微生物的大小测定与显微计数

实验10 微生物的显微计数

实验十 微生物的显微计数

一、实验目的

1、明确血细胞计数板计数的原理。

2、掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。

二、基本原理

显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液（菌悬液）置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上(又称计菌器)，在显微镜下通过直接计数，测定菌悬液中微生物细胞或孢子浓度的一种方法。常用的计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley计菌器等，都可用于酵母、细菌、霉菌孢子等悬液的计数，而且基本原理相同。但后两种计菌器由于盖上盖玻片后，盖玻片和载波片之间的距离只有0.02mm，因此可用油浸物镜对细菌等较小的细胞进行观察和计数。除用这些计菌器外，还有在显微镜下直接观察涂片面积与视野面积之比的估算法，如此法用于牛乳的细菌学检查。显微镜直接计数法直观、快速、操作简单的优点，但此法存在着测得的结果系死菌体和活菌体的总和的缺点。

本实验以血球计数板进行微生物的显微直接计数，这是显微直接计数采用

土壤微生物测定

土壤微生物活性表示土壤中整个微生物群落或其中的一些特殊种群状态，可以反映自然或农田生态系统的微小变化。土壤微生物活性的表征量有:微生物量、C/N、土壤呼吸强度和纤维呼吸强度、微生物区系、磷酸酶活性、酶活性等。

测定指标：

1、土壤微生物量 (Mierobia lBiomass，MB)

能代表参与调控土壤能量和养分循环以及有机物质转化相对应微生物的数量，一般指土壤中体积小于5Χ103um3的生物总量。它与土壤有机质含量密切相关。

目前，熏蒸法是使用最广泛的一种测定土壤微生物量的方法阎，它是将待测土壤经药剂熏蒸后，土壤中微生物被杀死，被杀死的微生物体被新加人原土样的微生物分解(矿化)而放出CO2，根据释放出的CO2:的量和微生物体矿化率常数Kc可计算出该土样微生物中的碳量。因此碳量的大小就反映了微生物量的大小。

此外，还有平板计(通过显微镜直接计数)、成份分析法、底物诱导呼吸法、熏蒸培养法(测定油污染土壤中的微生物量—碳。受土壤水分状况影响较大，不适用强酸性土壤及刚施用过大量有机肥的土壤等)、熏蒸提取法等，均可用来测定土壤微生物量。

熏蒸提取-容量分析法 操作步骤： （1）土壤前处理和熏蒸 （2）提取

将熏蒸土壤无损地转移到20

61 非无菌产品的微生物检验：微生物计数检测

简介

后面所提到的检测都是用于在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。

设计这个实验旨在确定药物或制剂是否符合已建立的微生物质量要求规范。当用作上述目的时，可参考下面的说明，包括所取样品的量及以结果的解释。

该方法不适用于将微生物作为有效成分的产品。

可以运用包括自动化方法在内的替代微生物方法。但要求已被证明其等价于药典方法。

通用方法

在拟定的条件下进行试验，拟定的条件旨在避免待测产品的外在微生物污染。采取的避免污染的措施必须不影响任何测试中需要披露的微生物。

如果待测产品具有抗菌活性，尽可能取消或者解除这个活性。如果是用灭活剂，则它的效用和毒性情况必须说明。

如果表面活性物质作为检测样品，则它们对微生物的毒性和与灭活剂的兼容性应作说明。

计数方法

按照规定使用膜过滤法或者平板计数法。最可能数目法（MPN）是微生物计数法中精密度最差的方法。然而，对于特定的低生物负荷的产品组，可能是最适宜的方法。 方法的选择是基于如产品属性，微生物限度要求等因素进行选择的。 选择的方法必须进行大量的样品检测来判断是否符合规范。并建立其方法的适用性。

促生长实验，计数方法的适用性和阴性对照

实验五 微生物的计数与活性污泥中生物相观察

一、 实验目的

1、学习平板菌落计数法的基本原理和方法，了解血球计数板的结构和使用方法和分光光度法计数法的原理和方法。 2、学会用血球计数板对芽殖酵母进行计算。

3、学习观察活性污泥中生物相的方法，初步分析生物处理系统工作状态是否正常。

二、 实验原理

1、 平板菌落计数法

平板菌落计数法是将待测样品经适当的稀释后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据稀释倍数和取样接种量即可算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不容易完全分散成单个细胞，所以长成的一个单个菌落也有可能来自样品中的2—3个或者更多细胞。因此平板菌落结果往往偏低。为了清楚阐述平板菌落计数结果，现在已倾向使用菌落形成单位，而不以绝对的菌落数来表示样品的活菌含量。 2、 分光光度法

当光线通过细菌悬液时，由于菌体的散射及吸收作用使光线的透过量降低。在一定的范围内，菌细胞浓度与透光度成反比，与光密度成正比，而光密度或透光度可以由光电池精确测出。因此，可用一系列己知菌数的菌悬液测定光密度，作出光密度--菌数

实验一 光学显微镜的使用与微生物观察

第一节 普通光学显微镜的使用 一、实验目的

1、了解普通光学显微镜的基本构造和工作原理。

2、学习并掌握普通光学显微镜，重点是油镜的使用技术和维护知识。 3、在油镜下观察微生物的几种基本形态。 二、基本原理

（一）普通光学显微镜的构造

普通光学显微镜由机械系统和光学系统两部分组成（图1-1）。 1、机械系统

机械系统包括镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、调节器等。 （1）镜座：它是显微镜的基座，可使显微镜平稳地放置在平台上。 （2）镜臂：用以支持镜筒，也是移动显微镜时手握的部位。

（3）镜筒：它是连接接目镜（简称目镜）和接物镜（简称物镜）的金属圆筒。镜筒上端插入目镜，下端与物镜转换器相接。镜筒长度一般固定，通常是160mm。有些显微镜的镜筒长度可以调节。

（4）物镜转换器：它是一个用于安装物镜的圆盘，位于镜筒下端，其上装有3～5个不同放大倍数的物镜。为了使用方便，物镜一般按由低倍到高倍的顺序安装。转动物镜转换器可以选用合适的物镜。转换物镜时，必须用手旋转圆盘，切勿用手推动物镜，以免松脱物镜而招致损坏。

（5）载物台：载物台又称镜台，是放置标本的地方，呈方形或圆形。载物台上装有压片夹，可以固定被检标本；

实验一 光学显微镜的使用与微生物观察

第一节 普通光学显微镜的使用 一、实验目的

1、了解普通光学显微镜的基本构造和工作原理。

2、学习并掌握普通光学显微镜，重点是油镜的使用技术和维护知识。 3、在油镜下观察微生物的几种基本形态。 二、基本原理

（一）普通光学显微镜的构造

普通光学显微镜由机械系统和光学系统两部分组成（图1-1）。 1、机械系统

机械系统包括镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、调节器等。 （1）镜座：它是显微镜的基座，可使显微镜平稳地放置在平台上。 （2）镜臂：用以支持镜筒，也是移动显微镜时手握的部位。

（3）镜筒：它是连接接目镜（简称目镜）和接物镜（简称物镜）的金属圆筒。镜筒上端插入目镜，下端与物镜转换器相接。镜筒长度一般固定，通常是160mm。有些显微镜的镜筒长度可以调节。

（4）物镜转换器：它是一个用于安装物镜的圆盘，位于镜筒下端，其上装有3～5个不同放大倍数的物镜。为了使用方便，物镜一般按由低倍到高倍的顺序安装。转动物镜转换器可以选用合适的物镜。转换物镜时，必须用手旋转圆盘，切勿用手推动物镜，以免松脱物镜而招致损坏。

（5）载物台：载物台又称镜台，是放置标本的地方，呈方形或圆形。载物台上装有压片夹，可以固定被检标本；

实验一 光学显微镜的使用与微生物观察

第一节 普通光学显微镜的使用 一、实验目的

1、了解普通光学显微镜的基本构造和工作原理。

2、学习并掌握普通光学显微镜，重点是油镜的使用技术和维护知识。 3、在油镜下观察微生物的几种基本形态。 二、基本原理

（一）普通光学显微镜的构造

普通光学显微镜由机械系统和光学系统两部分组成（图1-1）。 1、机械系统

机械系统包括镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、调节器等。 （1）镜座：它是显微镜的基座，可使显微镜平稳地放置在平台上。 （2）镜臂：用以支持镜筒，也是移动显微镜时手握的部位。

（3）镜筒：它是连接接目镜（简称目镜）和接物镜（简称物镜）的金属圆筒。镜筒上端插入目镜，下端与物镜转换器相接。镜筒长度一般固定，通常是160mm。有些显微镜的镜筒长度可以调节。

（4）物镜转换器：它是一个用于安装物镜的圆盘，位于镜筒下端，其上装有3～5个不同放大倍数的物镜。为了使用方便，物镜一般按由低倍到高倍的顺序安装。转动物镜转换器可以选用合适的物镜。转换物镜时，必须用手旋转圆盘，切勿用手推动物镜，以免松脱物镜而招致损坏。

（5）载物台：载物台又称镜台，是放置标本的地方，呈方形或圆形。载物台上装有压片夹，可以固定被检标本；

实验一 光学显微镜的使用与微生物观察

第一节 普通光学显微镜的使用 一、实验目的

1、了解普通光学显微镜的基本构造和工作原理。

2、学习并掌握普通光学显微镜，重点是油镜的使用技术和维护知识。 3、在油镜下观察微生物的几种基本形态。 二、基本原理

（一）普通光学显微镜的构造

普通光学显微镜由机械系统和光学系统两部分组成（图1-1）。 1、机械系统

机械系统包括镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、调节器等。 （1）镜座：它是显微镜的基座，可使显微镜平稳地放置在平台上。 （2）镜臂：用以支持镜筒，也是移动显微镜时手握的部位。

（3）镜筒：它是连接接目镜（简称目镜）和接物镜（简称物镜）的金属圆筒。镜筒上端插入目镜，下端与物镜转换器相接。镜筒长度一般固定，通常是160mm。有些显微镜的镜筒长度可以调节。

（4）物镜转换器：它是一个用于安装物镜的圆盘，位于镜筒下端，其上装有3～5个不同放大倍数的物镜。为了使用方便，物镜一般按由低倍到高倍的顺序安装。转动物镜转换器可以选用合适的物镜。转换物镜时，必须用手旋转圆盘，切勿用手推动物镜，以免松脱物镜而招致损坏。

（5）载物台：载物台又称镜台，是放置标本的地方，呈方形或圆形。载物台上装有压片夹，可以固定被检标本；

微生物实验课件

实验四、 实验四、真菌的显微形态观察及 微生物菌落形态观察

微生物实验课件

一、实验目的 掌握真菌水浸片的制作 显微观察丝状真菌和酵母菌的形态 比较细菌、真菌和放线菌的菌落形态 比较细菌、

微生物实验课件

二、实验材料和菌种1.器材： 1.器材 器材： 接种针、滴管、载玻片、盖玻片、酒精灯、 接种针、滴管、载玻片、盖玻片、酒精灯、显微镜 2.菌种： 2.菌种 菌种： 曲霉、根霉、犁头霉、青霉 曲霉、根霉、犁头霉、 酿酒酵母、红酵母 酿酒酵母、 大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌 大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、 放线菌 放线菌507(平板一套可打开用于显微观察，一套不用打开用于菌落形态 平板一套可打开用于显微观察， 观察) 观察)

微生物实验课件

三、实验内容(一)丝状真菌及酵母显微形态观察1、实验目的要求 学习并掌握水浸片法制备标本片的方法 观察根霉、黑曲霉、 观察根霉、黑曲霉、犁头霉和青霉的菌丝形态 及特征 观察酵母菌的形态

微生物实验课件

2、实验原理 真菌形态结构比细菌复杂。习惯上， 真菌形态结构比细菌复杂。习惯上， 真菌可分为酵母菌和霉菌。 真菌可分为酵母菌和霉菌。 霉菌由粗大、 霉菌由粗大、有隔或无隔分支状菌丝

土壤微生物生物量的测定方法

1土壤微生物碳的测定方法（熏蒸提取----仪器分析法）

1.1 基本原理

新鲜土样经氯仿熏蒸后（24h），土壤微生物死亡细胞发生裂解，释放出微生物生物量碳，用一定体积的0.5mol/LK2SO4溶液提取土壤，借用有机碳自动分析仪测定微生物生物量碳含量。根据熏蒸土壤与未熏蒸土壤测定有机碳的差值及转换系数（KEC），从而计算土壤微生物生物量碳。

1.2 实验仪器

自动总有机碳（TOC）分析仪（Shimadzu Model TOC—500,JANPAN）、真空干燥器、烧杯、三角瓶、聚乙烯熟料管、离心管、滤纸、漏斗等。

1.3 实验试剂

1）无乙醇氯仿（CHCL3）；

2）0.5mol/L硫酸钾溶液：称取87g K2SO4溶于1L蒸馏水中

3）工作曲线的配制：用0.5mol/L硫酸钾溶液配制10ugC/L、30ugC/L、50ugC/L、 70ugC/L、100ugC/L系列标准碳溶液。（其实一般情况下， 仪器会自带的标曲，一般不用自己做的）

1.4 操作步骤

1.4.1 土壤的前处理（过筛和水分调节略） 1.4.2 熏蒸

称取新鲜（相当