酵母菌在哪合成蛋白质

《生命科学文献与论文写作》课程论文

利用酵母菌生产蛋白质

摘要：蛋白质在细胞和生物体的生命活动过程中，起着十分重要的作用，是生命机体几乎所有重要活动的承担者。酵母菌应用于生物领域由来以久。6000年来人们用这种微小的真菌制作面包、啤酒和酒。现今用于直接治疗疾病的人类蛋白质的生产，已经成为一个每年有着190亿美元产值的产业。但是这种生物大分子目前却不能大批量的生产。它们大都是费时费力的从培养皿中培养的动物（如中国仓鼠）细胞分泌提取的。基因工程研究人员发现了一种用低等的酵母菌来生产人类蛋白质的新技术。这种技术开辟了一条大量生产生物药品的新途径。酵母菌能够用来生产复杂的人类糖蛋白，这种技术对于治疗用人类蛋白的生产有着革命性的意义。更好、更便宜、更快、更安全，并提供了一个对产品的最终质量进行控制的手段。作为宿主的酵母最常用的是毕赤氏酵母和酿酒酵母。 关键词：酵母菌;生产;蛋白质

Production of proteins using the yeast

Abstract: Protein in cells and organisms of biological processes, play an important role in almost

采用3种方法对不同酵母菌的总DNA进行提取，经琼脂糖凝胶电泳、ND-1000型微量紫外分光光度计检测以及酶切、连接、预扩增试验结果的分析，表明采用改良氯化苄法提取酵母菌的总DNA质量最好，基本无DNA碎带，蛋白质污染小。通过对野生酵母菌菌株的验证试验，进一步证明采用改良氯化苄法提取的总DNA产量稳定、重复性好，可以直接用于限制性内切酶酶切试验，完全适于AFLP分析及一些其它分子生物学研究的要求方法三：酵母菌genomics/\基因组DNA的提取

一：仪器：同方法一

二：试剂：SE缓冲液（1M山梨醇，0.1MEDTA pH7.5）；溶菌酶（蛋白酶K缓冲液（10mM Tris pH7.6 0.5% SDS 1mM EDTA）；其余同前

三：操作

1.5ml 对数生长期细菌细胞

离心，12000rpm,1-2min

沉淀

溶于590ulSE缓冲液中混匀+10ul溶菌酶37℃,1hr

离心，12000rpm,8-10min

沉淀

溶于100μL，0.5μl蛋白酶Ｋ，混匀，37℃,1hr

加入1.2ml的CTAB

1、与mRNA中密码子ACG相应的反密码子是（ ） A、CGU B、UGU C、UCG D、UGC E、GCU

2、核蛋白体的功能部位有（ ） A、容纳mRNA的部位 B、结合肽酰-tRNA的部位 C、活化氨基酸的部位 D、转肽酶所在部位

E、结合氨基酰tRNA的部位

3、下列关于密码子的描述哪些项是正确的（ ）

A、密码有种属特异性，所以不同生物合成不同蛋白质 B、密码阅读有方向性，是从5’端到3’端 C、一种氨基酸可以有一组以上的密码子 D、一组密码子只可以代表一种氨基酸

E、密码第三位碱基在决定所参入的氨基酸的特异性方面作用较小 4、 蛋白质生物合成的肽链延长阶段需要（ ） A、GTP B、转肽酶

C、甲酰蛋氨酸tRNA D、mRNA E、Tu与Ts

5、关于遗传密码，正确的叙述是（ ） A、一种氨基酸只有一种密码子 B、有些密码子不代表任

酵母DNA提取方法

方法一：

石英砂法

1、5000rpm×5min 收集过夜培养的菌体（5ml左右），于 200μL 裂解液(50 mmol/ L Tris-HCl pH 8.0 , 180 mmol/ LEDTA pH 8.0 , 1 % SDS , 现配)中，加入 3/10 总体积石英砂在涡流混合器上振荡 13min，每隔 4min 将离心管取出用力甩几下，然后 65℃水浴 10min。 2、加入 200μL 5mol/L KAc，冰浴 8min； 3、12000rpm×5min 转移上清至新的离心管中；

4、加入 3 mol/L NaAc 35μl，加入异丙醇 200μL混匀后冰浴 8min，12000rpm×5min收集沉淀；

5、200μL TE 溶解，加入 RNase10μL，65℃水浴 10min； 6、加入 200μL 氯仿－异戊醇（24:1）,抽提；

7、温柔地取上清 150μL ，加入 20μL 3 mol/L NaAc 及 375μL 无水乙醇，混匀后12000rpm×8min 收集 DNA；

8、70% 乙醇洗涤沉淀，吹干后 TE 溶解，-20℃保藏。

方法二：

蜗牛酶法

1. 接种于5 ml的YEPD培养基中在

蛋白质、氨基酸代谢及蛋白质的生物合成

一、填空题

1、构成蛋白质的基本结构单元是_______________，共有______种，除_________和______外，都是L- -氨基酸。

2、丝氨酸、半胱氨酸和组氨酸三字母代表符号分别是________,_______________和________

3、唯一没有旋光性的氨基酸为______________

4、紫外吸收法（280nm）定量测定蛋白质时其主要依据是因为大多数可溶性蛋白质分子中含有 氨基酸、 氨基酸或 氨基酸。

5、蛋白质结构中主键称为________键，次级键有 __________、________、___________、____________、_______________；次级键中属于共价键的是___________键。

6、蛋白质二级结构的基本类型有_________、_______________、_________和_______。其中维持前三种二级结构稳定键的次级键为________键。

7、细胞色素C，血红蛋白的等电点分别为10和7.1，在pH8.5的溶液中它们分别荷的电性是

2010级高一生物同步教学学案 必修一《分子与细胞》第二单元细胞的自我保障 第一章细胞中的蛋白质 编制 陈秀兰 审核 张经军 日期 2010、9、18 班级 姓名 第二节蛋白质的合成与运输 【目标引领】（一个人追求的目标越高，他的才力就发展的越快。） 1描述核糖体的形态结构和成分 2 简述蛋白质的合成和加工过程 3 能够利用同位素示踪法的现象和结果进行推理和判断 4简述蛋白质分选、运输 5 学会用实验资料探究结论的方法 【预习指导】完成同步训练35页的知识梳理，总结以下问题 1. 核糖体的成分、结构、功能和种类？ 2. 分泌蛋白质的合成和分泌途径？ 3. 同位素示踪法？ 4. 蛋白质的修饰加工？ 5. 真核细胞的内膜系统？ 【情景导入】展示各种面食赏心悦目的图片，它们的原料都是面粉，经过加工和包装成的，氨基酸形成各种蛋白质也是要经过加工和修饰的。 【学导结合】 一、 蛋白质的合成 （一）核糖体： 成分: 和 结构: 和

2010级高一生物同步教学学案 必修一《分子与细胞》第二单元细胞的自我保障 第一章细胞中的蛋白质 编制 陈秀兰 审核 张经军 日期 2010、9、18 班级 姓名 第二节蛋白质的合成与运输 【目标引领】（一个人追求的目标越高，他的才力就发展的越快。） 1描述核糖体的形态结构和成分 2 简述蛋白质的合成和加工过程 3 能够利用同位素示踪法的现象和结果进行推理和判断 4简述蛋白质分选、运输 5 学会用实验资料探究结论的方法 【预习指导】完成同步训练35页的知识梳理，总结以下问题 1. 核糖体的成分、结构、功能和种类？ 2. 分泌蛋白质的合成和分泌途径？ 3. 同位素示踪法？ 4. 蛋白质的修饰加工？ 5. 真核细胞的内膜系统？ 【情景导入】展示各种面食赏心悦目的图片，它们的原料都是面粉，经过加工和包装成的，氨基酸形成各种蛋白质也是要经过加工和修饰的。 【学导结合】 一、 蛋白质的合成 （一）核糖体： 成分: 和 结构: 和

班级：________________ 姓名：________________ 学号：________________ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _装_ _ _ _ _订_ _ _ _ _线_ _ _（装订线内禁止填写答案）_ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _ _____

一、单项选择题,（在备选答案中只有一个是正确的）(本大题共100小题,100分)

1. 维系蛋白质α-螺旋和β-折叠结构稳定的化学键是

A.氢键 B.离子键 C.二硫键 D.疏水作用 E.肽键

(4)氨基酸的疏水侧链很少埋在蛋白质分子的内部 A.1,2,3 B.1,3 C.2,4 D.4 E.1,2,3,4

11. 在电场中，蛋白质泳动速度取决于

A.蛋白质颗粒的大小 B.蛋白质颗粒的形状 C.带净电荷的多少

D.A+C

E.蛋白质所带电荷的多少，分子量的大小

第五章 蛋白质（Protein) 本章主要内容（Content）

蛋白质的一般性质（General aspects)

■ 结构 ■ 蛋白质-水相互作用，影响蛋白质水溶性的因素 ■ 蛋白质-脂的相互作用 蛋白质的变性（Denaturation）

■ 蛋白质变性产生的效应 ■ 导致蛋白质变性的物理因素 ■ 导致蛋白质变性的化学因素

蛋白质的功能性质（Functional Properties） 定义与分类

水化性质 溶解度与粘度、凝胶作用

组织化 热凝结和形成、纤维的形成热塑挤压、面团 乳化性质 乳化能力与乳化稳定性 起泡作用 起泡性与泡沫稳定性 ?蛋白质的营养特性（Nutritional properties） ?蛋白质的开发利用（Utilization）

植物蛋白质和动物蛋白质：浓缩蛋白质与分离蛋白质利用微生物生产蛋白质——单细胞蛋白 第一节 引言（Introducti

■ 蛋白质是构成生物体的基本物质。

病毒，细菌，激素，植物和动物细胞原生 质都是以蛋白质为基

1

础的。

■ 酶是蛋白质 已经发现数以千计的酶。 ■ 蛋白质是由20种氨基酸构成的聚合物 一、蛋白质的分类： （一）根据组成分类

? 简单蛋白质（

蛋白质 (Protein)

组成（Composition）

?生物大分子（Macromolecule） ?构件分子—氨基酸 (Amino acid)

氨基酸 (Amino acids) R—基团

对氨基酸性质影响强烈

?非极性、疏水性。 ?极性、电中性。

?极性、负电荷、碱性。 ?极性、正电荷、酸性。

水溶液中的氨基酸 两性电解质

水溶液中的氨基酸 酸性氨基酸

水溶液中的氨基酸 碱性氨基酸

分类（Classification）

?非极性、疏水性的 ?极性、电中性的

?极性、带负电荷、碱性的 ?极性、带正电荷、酸性的

?植物蛋白与动物蛋白在氨基酸组成上

的差异——

?人体必须氨基酸——

8种氨基酸

?蛋白质的生物学效价（PER） ?转基因植物蛋白

?各种氨基酸配比的蛋白食品

一级结构（Primary structure）

?氨基酸——氨基+羧酸基 ?肽键(Peptide bond)

一级结构（Primary structure）

?线性结构(Linear polymer of amino

acids) ?氨基酸序列（Sequence）——蛋白质分子

?氨基末端（N-terminal） ?羧酸基末端（C-terminal）

?氨基酸残基(Amin