组织特异性基因敲除

中国组织工程研究 第20卷 第18期 2016–04–29出版

Chinese Journal of Tissue Engineering Research April 29, 2016 Vol.20, No.18

www.CRTER.org

·综述·

时间特异性基因敲除：技术、造模及现状和未来 陈瑞君，黄晓峰，张方明(首都医科大学附属北京友谊医院口腔科，北京市 100050)

引用本文：陈瑞君，黄晓峰，张方明. 时间特异性基因敲除：技术、造模及现状和未来[J].中国组织工程研究，2016，20(18):2725-2730. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.18.021 ORCID: 0000-0002-6850-0250(黄晓峰)

文章快速阅读：

时间特异性基因敲除的意义 通过对模型动物生长发育各 基因敲除技时间特异性基因敲除动物个时期的持续观察研究探索 术通过目标模型利用诱导剂人为控制目标基因在模型动物胚胎发 基因同源重基因敲除的时间，克服了传育阶段、幼年、成年和老年各 组代替原有统基因敲除动物缺乏出生个阶段的作用，使得基因功能 基因的方后或成年动物模型的缺陷，

《特异性免疫》教学设计

一、 教材分析 1.地位与作用

高中生物课程标准明确指出，“概述人体免疫系统在维持稳态中的作用”,本节知识是人教版必修3模块的核心内容之一，而“特异性免疫”又是免疫调节中的核心概念。学生在初中阶段已经学习了免疫学基础知识，知道人体第一、二道防线，初步了解了免疫的功能，但是对于特异性免疫的过程缺乏认识。因此，本节课在初中知识的基础上，着重分析特异性免疫的过程，通过实例引导学生理解免疫调节在维持人体稳态中的重要作用。

2.教学目标 知识目标

① 简述免疫系统的组成和免疫系统的三道防线。 ② 指出非特异性免疫和特异性免疫的区别和联系。 ③ 概述体液免疫和细胞免疫的过程、区别和联系。

④ 通过实例，分析体液免疫和细胞免疫的关联性，领悟免疫调节在维持人体稳态中的重要作用。

能力目标

① 尝试建构特异性免疫过程的概念图模型。 ② 联系实际，运用特异性免疫的原理分析相关案例。 情感态度与价值观

体会免疫调节在维持人体稳态过程中的重要作用，逐步领悟系统内各要素需要协调合作才能维持人体稳态的观点。

3、教学重点

体液免疫的过程。 教学难点

特异性免疫如何发挥防卫功能。 二、教学过程

课前准备，温习旧知，选拔“

《特异性免疫》教学设计

一、 教材分析 1.地位与作用

高中生物课程标准明确指出，“概述人体免疫系统在维持稳态中的作用”,本节知识是人教版必修3模块的核心内容之一，而“特异性免疫”又是免疫调节中的核心概念。学生在初中阶段已经学习了免疫学基础知识，知道人体第一、二道防线，初步了解了免疫的功能，但是对于特异性免疫的过程缺乏认识。因此，本节课在初中知识的基础上，着重分析特异性免疫的过程，通过实例引导学生理解免疫调节在维持人体稳态中的重要作用。

2.教学目标 知识目标

① 简述免疫系统的组成和免疫系统的三道防线。 ② 指出非特异性免疫和特异性免疫的区别和联系。 ③ 概述体液免疫和细胞免疫的过程、区别和联系。

④ 通过实例，分析体液免疫和细胞免疫的关联性，领悟免疫调节在维持人体稳态中的重要作用。

能力目标

① 尝试建构特异性免疫过程的概念图模型。 ② 联系实际，运用特异性免疫的原理分析相关案例。 情感态度与价值观

体会免疫调节在维持人体稳态过程中的重要作用，逐步领悟系统内各要素需要协调合作才能维持人体稳态的观点。

3、教学重点

体液免疫的过程。 教学难点

特异性免疫如何发挥防卫功能。 二、教学过程

课前准备，温习旧知，选拔“

现代药物探索杂志，2015年3月，00卷00号刊

导语：双特异性抗体将两种抗体的功能结合在一个分子中。目前市场上有两个双特异性抗体（一个近期被批准），还有更多正处于临床研发中。在大型制药企业的推动下，双特异性抗体正成为新一代的生物制品。

双特异性抗体

作者：Roland E.Kontermann和Ulrich Brinkmann 免疫和细胞生物学学院，斯图加特大学，德国

罗氏制药早期研发，大分子研究，罗氏创新中心，罗氏制药的研究和早期发展（PRED），大分子研究，罗氏彭茨贝格创新中心，彭茨贝格，德国

双特异性抗体（bsAbs）结合了两种抗体的特异性，可同时定位不同的抗原或表位。 具有双目标靶向功能性的BsAbs可与多个表面受体或相关配体发生相互作用，例如与癌症、增殖或炎症进程。 BsAbs还可以拉近多个目标，在一个细胞中支持蛋白复合物的形成，或使多个细胞发生接触。“强制连接”功能的例子有在凝血级联反应或靶向免疫细胞招募剂和/或激活剂中，bsAbs支持蛋白质络合。经过多年的研究和研发（R＆D），2009年第一个bsAb被批准。第二个bsAb上市是在2014年12月，还有几个处在临床试验阶段。在这里，我们描述bsAbs成为下一波抗体为基础的

目的 建立快速准确检测CYP17基因单核苷酸多态性的新方法 .方法 用等位基因特异PCR(AS-PCR)方法 对53例外周血标本CYP17基因单核苷酸多态性位点rs743572进行基因分型.结果 AS-PCR测定结果 与聚合酶链式反应-限制性片断长度多态性方法 (PCR-RFLP)的测定结果 一致.结论 采用AS-PCR检测CYP17基因多态性准确、快速.

现代中西医结合杂志 M dr Junl f n ga dTa ioa C ieeadWet nM dc e 0 Fb 2 ( ) oen 0ra o t rt rdt nl h s n s r e in 1 e, 0 4 Ie e i n e i 2 1

.8 4 5.

C 1 YP 7基因多态性等位基因特异性 P CR检测方法的建立陈巧云，李皓，红关，加燕徐冷(苏大学附属人民医院，苏镇江 2 2 0 )江江 1 0 1[要]目的建立快速准确检测 C P 7基因单核苷酸多态性的新方法。方法用等位基因特异 P R( S—摘 Y I C A P R)法对 5 C方 3例外周血标本 C P 7基因单核苷酸多态性位点 r 4 5 2进行基因分型。结果 Y 1 s 37 7 A S—P R测定

消灭PCR非特异性扩增的黄金方法 by 老谈

2014-07-17 解螺旋

PCR技术作为实验室的入门级技术，却经常困扰各位实验大神们。虽然度过了初学者们少加漏加PCR体系的阶段，但很多奋战在实验室一线的小伙伴正遭遇着PCR非特异性扩增的尴尬事件。为了解决这个问题，有多少人曾经把退火温度从50℃试到70℃、重新合成过引物、换过模板、换过全新的电泳缓冲液，或者还带着满腔的愤怒捏碎过电泳胶？今天老谈来教教大家如何对非特异性扩增嗤之以鼻！

——by老谈

给各位小伙伴脑补一下非特异性扩增，即进行PCR所扩增出来的条带不是所要的，引物与模板在非目的条带处有错配，导致延伸产物不是目的条带。例如引物二聚体，即引物在退火过程中产生了hairpin结构或其他二级结构，或者引物在模板的某些位置非特异性地结合，也同样会产生非特异性扩增。

我们都知道，PCR产物都是通过引物延伸产生的。当引物产生了二聚体或者非特异性扩增产物之后，引物本身就无法再延伸形成PCR产物了，这样的情况下，非特异性扩增产物越是多，那目的产物就越是少。如果在qPCR过程中，就会在熔解曲线中形成双峰。

小伙伴们遇到这样的问题，首先想到的可能是加入DMSO来阻止引物二聚体形成，或者E

第十二章 特异性解毒药

学习目标

理解有机磷、亚硝酸盐、氰化物、金属或类金属、有机氟中毒的中

毒机理；掌握特异性解毒剂的解毒机理、作用、用途及临床应用注意事项；会进行实验实训十中的有机磷酸酯类中毒与解救的操作方法。

凡用于解救中毒的药物称为解毒药，通常分为非特异性解毒药和特异性解毒药。非特异性解毒药（又称一般解毒药）是指能阻止毒物继续被吸收、中和或破坏以及促进其排出的药物，如催吐剂、吸附剂、泻药、氧化剂和利尿药等。该类药对多种毒物或药物中毒不具特异性，仅用作解毒的辅助治疗。特异性解毒药则是指可特异性地对抗或阻断毒物的毒作用或效应而发挥解毒作用，而其本身多不具有与毒物相反的效应。本类药物特异性强，在中毒的治疗中占有重要地位。根据解救毒物的性质，一般可分为金属络合剂、胆碱酯酶复活剂、高铁血红蛋白还原剂、氰化物解毒剂和其他解毒剂等。

一、有机磷类中毒的特异性解毒药

有机磷酸酯类化合物可与体内胆碱酯酶相结合形成磷酰化胆碱酯酶，使胆碱酯酶失去水解乙酰胆碱的能力，使乙酰胆碱在体内蓄积，出现胆碱能神经机能亢进的中毒症状。轻度中毒时乙酰胆碱与M受体（毒蕈碱受体）结合，动物表现为流涎、呕吐、腹痛、腹泻、出汗、瞳孔缩小、心率减慢、呼吸困难、发绀等；中度中毒时乙酰

B淋巴细介导胞特的异免疫性应答液免疫体答应：抗进入原体机后诱 导相应的抗特异原性B细胞化、活增殖并 最终化分为浆胞，产生特异性细体 抗进入液体发挥免，疫效。 应分——抗类：原DTAg-的免应疫答 、ITA-g的免疫应答B细

对胞D抗原T免的疫答 B细应对胞D抗原T的别 识 B胞细活 B细胞的化增殖和终末分

B细化对胞D抗原的识T 别BC识别抗R原对B胞的激细的活两个相关 互的作联用B:CR特异性合结抗原—活—第化一信 号B胞细内并加工BC化R所结的抗原，合形p成MH, C呈提给特异T性识别h,h活化后T通过达的 表DC40与BL胞表面C细D4结合——0活第二信化号1. 2

.

BC对R抗原识的别与CRT别识抗的不原同之处：1.

2.3.BC不R仅能识别蛋质白抗，还能原识别 多、核肽、多糖类、酸类和小脂分子 合物类化原 B抗C能特异R识别完整性抗原天然的 象，构识或别原抗降解所暴露位表空的 间构象 BRC对抗原的别识需APC的不加和工提 呈亦无MH,C制性限

细胞B化活需要号 信 细胞B活化第一信号：抗原(激刺信) a) 号)bBCR-CD97/b信a号 BR共受体的C殖作用增— C—1D9C/21DC/D81

B细活化胞第的信号(共二刺的信激号

第十三章 特异性免疫应答的特点及其机制

第一部分 学习习题

一、填空题

１．特异性免疫应答具有________、________、________、________、________、________和________等特点。其中________、________和________是免疫应答最重要的特点。

２．免疫应答特异性的本质是：一种________或、________仅能特异性识别一种抗原表位，因此、________或、________的多样性是保证机体对多种多样抗原产生特异性应答的分子基础。

３．BCR多样性的机制主要涉及_______、________和________等。 ４．TCR多样性的机制涉及________和________。

5. 免疫耐受乃机体对_____刺激表现为______ “免疫不应答”的现象。 6. 抗原剂量与免疫耐受的关系：适当抗原剂量免疫机体易诱导_______，而过低或过高剂量抗原刺激均可能诱导免疫耐受：低剂量可诱导T、B细胞_______；高计量诱导诱导T、B细胞_______

7. 免疫耐受按其形成机制不同，分为_______及_________。

8. 免疫耐受具有免疫应答的一

实验目的：验证小鼠在接受抗原之后机体产生了特异性免疫反应，并观察小鼠各项生理指标以及免疫器官的反应状况，再观察T细胞和B细胞在此应答的反应状况。

实验假设：小鼠免疫灭活疫苗之后，机体会逐渐产生特异性免疫应答，一方面T细胞在接受抗原刺激之后，经过阳性和阴性选择，T细胞从CD4，CD8双阳性选择为单阳性T细胞，并逐步转移，最终到达淋巴结等组织产生效应；另一方面，B细胞也会发育分化为浆细胞和记忆细胞，相应的浆细胞产生抗体以应对抗原。由于小鼠在接受抗原之后，免疫细胞在胸腺和脾脏内的数量和种类将发生变化，另外小鼠血清中也会产生相应的抗体。

因此假设，在排出其他偶然因素引起的误差的情况下，有以下结果：

1. 免疫后的小鼠胸腺大小比对照组更小，脾脏大小比对照组更大；另外免疫后小鼠的淋巴结比对照组更大。

2. 免疫后的小鼠胸腺免疫细胞数量小于对照组，脾脏免疫细胞数量大于对照组。 3. 免疫后小鼠胸腺中的单阳性淋巴细胞比对照组单阳性淋巴细胞更多，双阳性淋巴细胞比对照组更少；免疫后小鼠的脾脏中单阳性淋巴细胞数量多于对照组单阳性淋巴细胞数量。

4. 免疫后小鼠血清里面的抗体检测呈阳性，对照组小鼠血清抗体检测呈阴性。 预期结果：

预计结果与假设一致，即：

1. 免疫