基因工程课后题答案

第一章 绪论

填空题问题： 基因操作（Gene manipulation）的核心部分是基因克隆（gene cloning）， gene cloning 的基本要点有（），（）和（）。

参考答案： 克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择 您的答案：

填空题问题： （）是遗传物质的基本单位,也是作为遗传物质的核酸分子上的一段片段。它可以是连续的，也可以是（）；可以是（），也可以是RNA；可以存在于染色体上，也可以（） 参考答案： 基因；连续；DNA；存在于染色体之外（如质粒，噬菌体等） 您的答案：

填空题问题： 基因操作并不是一个法律概念，除了包括基因克隆外，还包括基因的（）、（）、（）和（）等与基因研究相关的内容。 参考答案： 表达；调控；检测；改造 您的答案：

填空题问题： 启动子（Promotor）是指（）。通常一个 Gene 是否表达，（）是关键的一步，是起决定作用的。在转录过程中，Promoter还是（）的结合位点。

参考答案： 基因转录过程中控制起始的部位；转录起始；RNA 聚合酶 您的答案：

填空题问题： 原核生物的 RNA polymerase 主要由两部分组成：（）和（），其中σ-因子并不参与 RNA 的合成，它的作用主

基因工程载体

---乳酸菌表达载体pMG36e及其应用现状

目前，多数外源基因的克隆与表达，主要采用大肠杆菌。然而，由于大肠杆

菌能够引起人类和动物发生不同程度的腹泻，导致机体损伤，所以其表达产物需要经过复杂的分离纯化才能达到食品医药标准。与之相比，乳酸菌作为人和动物肠道内正常菌群之一，已被证明具有诸多益生功能，而且被公认为安全无毒的 (Generally regarded as safe，GRAS)。因此，采用乳酸菌表达的外源蛋白质可免去上述复杂、繁琐的后提纯工艺；同时，乳酸菌可以在肠道中存活定植，其外源基因表达用于治疗或免疫作用的活性物质可以持续地在肠道中产生，成为人和动物体内功能性生物制剂的“加工车间”，从而起到相应的保护和治疗性作用。

乳酸菌（Lacticacidbacteria，LAB）是一类能够发酵糖类产生乳酸的革兰氏阳性细菌［1］，具有诸如缓解乳糖不耐症、调节消化道微生态平衡等益生作用，应用领域十分广泛。随着近二十几年来分子生物学的发展，以乳酸菌作为宿主，利用质粒表达外源基因，对乳酸菌进行改造以进一步提高其功能已成为目前的研究热点之一。乳酸菌常用质粒载体主要有pWV01衍生载体，pNZ系列载体［2］等。质粒pMG36e来源

基因工程试题库

001 基因工程操作的三大基本元件是【 】 I 供体 II 受体 III 载体 IV 抗体 V 配体 Ａ I + II + III Ｂ I + III + IV Ｃ II + III + IV Ｄ II + IV + V Ｅ III + IV + V

002 根据当今生命科学理论，基因工程的用途是【 】

I 分离纯化基因 II 大量生产生物分子 III 构建新型物种 IV 提高基因重组效率 Ａ I + II + III Ｂ I + II + IV Ｃ I + III + IV Ｄ II + III + IV

Ｅ I + II + III + IV

003 基因工程的三大理论基石是【 】 Ａ 经典遗传学、细胞生物学、微生物学 Ｂ 分子遗传学、分子生物学、生化工程学 Ｃ 动物学、植物学、微生物学

Ｄ 生物化学、生化工程学、化学工程学 Ｅ 生理学、仿生学、免疫学

004 根据基因工程的定义，下列各名词中不能替代基因工程的是【 】 Ａ 基因诱变 Ｂ 分子克隆 Ｃ DNA重组 Ｄ 遗传工程

Ｅ 基因无性繁殖

005 基因工程的单元操作顺序是【 】 Ａ 增，转，检，切，接 Ｂ 切，接，转，增，检 Ｃ 接，转，增，检，切 Ｄ 检，

第二章习题

一、 单选题

1. 在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指（ B ）

A ． I 类限制酶 B. II 类限制酶 C. III 类限制酶 D. 核酸内切酶 E. RNAase

2. 下列关于同裂酶的叙述错误的是 ( B )

A. 是从不同菌种分离到的不同的酶 , 也称异源同工酶。 B. 它们的识别序列完全相同。

C. 它们的切割方式可以相同，也可以不同。

D. 有些同裂酶识别的完整序列不完全一样，但切割位点间的序列一样。 E. 两种同裂酶的切割产物连接后，可能会丢失这两个同裂酶的识别位点。 3. 多数限制酶消化 DNA 的最佳温度是（ A ）

A. 37 ℃ B.30 ℃ C.25 ℃ D.16 ℃ E.33 ℃ 4. 下列关于限制酶的叙述错误的是 ( B )

A. I 类限制酶反应需要 Mg2+ 、 ATP 和 S- 腺苷蛋氨酸。 B. II 类限制酶反应需要 Mg2+ 、 ATP 。

C. III 类限制酶反应需要 Mg2+ 、 AT

第二章习题

一、 单选题

1. 在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指（ B ）

A ． I 类限制酶 B. II 类限制酶 C. III 类限制酶 D. 核酸内切酶 E. RNAase

2. 下列关于同裂酶的叙述错误的是 ( B )

A. 是从不同菌种分离到的不同的酶 , 也称异源同工酶。 B. 它们的识别序列完全相同。

C. 它们的切割方式可以相同，也可以不同。

D. 有些同裂酶识别的完整序列不完全一样，但切割位点间的序列一样。 E. 两种同裂酶的切割产物连接后，可能会丢失这两个同裂酶的识别位点。 3. 多数限制酶消化 DNA 的最佳温度是（ A ）

A. 37 ℃ B.30 ℃ C.25 ℃ D.16 ℃ E.33 ℃ 4. 下列关于限制酶的叙述错误的是 ( B )

A. I 类限制酶反应需要 Mg2+ 、 ATP 和 S- 腺苷蛋氨酸。 B. II 类限制酶反应需要 Mg2+ 、 ATP 。

C. III 类限制酶反应需要 Mg2+ 、 AT

1简述基因工程的定义和现代生物技术的内容

基因工程是利用DNA体外重组或PCR扩增技术从某种生物基因组中分离感兴趣的基因，或是用人工合成的方法获取基因，然后经过一系列切割，加工修饰，连接反应形成重组DNA分子，再将其转入适当的受体细胞，以期获得基因表达的过程.

现代生物技术的内容：基因工程技术、蛋白质工程技术、细胞（组织）工程技术、酶工程技术、发酵工程技术

2请简述基因工程中使用的主要酶类和它们的功能 限制性内切酶—主要用于DNA分子的特异切割 DNA甲基化酶—用于DNA分子的甲基化 核酸酶—用于DNA和RNA的非特异性切割 核酸聚合酶—用于DNA和RNA的合成 核酸连接酶—用于DNA和RNA的连接

核酸末端修饰酶—用于DNA和RNA的末端修饰

其它酶类--用于生物细胞的破壁，转化，核酸纯化，检测等 3载体必备的功能元件是什么，各有什么功能

至少有一个复制起点，因而至少可在一种生物体中自主复制。 至少应有一个克隆位点，以供外源DNA插入。 至少应有一个遗传标记基因，以指示载体或重组DNA分子是否进入宿主细胞。

4何为α互补，它在载体构建中有何作用

β—半乳糖苷酶基因有1021 AAs，基因产物不具酶活性

幻灯片1

基因工程

（GENETIC ENGINEERING）

幻灯片2

第一节 概 述

幻灯片3

基因工程技术的定义

用人工方法，提取或制备某种细胞的某种基因，在体外把它和一种载体连接构造杂种DNA分子，然后导入受体细胞，让其复制与表达，以改变受体细胞的某些性状或产生人们所需的产物的实验工程技术。

幻灯片4

DNA重组(DNA recombination)

DNA重组（DNA recombination）：不同来源的DNA分子末端通过磷酸二酯键共价连接，形成重新组合的DNA分子。 幻灯片5

克隆（clone）

克隆（clone）:由一个细胞经无性繁殖而形成的细胞群体。 幻灯片6

分子克隆(molecular cloning)

分子克隆（molecular cloning）:指建立单一的重组DNA的无性系的过程。即指在体外制备DNA，切割拼接成重组D

1.动物细胞DNA提取原理是什么?

答：先用SDS裂解细胞，使染色体离析，蛋白质变性，释放出核酸。然后用等体积酚/氯仿/异戊醇抽提，使蛋白质变性沉降到酚与水相的界面，DNA则留在水相中，离心后在上清液中加入醋酸钠和两倍体积无水乙醇，除去多糖物质和沉淀DNA，然后离心后沉淀用70%乙醇洗涤，最后用ddH2O溶解沉淀DNA，－20℃保存。 2.DNA提取中用到了哪些试剂？有什么作用？

EDTA:二价金属离子螯合剂，螯合Mg2+，抑制DNA酶活性。因为Mg离子是DNA酶的辅因子。

SDS:一种阴离子去污剂，在高温（55℃—65℃）条件下能裂解细胞，使染色体离析，蛋白质变性，释放出核酸。 酚:使蛋白质变性。

氯仿:作为除杂剂，除去糖、脂等杂质；加速有机相与液相分离；抽提核酸溶液中残留的酚。 乙丙醇:作为消泡剂；降低DNA的水溶性，让DNA从溶液中析出；有利于分层，使离心后的上层含DNA水相，中间的蛋白质相及下层有机溶液相维持稳定。 无水乙醇:降低DNA的水溶性，沉淀DNA。

醋酸纳:调PH，中和Tris-Buffer，形成中性环境，利于DNA沉淀。 Tris-Buffer（PH8.0）:提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏。 70％乙醇:清洗溶液中离子及

基 因 工 程 讲 义

主讲教师──陈永胜

1

目 录

第一章 绪 论???????????????????3

一、基因工程的诞生???????????????????3 二、基因工程的成就???????????????????5 三、基因工程安全性的问题???????????????? 6 四、基因工程研究的内容????????????????? 8

第二章 基因克隆所需的工具酶??????????? 12

一、限制性内切酶(restriction enzyme)????????????

12

二、DNA连接酶???????????????????? 20 三、DNA聚合酶???????????????????? 24 四、逆转录酶????????????????????? 27

第三章 基因的克隆载体 ?????????????? 28

一、质粒载体????????????????????? 28 二、大肠杆菌质粒载体 ????????????????? 30 三、λ噬菌体载体????????????????????33 四、粘粒载体（柯斯质粒载体）??????????????

基因工程试卷B

一． 名词解释（每个2分，共20分）

1、转化:

2、质粒转移性:

3、DNA文库:

4、RACE:

5、选择标记基因:

6、降落PCR

7、载体:

8、感受态细胞:

9CaMV35s:

10、ORF:

二、选择题（每题1分，共15分）

1( ) 限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是

A 修复自身的遗传缺陷 B 促进自身的基因重组 C 强化自身的核酸代谢 D 提高自身的防御能力 2( )生物工程的下游技术是

A 基因工程及分离工程 B 蛋白质工程及发酵工程 C 基因工程及蛋白质工程 D分离工程 及蛋白质工程

3 ( )基因工程操作常用的酶是:(I 内切酶II 连接酶III 末端转移酶IV聚合酶

A. I + II B. I + III + IV C. II + III + IV D. I +II + IV + III 4 ( )限制性内切核酸酶的星活性是指：

A 在非常规条件下，识别和切割序列也不发生变化的活性。 B 活性大大提高 C 切割速度大大加快 D识别序列与原