肌动蛋白是管家基因的表达产物

以谷子(Setaria italica)为材料,提取总RNA。根据植物肌动蛋白基因编码区的两端的保守序列设计了简并引物,用5'RACE方法扩增出了谷子肌动蛋白基因编码区序列。以豌豆肌动蛋白cDNA作探针进行的Southern杂交分析表明扩增出了目的基因。将所获得的片段克隆到T载体后进行测序,

植物学通报（6）：A""A，:;6!"[6!>

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####################################################!"!!!!"研究论文!

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摘要

关键词

#

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"谷子肌动蛋白基因的克隆及序列分析!李园莉!江元清!赵武玲"阎隆飞北京!"""#$）（中国农业大学生物学院，植物生理学与生物化学国家重点实验室以谷子（!"#$%&$&#$’&($）为材料，提取总%&’。根据植物肌动蛋白基因编码区的两端的保守序列设计了简并引物，用(’%’)*方法扩增出了谷子肌动蛋白基因编码区序列。以豌豆肌动蛋白+,&’作探针进行的-./01234杂交分析表明扩增出了目的基因。将所

以谷子(Setaria italica)为材料,提取总RNA。根据植物肌动蛋白基因编码区的两端的保守序列设计了简并引物,用5'RACE方法扩增出了谷子肌动蛋白基因编码区序列。以豌豆肌动蛋白cDNA作探针进行的Southern杂交分析表明扩增出了目的基因。将所获得的片段克隆到T载体后进行测序,

植物学通报（6）：A""A，:;6!"[6!>

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摘要

关键词

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"谷子肌动蛋白基因的克隆及序列分析!李园莉!江元清!赵武玲"阎隆飞北京!"""#$）（中国农业大学生物学院，植物生理学与生物化学国家重点实验室以谷子（!"#$%&$&#$’&($）为材料，提取总%&’。根据植物肌动蛋白基因编码区的两端的保守序列设计了简并引物，用(’%’)*方法扩增出了谷子肌动蛋白基因编码区序列。以豌豆肌动蛋白+,&’作探针进行的-./01234杂交分析表明扩增出了目的基因。将所

基因克隆

中国病原生物学杂志

454

JournalofPathogenBiology

December2007,　Vol.2,　No.6

2007年12月　　第2卷第6期

论著

白纹伊蚊β2肌动蛋白基因片段的克隆及其3

作为基因表达内参照的应用

焦健华1,2,马磊2,张东辉233

(1.南京医科大学第一附属医院消化科,江苏南京210029;2.南京医科大学病原生物学系,

江苏省现代病原生物学重点实验室,江苏南京210029)

【摘要】　目的　获取白纹伊蚊β2肌动蛋白基因序列并探讨其作为基因表达内参照的作用。　方法　根据昆虫β2肌动蛋白核苷酸序列的高度保守区设计引物,通过PCR的方法从白纹伊蚊C6/36β2肌动蛋白基因片段,进一步通过RT2PCR的方法验证其在稳定转染空载体和40SC6/36细胞中的表达。　结果　获得白纹伊蚊β2肌动蛋白基因片段,长91189%以上。在稳定转染空载体和RPS4基因的36。　结论　成功获得了白纹

伊蚊β2肌动蛋白基因片段,。【关键词】　白纹伊蚊;PCR;RT2PCR

【中图分类号】　　A　　　【文章编号】　167325234(2007)0620454203

[JournalofPathogenBiology.2007Dec;2(6)

中国药物与临床2012年1月第12卷第1期Chinese Remedies &Clinics ，January 2012,Vol.12,No.1肺间质纤维化是一种渐进性加重的致命性弥漫

性肺疾病。肺内成纤维细胞和损伤的气道上皮细胞

向肌成纤维细胞转分化是特发性肺纤维化发生的重

要病理因素［１］，α鄄平滑肌肌动蛋白（α鄄ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅ

ａｃｔｉｎ，α鄄ＳＭＡ）是研究肌成纤维细胞分化的标记物。

近年来，肺纤维化转分化病理过程中涉及到的信号

通路一直是研究的热点。ｃ鄄ｊｕｎ氨基末端激酶（ｃ鄄ｊｕｎ

ＮＨ２鄄ｔｅｒｍｉｎａｌｋｉｎａｓｅ，ＪＮＫ）

信号通路参与调控许多细胞增殖、分化与凋亡，是丝裂原活化蛋白激酶家族的

重要一员［２］。Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ等［３］发现ＪＮＫ信号通路在人肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化中发挥作用，而关于体内ＪＮＫ信号通路在肺纤维化转分化过程中是否发挥作用尚未见相关研究报道。ＳＰ６００１２５作为ＪＮＫ激酶抑制剂，可特异性阻断ＪＮＫ细胞信号通路［４］。本实验使用ＳＰ６００１２５进行干预，通过观察大鼠肺组织中ｐ鄄ＪＮＫ和α鄄ＳＭＡ的表达水平，从分子信号角度探讨肺纤维化转分化的发病机制。1材料与方法１．１主要试剂及药品：盐酸博莱霉素（ＢＬＭ，

1．培养基的配制

原理

http://wenku.http://www.wodefanwen.com//link?url=B2SX0TUS5KB2ovXQcKyds9MS9OnW7y5Yn204CH3vg44FsTWICJAnwePCb013a9T-vzmX5g9oCbv6GSuPahN6jfA9hVhQXCd3QCMZ_NTscu7

步骤

LB培养基，是微生物学实验中最常用的培养基，用于培养大肠杆菌等细菌，其分为液态或是加入琼脂制成的固态培养基。加入抗生素的 LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。尽管该培养基的名称被广泛解释为Luria-Bertani 培养基，然而根据其发明人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的说法，这个名字来源于英语的 lysogeny broth，即溶菌肉汤。

LB培养基的配制：

成分

胰蛋白胨(tryptone) 10g

酵母提取物(yeast extract) 5g

氯化钠(NaCl) 10g

固体培养基另加 琼脂粉 15-20g

加双蒸水至1000mL, 用5mol/L NaOH（约0.2ml）调pH至7.2，121℃灭菌30min

配制方法

（1）称量 分别称取所

1．培养基的配制

原理

http://wenku.http://www.wodefanwen.com//link?url=B2SX0TUS5KB2ovXQcKyds9MS9OnW7y5Yn204CH3vg44FsTWICJAnwePCb013a9T-vzmX5g9oCbv6GSuPahN6jfA9hVhQXCd3QCMZ_NTscu7

步骤

LB培养基，是微生物学实验中最常用的培养基，用于培养大肠杆菌等细菌，其分为液态或是加入琼脂制成的固态培养基。加入抗生素的 LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。尽管该培养基的名称被广泛解释为Luria-Bertani 培养基，然而根据其发明人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的说法，这个名字来源于英语的 lysogeny broth，即溶菌肉汤。

LB培养基的配制：

成分

胰蛋白胨(tryptone) 10g

酵母提取物(yeast extract) 5g

氯化钠(NaCl) 10g

固体培养基另加 琼脂粉 15-20g

加双蒸水至1000mL, 用5mol/L NaOH（约0.2ml）调pH至7.2，121℃灭菌30min

配制方法

（1）称量 分别称取所

初级1

3、有关mRNA转录激活正确的是( )

A、真核RNA聚合酶Ⅱ能单独识别、结合启动子 B、基本转录因子TFⅡD组成成分TBP结合识别TATA盒 C、TFⅡD是唯一具有位点特异的DNA结合能力的因子 D、TBF相关因子与转录激活因子共同决定组织特异性转录 E、基因转录激活过程就是形成稳定的转录起始复合物 4、与DNA结合并阻止转录进行的蛋白质称为( ) A、正调控蛋白 B、反式作用因子 C、诱导物

D、分解代谢基因活化蛋白 E、阻遏物 5、启动子是指( )

A、DNA分子中能转录的序列

B、与RNA聚合酶结合的DNA序列 C、与阻遏蛋白结合的DNA序列 D、有转录终止信号的DNA序列 E、与反式作用因子结合的RNA序列

4、增强子是远离转录起始位点，增强启动子转录活性的DNA序列。 A、对

B、错

1、依赖 DNA 的转录调节因子通常含DNA 结合结构域和_____结构域。 A、转录抑制 B、转录

初级1

3、有关mRNA转录激活正确的是( )

A、真核RNA聚合酶Ⅱ能单独识别、结合启动子 B、基本转录因子TFⅡD组成成分TBP结合识别TATA盒 C、TFⅡD是唯一具有位点特异的DNA结合能力的因子 D、TBF相关因子与转录激活因子共同决定组织特异性转录 E、基因转录激活过程就是形成稳定的转录起始复合物 4、与DNA结合并阻止转录进行的蛋白质称为( ) A、正调控蛋白 B、反式作用因子 C、诱导物

D、分解代谢基因活化蛋白 E、阻遏物 5、启动子是指( )

A、DNA分子中能转录的序列

B、与RNA聚合酶结合的DNA序列 C、与阻遏蛋白结合的DNA序列 D、有转录终止信号的DNA序列 E、与反式作用因子结合的RNA序列

4、增强子是远离转录起始位点，增强启动子转录活性的DNA序列。 A、对

B、错

1、依赖 DNA 的转录调节因子通常含DNA 结合结构域和_____结构域。 A、转录抑制 B、转录

大黄鱼 热激蛋白的相关研究

第37卷　第4期

2006年7月

海　洋　与　湖　沼

OCEANOLOGIAETLIMNOLOGIASINICA

Vol137,No14July,2006

大黄鱼(Pseudosciaenacrocea)热激蛋白的

3

基因克隆、原核表达及抗血清的制备

张祖兴　李明云　陈　炯　邬　勇

(宁波大学生命科学与生物工程学院　宁波　315211) (浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所　杭州　310021)

1)

提要　　应用trizol裂解法提取象山港网箱养殖大黄鱼肝脏总RNA,采用RT2PCR获得大黄

鱼cDNA;通过设计特异引物进行PCR扩增,将PCR产物转化到质粒并直接测序,得到117kb的目的基因;同时将此目的基因连接到表达质粒pSBET中,在大肠杆菌BL21中进行诱导表达以及表达产物的分析。克隆基因的表达产物经SDS2PAGE分析表明,为60kDa左右,与阅读框的编码大小一致;。Westernblotting检测结果表明,制备的抗血清与HSP基因的系统进化分析表明,大黄鱼与非洲爪蟾最为接近的亲源关系。通过大黄鱼,、筛选和克隆出。关键词,,原核表达,抗血清中图分类号S432.1

热激蛋白(HSP)是指生物细胞在应激原特别是高温环境下诱导

http://www.abbkine.com

常见蛋白表达系统的比较

在生物学研究中，重组蛋白的研究越来越受到关注，而重组蛋白最为重要的莫过于表达系统的选择。蛋白表达系统是指用模式生物如细菌、酵母、动物细胞或者植物细胞表达外源基因蛋白的一种分子生物学技术。常见的蛋白表达系统分为原核表达系统和真核表达系统，具体又可以细分多种，每一种有各自的优缺点。在此，小编给大家整理了各表达系统间的差异，供大家参考。

表达系统 原核生物 枯草芽孢杆菌 大肠杆菌 代表工程菌株 BL21-PET系统 特点 具有原核细胞良好的可操作性，成本低，产率高，但不能进行糖基化修饰，胞内分泌形成包涵体，且易产生内毒素。 产量 外源蛋白占细菌总蛋白量：胞内表达10%-70%，胞外表达0.3%-4%。 B．subtilis系细胞壁不含内毒素，很强统、B. brevis系的胞外分泌蛋白能力，蛋统 白酶易对目的蛋白降解，重组表达质粒不稳定，真核蛋白分泌量低。 酿酒酵母 兼具原核细胞良好的可操作性和真核系统的后加工能力，但存在产量低及过度糖基化等问题。 外源蛋白占菌体总蛋白量： 10%-30%。 酵母 外源蛋白占菌体总蛋白量：约10%。 甲醇营养型 酵