丙二醛含量测定

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丙二醛含量测定

标签:文库时间:2024-12-14
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实验六、植物组织丙二醛含量测定

植物叶片在衰老过程中发生一系列生理生化变化,如核酸和蛋白质含量下降、叶绿素降解、光合作用降低及内源激素平衡失调等。这些指标在一定程度上反映衰老过程的变化。近来大量研究表明,植物在逆境胁迫或衰老过程中,细胞内活性氧代谢的平衡被破坏而有利于活性氧的积累。活性氧积累的危害之一是引发或加剧膜脂过氧化作用,造成细胞膜系统的损伤,严重时会导致植物细胞死亡。活性氧包括含氧自由基。自由基是具有未配对价电子的原子或原子团。生物体内产生的活性氧主要有超氧自由基(O-2)、羟自由基(OH·)、过氧自由基(ROO·)、烷氧自由基(RO·)、过氧化氢(H2O2)、单线态氧(O21)等。植物对活性氧产生有酶促和非酶促两类防御系统,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶POD和抗坏血酸过氧化物酶(ASA—POD)等是酶促防御系统的重要保护酶,抗坏血酸(ASA)和还原型谷胱甘肽(GSH)等是非酶促防御系统中的重要抗氧化剂。

丙二醛(MDA)是细胞膜脂过氧化作用的产物之一,它的产生还能加剧膜的损伤。因此,丙二醛产生数量的多少能够代表膜脂过氧化的程度,也可间接反映植物组织的抗氧化能力的强弱。所以在植物衰老生理和抗性生

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实验六、植物组织丙二醛含量测定

植物叶片在衰老过程中发生一系列生理生化变化,如核酸和蛋白质含量下降、叶绿素降解、光合作用降低及内源激素平衡失调等。这些指标在一定程度上反映衰老过程的变化。近来大量研究表明,植物在逆境胁迫或衰老过程中,细胞内活性氧代谢的平衡被破坏而有利于活性氧的积累。活性氧积累的危害之一是引发或加剧膜脂过氧化作用,造成细胞膜系统的损伤,严重时会导致植物细胞死亡。活性氧包括含氧自由基。自由基是具有未配对价电子的原子或原子团。生物体内产生的活性氧主要有超氧自由基(O-2)、羟自由基(OH·)、过氧自由基(ROO·)、烷氧自由基(RO·)、过氧化氢(H2O2)、单线态氧(O21)等。植物对活性氧产生有酶促和非酶促两类防御系统,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶POD和抗坏血酸过氧化物酶(ASA—POD)等是酶促防御系统的重要保护酶,抗坏血酸(ASA)和还原型谷胱甘肽(GSH)等是非酶促防御系统中的重要抗氧化剂。

丙二醛(MDA)是细胞膜脂过氧化作用的产物之一,它的产生还能加剧膜的损伤。因此,丙二醛产生数量的多少能够代表膜脂过氧化的程度,也可间接反映植物组织的抗氧化能力的强弱。所以在植物衰老生理和抗性生

植物组织中丙二醛含量的测定

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植物组织中丙二醛含量的测定

一、原理

植物器官衰老或在逆境下遭受伤害,往往发生膜脂过氧化作用,丙二醛(malondialdehydeMDA)是膜脂过氧化作用的产物之一,其含量可以反映植物遭受逆境伤害的程度。

丙二醛在酸性和高温条件,可以与硫代巴比妥酸(TBA)反应,形成在532nm波长处有最大光吸收的有色三甲基复合物,该复合物的吸光系数为155????????/(??·????),并且在600nm处有最小光吸收。可按公式:

??532-??600=155000×??×??①

算出MDA浓度??(????????/??),进一步算出单位质量组织中 MDA 含量(????????/??)。式中A532和A600分别表示532nm和600nm处的吸光度值。??为比色杯厚度(???? )。

需要指出的是,植物组织中糖类物质对MDA-TBA反应有干扰作用。为消除这种干扰,经试验,可用下列公式消除由蔗糖引起的误差。

??(????????/??)=6.45(??532-??600)?0.56??450 ②

式中: A450、A532和A600分别表示450nm、532nm 和600nm波长下的吸光度值。用公式②算出植物样品提取液中MDA的浓度后

丙二醛MDA测定

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丙二醛MDA、总抗氧化能力、超氧化物歧化酶(SOD)的

测定

丙二醛MDA测定

测试所需仪器设备:

可见光分光光度计,可调到95℃左右的恒温水浴箱(或者铝锅内放几个去掉盖子的易拉罐,将罐壁及底部穿数十个孔,以便水的进入,用来代替水浴箱)。离心机。

100T试剂盒组成与配制:

试剂一:液体20mL*1瓶,室温保存.(天冷时会凝固,每次测试前

适当水浴加温以加速溶解,直至透明方可应用)。

试剂二:液体12mL*1瓶,用时每瓶加340mL双蒸水混匀,4℃冷藏。 试剂三:粉剂*1支,4℃冷藏。

1. 按规范操作方法来配制MDA3号试剂:将1支100T的MDA3号粉剂倒入烧杯内加90℃~100℃的热蒸馏水64mL,充分溶解(溶解过程中可适当加热)。冷却后加冰醋酸60mL混匀。 2. 再将上述配好的MDA3号试剂用50%冰醋酸按2:1进行稀释,用多少配多少。

例如您需要用微量法测MDA需要试剂三为15mL,则可以取上述按规范操作法配好的试剂三10mL加冰醋酸5mL,混匀即可。配好的试剂避光4℃冰箱冷藏(冰醋酸自备)

注:因蒸馏水热胀冷缩,加热过程要蒸发,本应加60mL现多加4mL,冷却后在60mL。

50%冰醋酸的配制是50mL双蒸水加50mL冰醋酸

植物组织内丙二醛(MDA)含量的测定实验设计

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实验设计(一)

题目:植物组织内丙二醛(MDA)含量的测定——比色法 组数:第七组 组长:杨曼 学校:南通大学 年级:13级 专业:生物工程131

实验目的

1,根据待测植物的抗逆生理,掌握对待测植物做逆境处

理的方法

2,比较同种胁迫逆境处理对待测植物不同部位生长的影响

3,比较不同胁迫逆境处理对待测植物生长的影响 4,了解植物组织内MDA积累水平对植物生理状态的影响

5,掌握比色法测定植物组织内MDA含量的方法和步骤

实验原理

1,植物抗逆是植物对抗不良环境,比如抗旱、抗盐碱、抗涝、抗风、抗冻、抗病虫害等的能力.

在自然界条件下,由于不同的地理位置和气候条件以及人类活动等多方面原因,造成了各种不良环境,超出了植物正常生长、发育所能忍受的范围,致使植物受到伤害甚至死

亡。这些对植物产生伤害的环境称为逆境(stress)或胁迫。而植物对不良环境的适应性和抵抗力为抗逆性(stress resistance)或抗性.

逆境的种类多种多样,包括物理的、化学的、生物因素等,可分为生物逆境和非生物逆境两大类。对植物产生重要影响的非生物逆境主要有水分(干旱和淹涝)、温度(高、低温)、盐碱、

植物组织中丙二醛的测定

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植物组织中丙二醛的测定

一、实验目的和要求

1.了解植物叶片衰老过程中丙二醛(MDA)含量变化;

2.掌握测定丙二醛(MDA)含量的常用方法。

二、实验内容和原理

植物器官在逆境条件下或衰老时,自由基代谢失调,往往发生膜脂过氧化作用,丙二醛(MDA)是其产物之一,通常作为脂质过氧化指标,用于表示细胞膜脂过氧化程度和植物对逆境条件反应的强弱。

MDA在高温、酸性条件下与硫代巴比妥酸(TBA)反应,形成三甲基复合物,该复合物的最大吸收峰在532nm处,最小吸收峰在600nm处,消光系数为155 (mM)-1 cm-1。

三、实验材料和主要仪器

材料:新老叶蛋白提取液

仪器:移液枪,水浴箱,离心机,离心管,分光光度计

试剂:磷酸缓冲液,TBA,TCA

四、实验方法和步骤

1.制取提取液(一周前进行)

称叶龄差异明显的叶片各0.50g 左右,加入5ml 磷酸缓冲液(50mmol,pH值为7.8),于冰浴中研磨提取,匀浆液以8000g 离心力作用下(4℃)离心10min,其上清液即为提取液。

2.加试剂以及处理:

实验管:分别向1mL新老叶提取液中加TBA与TCA混合液4.0mL(92oC水浴保温30min)

空白管:1mL Pi-buffer +TBA与TCA混合液 4.0ml

RP-HPLC法测定路路通胶囊中原儿茶醛的含量

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RP-HPLC法测定路路通胶囊中原儿茶醛的含量

发表时间:2012-07-12T16:05:53.947Z 来源:《中外健康文摘》2012年第10期供稿作者:赵慧[导读] 本法专属性强,准确度高,重现性好,可作为该产品质量控制方法。

赵慧(长沙市第四人民医院湖南长沙 418000)【摘要】目的建立路路通胶囊中原儿茶醛的含量测定方法。方法用HPLC法测定路路通胶囊中原儿茶醛的含量。结果色谱柱为Dikma Diamonsil C18柱(250mm×4.6mm,5m),以甲醇-1%醋酸(12:88)为流动相,流速为1.0mL?min-1,柱温:35℃,检测波长:279nm。Diamonsil C18柱进样量在0.01349~0.1349μg范围内与峰面积呈良好线性关系(r=1.0000),平均加样回收率为99.02%(RSD=0.83%,n=9)。结论本法专属性强,准确度高,重现性好,可作为该产品质量控制方法。【关键词】高效液相色谱法路路通胶囊原儿茶醛路路通胶囊是由水蛭、三七、枳实、皂角刺、桃仁、莪术、柴胡、赤芍、当归、红花、路路通、丹参、鸡血藤、香附、王不留行等十五味中药组方而制成的复方制剂,具有祛风活络,利水通经的作用。关节痹痛,麻

RP-HPLC法测定路路通胶囊中原儿茶醛的含量

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RP-HPLC法测定路路通胶囊中原儿茶醛的含量

发表时间:2012-07-12T16:05:53.947Z 来源:《中外健康文摘》2012年第10期供稿作者:赵慧[导读] 本法专属性强,准确度高,重现性好,可作为该产品质量控制方法。

赵慧(长沙市第四人民医院湖南长沙 418000)【摘要】目的建立路路通胶囊中原儿茶醛的含量测定方法。方法用HPLC法测定路路通胶囊中原儿茶醛的含量。结果色谱柱为Dikma Diamonsil C18柱(250mm×4.6mm,5m),以甲醇-1%醋酸(12:88)为流动相,流速为1.0mL?min-1,柱温:35℃,检测波长:279nm。Diamonsil C18柱进样量在0.01349~0.1349μg范围内与峰面积呈良好线性关系(r=1.0000),平均加样回收率为99.02%(RSD=0.83%,n=9)。结论本法专属性强,准确度高,重现性好,可作为该产品质量控制方法。【关键词】高效液相色谱法路路通胶囊原儿茶醛路路通胶囊是由水蛭、三七、枳实、皂角刺、桃仁、莪术、柴胡、赤芍、当归、红花、路路通、丹参、鸡血藤、香附、王不留行等十五味中药组方而制成的复方制剂,具有祛风活络,利水通经的作用。关节痹痛,麻

含量测定

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-相当于标示量%的计算公式

片剂:V×F×T/W×平均片重/标示量×100% 针剂: V×F×T/W/标示量(g/ml) ×100%

-以重量/片计的计算公式:V×F×T/W×平均片重=重量/片 例1

司可巴比妥钠胶囊含量测定:精密称取内容物0.1385g,置碘量瓶中,加水10mL,振摇使溶解,精密加溴滴定液(0.05mol/L)25 mL,再加盐酸5 mL,立即密塞并振摇1分钟,暗处静置15分钟后,加碘化钾试液10 mL,立即密塞,摇匀,用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L,F=0.992)滴定,至近终点时加淀粉指示液,继续滴定至蓝色消失,并将滴定结果用空白试验校正。已知:样品消耗硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)17.05 mL,空白试验消耗25.22mL,每1mL溴滴定液(0.05mol/L)相当于13.01mg的司可巴比妥钠。计算本品相当于标示量的百分含量(规格0.1g,20粒胶囊内容物重2.7506 g)? (p.90-生成物滴定法) 司可巴比妥钠的滴定度计算 HHNaONaOOBrBrONN CH2CH2+Br2 (过量定量)NN OOCH3CH3CH3CH3 2KBr+I2Br2+2KI (剩余) 2NaI+Na2s4o

果胶含量的测定方法二

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果胶的测定(方案一):

黄晓钰,刘邻渭等.食品化学综合实验[M].中国农业大学出版社. 2002.158~159

实验原理:果胶经水解,其产物——半乳糖醛酸可在强酸环境中与咔唑试剂产生缩合反应,

生成紫红色化合物,其呈色深浅与半乳糖醛酸含量成正比,由此可进行比色定量测定果胶。 实验试剂:1.化学纯无水乙醇或95%乙醇。

2.精制乙醇:取无水乙醇或95%乙醇1000ml,加入锌粉4g,硫酸(1:1)4ml,

至于衡温水浴中回流10h,用全玻璃仪器蒸馏,馏出液每1000ml加锌粉和氢氧化钾各4g,并进行蒸馏。

3. 0.15%咔唑乙醇溶液:称取咔唑0.150 g,溶于精制乙醇并定容至100ml。 4.半乳糖醛酸标准溶液:先用水配置成浓度1 g/L的溶液,再配制成浓度分别为

(0、10mg/L、20 mg/L、30 mg/L、40 mg/L、50 mg/L、60 mg/L、70mg/L)的

系列半乳糖醛酸标准溶液。

5.优级纯浓硫酸。

操作方法:1样品处理: 总果胶提取:(鲜样)研磨新鲜样品50g,放入1000ml烧杯中,加入0.05mol/L

HC