▁，在黏膜免疫中起重要作用的免疫球蛋白是▁▁▁▁▁，分子量最大的免疫球蛋白是▁▁▁▁▁。 2．B细胞分化的终末效应细胞是▁▁▁▁▁，介导▁▁▁▁▁免疫；T细胞介导▁▁▁▁▁免疫，发挥作用的效应细胞是▁▁▁▁▁T细胞和▁▁▁▁▁T细胞。 3．免疫监视功能异常是可发生▁▁▁▁▁。 答案 IgG，分泌型IgA，IgM 浆细胞，体液；细胞，杀伤性，迟发变态反应性 肿瘤 4．半抗原只具有▁▁▁▁▁原性，不具有▁▁▁▁▁原性。 反应，免疫 5．免疫球蛋白分子中轻链的两型是▁▁▁▁▁和▁▁▁▁▁。 κ，λ 6．能使补体灭活而不使抗体灭活的温度是▁▁▁▁▁作用▁▁▁▁▁分钟。 7．特异性免疫应答过程可分为三个阶段，即▁▁▁▁▁、▁▁▁▁▁和▁▁▁▁▁。 8. 免疫荧光技术中最常用到的荧光素是▁▁▁▁▁；免疫酶技术中最常用到的标记酶是▁▁▁▁▁。 9．世界上最早研制成功三大弱毒疫苗的是▁▁▁▁国科学家▁▁▁▁。 10．特异性免疫应答的三大特点是▁▁▁▁、▁▁▁▁和▁▁▁▁。 12．抗原递呈细胞主要包括▁▁

动物免疫及畜禽标识制度

动物免疫及畜禽标识制度

一、国家规定的重大动物疫病必须进行强制免疫。

二、坚持常年按程序免疫，做到应免尽免，不留空档。

三、对新补栏畜禽要及时补免，对饲养周期短的肉鸡、肉鸭、育肥猪等要加强免疫。

四、重大动物疫病以外的免疫应根据实际情况而定，需要免疫的必须按程序免疫。

五、免疫时必须规范操作，按要求及时更换注射针头，并做好各项消毒工作，防止人为传播疫情。

六、疫苗的运输和保存按不同疫苗贮存运输要求进行操作，保证疫苗质量。

七、定期采血送检，对免疫效果进行监测，确保免疫质量。

八、建立完整的免疫档案。对畜禽实行标识管理，按农业部规定使用耳标、电子标签、脚环及其他承载畜禽信息的标识物，并按规定加施畜禽标识。

动物免疫及畜禽标识制度

动物疫病监测、疫情报告制度

一、定期对动物疫病和免疫后抗体水平进行监测，了解免疫状态，选择最佳免疫时机，有效控制疫病发生。

二、积极配合动物疫病预防控制机构的监督抽查。

三、发现疑似重大动物疫病时，要立即隔离病畜，并立即向县畜牧兽医主管部门报告。

四、积极配合畜牧兽医部门或专家现场诊断。

五、一旦确诊为重大动物疫病时，要配合畜牧兽医部门采取控制扑灭措施，并无害化处理病死畜禽，彻底清理消毒，场内人员、物品不得外出。

六、对于重大动

免疫层析实验

1．原理

金免疫层析试验（dot immunogold chromatographic assay，DICA）是用胶体金标记技术和蛋白质层析技术结合的以微孔滤膜为载体的快速的固相膜免疫分析技术。本项技是将各种反应试剂分点固定在试纸条 上，检测标本加在试纸条的一端，通过毛细血管作用使样品溶液在层析材料上泳动，样本中的待测物与层析材料中的反应试剂发生特异性结合反应，形成的复合物被 富集或固定在层析条上的特定区域（检测线），通过标记免疫技术显色。本项技术的特点是可进行单份标本检测且简便、快速、不需任何仪器设备，因此，发展非常 迅速。

DICA也是GICA（goldimmunochromatography assay）GICA试剂为试纸条形式。在以塑料条上依次黏贴上以下几种组分，1--吸水纸，2--破璃纤维膜，抹上固定着干燥的金标抗体，3--硝酸纤维素膜，膜上包被着线条状抗体，4--吸水纸。

因为1，4都是吸水纸，由于吸水作用， 一，使样品液从1端向4端移动

二，当样品液达到2时，金标抗体被溶解，同时与标本中的抗原反应形成复合物 三，样品液继续移动至3 时，金标记的抗体复合物与膜上的抗体结合，呈现红色的线条

四，多余的金条抗体继

实验一、免疫细胞的形态观察

一、实验目的

1、掌握微量采血及血涂片的制作方法。 2、在光学显微镜下观察免疫细胞。 二、实验原理

血涂片是临床化验中最常规的技术，也是血液学研究中的最基本技术。将血液样品制成单层细胞的涂片标本，经瑞氏（Wright）染液染色后，不同免疫细胞中的颗粒可以呈现不同的颜色。根据细胞中颗粒的颜色大小及多少，再结合细胞的大小及细胞核的形态，就可以将免疫细胞进行分类计数。 三、实验器材

1、器材：医用一次性采血针、酒精棉球、经脱脂洗净的载玻片。

2、试剂：瑞氏（Wright）染液，瑞特氏染料0.1克溶于60mL甲醇中，过滤。贮藏褐色瓶中备用。（配制时，要先将瑞特氏染料置研钵内边研磨边滴加甲醇，使染料溶解的更好。） 四、实验步骤 1、采血

采血前用75%酒精棉球消毒人的指腹或耳垂，干后用采血针刺破指腹或耳垂的皮肤；动物采血时先将耳部剪毛，酒精消毒后刺破动物耳部皮肤，挤去第一滴血不要（因含单核细胞较多）。

2、涂片

挤出第二滴血置于载玻片的一端，再取另一张边缘光滑的载玻片，斜置于血涂片的前缘，先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端展开成线状，两玻片的角度以30~40度为宜（角度过大血膜较厚，角度小则血膜薄），轻轻将载玻片向前推

第四节 动物体的细胞识别和免疫

某种传染病爆发 ↗

有的人死亡

免疫

↘ 有的人幸存 → 极少再患此病

一、细胞识别：1907年，威尔逊的“海绵细胞的识别与聚合”实验。海绵动物是后生动物中的最低 等者。体壁上有许多小孔(称“入水 孔”),故也称“多孔动物”。个体 象瓶、壶、臼等，有时联成群体。 多数海产，固着生活。

P24

1. 概念：动物体细胞对“自己”和“异己”细胞以及物质的识别。

2. 物质基础：细胞膜表面的 糖蛋白和 糖脂。

二、抗原： 1.概念：所有被生物体细胞识别为“异己”物质 并受免疫反应排斥的物质。 多为蛋白质，还有多糖和脂类 2.成分： 3.类别：

(1)外源性(大多是):生物体自身不存在的异种或异体物质

(2) 内源性:机体内衰老或损伤的细胞以及突变后的细胞等

三、免疫： 建立在细胞识别基础上人和动物的一种保护性生理反应，是机体 免疫系统生理功能的表现。其作用是识别和区 分“自己”和“异己”物质,并对“异己”物质 产生排斥。 免疫器官、免疫细胞、免疫分子 主要作用有： ⑴ 防御感染 对抗病原微生物的侵入，杀灭侵入机体的病原体，中和其产生的毒素。

⑵ 自身稳定 清除体内各种衰老和被破坏的细胞，从而保证体内各类细胞正常功能。 人体免疫器官 ⑶ 免疫监视

2014年11月畜禽业总307期

发展思路

·55·

近年来随着畜禽养殖业主和养殖数量的不断增加，养殖规模的不断扩大，养殖格局发生了较大变化，规模化养殖场不断增加与养殖业主管理水平较低的矛盾，规模场大量发展与大量散养户同区域存在之间的矛盾日益凸显，给当前动物疫病免疫工作带来了严峻的挑战，笔者长期从事基层动物疫病防控工作，对动物疫病防控工作有较深的感受，现就如何搞好重大动物疫病强制免疫工作提出个人见解。

重大动物疫病强制免疫措施探讨

曾加其

（四川省丹棱县杨场镇畜牧兽医站,四川

中图分类号：S852.4序进行免疫。

文献标志码：B

丹棱

620200）

文章编号：1008-0414(2014)11-0055-02存在不按规定实施免疫的现象，造成相应的免疫失败或疏漏的现象，而基层工作人员只注重工作的过程而不在乎工作的结果，防疫工作的时效性开展面临一定的阻力。

22.1

存在的问题养殖形式落后

农村散养模式一直以来就是养殖

1现状

规模场通过一段之间的发展，数

环境脏乱差，无配套相应的养殖设备设施，畜禽混养，畜禽舍和房屋相连，养殖行为多种多样，养殖场地因陋就简，营养搭配随意性很大，家禽则以放养形式为主。人员、牲畜流动性大，消毒措施不完善，加大交叉感染的几率，防疫

关于西安市动物强制免疫疫苗外包方案

项目实施方：西安市坤昱生物制品连锁有限责任公司

实 施 方 案

动物强制免疫是根据《国家动物防疫法》和陕西省实际情况拟定的防疫方案，对于沣东新城防疫外包是陕西省首次采用政府购买服务，转变职能的典型案例，本次强制免疫的具体实施方为西安市坤昱生物制品连锁有限责任公司 一、 人员培训：对于所参与的人员全部要求有相关工作三年

以上的员，健身健康；了解防疫方面相关的知识； 在实施免疫之前对所有人员做2天的培训，主要内容包括

1、 操作人员的自身安全：全部人员必须配备防护服、

鞋套、口罩，在免疫下一个地点时间必须更换防护服务和鞋套等；消除畜主怀疑交叉感染的担以 2、 所人免疫人员配备一个兽医器械箱（常用器械全

部配备齐全），一个疫苗冷藏箱，确保疫苗全程冷链保存；

3、 每天和建章街道办事处沟通、总结、完善当天的

防疫资料

4、 免疫前准备：和客户沟通最近一次做的免疫疫苗

时间、疫苗品种、按5%的比例对所有动物测量体温

5、 坚持三不打原则：对快要出栏的家畜不打疫苗；

对怀孕母畜不打疫苗；对处于亚健康状的家畜不打疫苗

6、 实施免疫的时候必须注射前、后消毒两次，尽量

减少应激反应，拟定应激预案，配备应激反应所需要的药品

7、

关于西安市动物强制免疫疫苗外包方案

项目实施方：西安市坤昱生物制品连锁有限责任公司

实 施 方 案

动物强制免疫是根据《国家动物防疫法》和陕西省实际情况拟定的防疫方案，对于沣东新城防疫外包是陕西省首次采用政府购买服务，转变职能的典型案例，本次强制免疫的具体实施方为西安市坤昱生物制品连锁有限责任公司 一、 人员培训：对于所参与的人员全部要求有相关工作三年

以上的员，健身健康；了解防疫方面相关的知识； 在实施免疫之前对所有人员做2天的培训，主要内容包括

1、 操作人员的自身安全：全部人员必须配备防护服、

鞋套、口罩，在免疫下一个地点时间必须更换防护服务和鞋套等；消除畜主怀疑交叉感染的担以 2、 所人免疫人员配备一个兽医器械箱（常用器械全

部配备齐全），一个疫苗冷藏箱，确保疫苗全程冷链保存；

3、 每天和建章街道办事处沟通、总结、完善当天的

防疫资料

4、 免疫前准备：和客户沟通最近一次做的免疫疫苗

时间、疫苗品种、按5%的比例对所有动物测量体温

5、 坚持三不打原则：对快要出栏的家畜不打疫苗；

对怀孕母畜不打疫苗；对处于亚健康状的家畜不打疫苗

6、 实施免疫的时候必须注射前、后消毒两次，尽量

减少应激反应，拟定应激预案，配备应激反应所需要的药品

7、

细胞爬片免疫荧光实验步骤

第一天：

1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min；

2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min， PBS浸洗玻片3次，每次3min；

3. 0.5%Triton X-100( PBS配制 )室温通透20min（细胞膜上表达的抗原省略此步骤）；

4. PBS浸洗玻片3次，每次3 min，吸水纸吸干PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室温封闭30min；

5. 吸水纸吸掉封闭液，不洗，每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗并放入湿盒，4℃孵育过夜；

第二天：

6. 加荧光二抗： PBST 浸洗爬片3次，每次3min，吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中20-37℃孵育1h，PBST浸洗切片3次，每次3min；注意：从加荧光二抗起，后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。

7. 复染核：滴加DAPI避光孵育5min，对标本进行染核，PBST 5min×4次洗去多余的DAPI；8. 用吸水纸吸干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，然后在荧光显微镜下观察采集图像。

细胞免疫荧光步骤

1.在24孔板里加500微升培养基，放爬片，接种细胞（做实验以30-50%汇合度较好。10000-30000左右

2.给药处理24h