培养分解纤维素细菌的培养基

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产细菌纤维素菌培养基的研究探讨

作者：应以坚 周丹丹 王雪奇

来源：《山东工业技术》2016年第14期

摘 要：本文研究产了纤维素菌培养基的优化，选取葡萄糖为碳源，蛋白胨、酵母膏、牛肉膏、硫酸铵、脲、磷酸氢二铵、硝酸钾为不同氮源，选择最佳pH值。通过分析培养基的纤维素膜重、pH值、总酸、残糖、OD值，发现以葡萄糖为碳源，以牛肉膏为氮源，pH值为5时，纤维素菌生长情况比较好，而且纤维素产量也比较高。 关键词：纤维素菌；培养基；研究探讨 DOI：10.16640/j.cnki.37-1222/t.2016.14.209 0 引言

细菌纤维素的生物合成是一个复杂的过程，为了提高其产量可以从多方面人手，找寻其它适合的菌株和比较合适的有利于菌体生长的条件以及发酵方式是一个比较可行的途径。在发件培养基培养条件的优化方面，我们采取了Placket.Burrnan试验设计和响应面分析方法。在本次试验中通过培养基条件的优化，来提高细菌纤维素的产量。在培养基条件优化方面选取了几个不同的因素，以葡萄糖为碳源时，分别选取氮源、培

常用培养基及抗生素配置 1310466559 来源：生物秀知道 浏览次数：1592 网友评论 0 条 LB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 酵母提取物 氯化钠 10g 5g 10g 如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。 SOB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 酵母提取物 氯化钠 1 mol/L 氯化钾 20g 5g 0.5g 2.5ml 用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。 SOC培养基 成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。 TB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 酵母提取物 甘油 12g 24g 4ml 各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 m

DMEM是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，是在MEM培养基的基础上研制的。分为高糖型（低于4500mg/L）和低糖型(低于1000mg/L)。高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长，适于生长较快、附着较困难肿瘤细胞等。

基本简介

DMEM是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，是在MEM培养基的基础上研制的。与MEM比较增加了各种成分用量，同时又分为高糖型（低于4500mg/L）和低糖型(低于1000mg/L)。高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长，适于生长较快、附着较困难肿瘤细胞等。

主要特点

（1）氨基酸含量为依格尔培养基的2倍，且含有非必需氨基酸，如甘氨酸等； （2）维生素含量为依格尔培养基的4倍； （3）含有糖酵解途径中的重要物质——丙酮酸； （4）含有微量的铁离子。

主要成分

DMEM(A) 细胞培养基（粉末型）成分

序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 化合物名称 无水氯化钙 .2H 2 O 硝酸铁 .9H 2 O 氯化钾 无水硫酸镁 氯化钠 无水磷酸二氢钠 丁二酸 丁二酸钠 L-盐酸精氨酸 L-盐酸胱氨酸 甘氨酸 L-盐酸组氨酸 L-异亮氨酸 L-亮氨酸 含量 (mg/L) 265.00

DMEM是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，是在MEM培养基的基础上研制的。分为高糖型（低于4500mg/L）和低糖型(低于1000mg/L)。高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长，适于生长较快、附着较困难肿瘤细胞等。

基本简介

DMEM是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，是在MEM培养基的基础上研制的。与MEM比较增加了各种成分用量，同时又分为高糖型（低于4500mg/L）和低糖型(低于1000mg/L)。高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长，适于生长较快、附着较困难肿瘤细胞等。

主要特点

（1）氨基酸含量为依格尔培养基的2倍，且含有非必需氨基酸，如甘氨酸等； （2）维生素含量为依格尔培养基的4倍； （3）含有糖酵解途径中的重要物质——丙酮酸； （4）含有微量的铁离子。

主要成分

DMEM(A) 细胞培养基（粉末型）成分

序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 化合物名称 无水氯化钙 .2H 2 O 硝酸铁 .9H 2 O 氯化钾 无水硫酸镁 氯化钠 无水磷酸二氢钠 丁二酸 丁二酸钠 L-盐酸精氨酸 L-盐酸胱氨酸 甘氨酸 L-盐酸组氨酸 L-异亮氨酸 L-亮氨酸 含量 (mg/L) 265.00

常用培养基的配制

（一）营养琼脂培养基

【用途】供细菌总数测定、保存菌种、细菌纯化、一般细菌培养、血琼脂培养基基础之用。

【成分】牛肉膏 3g

NaCl 5g 蛋白胨 10g 琼 脂 20g

【pH值】7.2±0.2

【制法】上述成分称取38g加蒸馏水1000ml，经121.3℃ 30min高压灭菌备用。 （二）蛋白胨水培养基

【用途】供细菌培养、吲哚试验之用。

【成分】蛋白胨 10g

氯化钠 5g

【pH值】7.6 【制法】将上述成分溶于1000ml蒸馏水中，过滤，分装于试管，每管2～3ml，经121.3℃ 20min高压灭菌备用。

（三）半固体培养基

【用途】供观察细菌动力、菌种保存、H抗原位相变异试验等。 【成分】蛋白胨 10g

氯化钠 5g 琼脂 2.5～3g

【pH值】7.6

【制法】上述成分加入1000ml蒸馏水中，加热溶解，分装于试管，每管3～4ml，经 121.3℃ 20min高压灭菌备用。

（四）营养肉汤培养基

【用途】供一般细菌培养、转种、复苏、增菌等，也可用于消毒效果的测定。 【成

麦康凯琼脂

麦康凯可能是世界上常用的一种鉴别培养基，它主要通过乳糖发酵鉴别肠道致病菌，还能抑制革兰氏阳性菌生长，发酵乳糖的细菌能使培养基变红，这是因为细菌发酵乳糖产酸而使培养基的PH值变成酸性的。不发酵乳糖的细菌没有颜色的变化。

麦康凯抑制阳性菌的生长，是因为其中加了结晶紫。 MACCONKEY AGAR

MacConkey agar is probably the most popular solid differential medium in the world. It is mainly used in identification of lactose fermenting, Gram-negative enteric pathogens and for inhibiting growth of Gram-positive organisms. Bacterial colonies that can ferment lactose turn the medium red. This red color is due to the pH indicators response to the acidic environment cre

文献综述

发酵培养基的优化

申请学位： 院 （系）： 专 业： 姓 名： 学 号： 指导老师：

二 O 一 五 年 六 月 五 日

学士学位 药学院 生物技术 张永芳 114080107 张小华（讲师）

文献综述：

发酵培养基的优化

张永芳：114080107 指导老师：刘向勇

【摘要】：发酵，这一门悠久的技艺，在古今中外的生产生活与科学研究中扮

演着不可或缺的角色。在实验室发酵过程中,经常需要通过试验来寻找研究对象的变化规律,这些对象包括培养基的设计、工艺参数等;而这些变化规律的寻找就要通过科学的试验设计与数据分析来实现。通过对规律的研究达到各种实用的目的,比如提高产量、降低消耗、提高产品质量等,特别对于新菌种、新产品的试验。本文对发酵培养基优化的基本方向进行了综述,并比较了常用的试验设计与数据分析方法。

【关键词】：发酵、发酵培养基、优化、最优组合、响应面法优化 【内容】：

在工业化发酵生产中，发酵培养基的设计是十分重要的，因为培养基的成分对产物浓度、菌体生长都有重要的影响。培养基优化，是指面对特定的微生物，通过实验手段配比和筛选找到一种最适合其生长及发酵的培养基，在原来的基础上提高发酵产物的产量，以期达到生产最大发酵

常用培养基的制备

技能训练3 常用培养基的制备

常用培养基的制备

实训目标熟悉培养基制备的基本程序 会制备常用的培养基

常用培养基的制备

仪器材料高压蒸气灭菌器、电热干燥箱、电炉、天平、 量筒、漏斗、试管、培养皿、烧杯、三角烧瓶、 营养琼脂培养基(或伊红美兰琼脂培养基、三 糖铁琼脂培养基、SS琼脂培养基、麦康凯琼脂 培养基)等

常用培养基的制备

方法步骤

(一)营养琼脂培养基 (二)血液琼脂培养基 (三)肉汤培养基 (四)半固体培养基

常用培养基的制备

(一)营养琼脂培养基计算 称量 溶化 倒平板或倒试管 灭菌 无菌检验 备用

常用培养基的制备

1.计算：根据营养琼脂培养基的说明书了解营养琼脂粉与水的比 例，一般是1000 ml蒸馏水中应加营养琼脂粉31.3g,再根据 培养基的需要量确定营养琼脂粉的用量。 营养琼脂粉的量=31.3×15×n/1000 (g) 其中： 15代表一个平板需要营养琼脂约15 ml; n代表要做的培养基平板的数量

常用培养基的制备

2.称量：用普通天平准确称量出营养琼脂粉的量，用量筒量出相 应的 蒸馏水的量，要尽量准确。

常用培养基的制备

3.溶化：将营养琼脂粉和蒸馏水倒入搪瓷缸中，于电炉上加热溶 化，边加热边搅拌，沸腾时立即从

专题课题3

二微生的培物养与应用分解纤维素的生物 的分微离

.基一础识 ㈠知.维纤素与纤维酶 1素.纤素维纤维素是种由葡一糖萄尾首连相成 而的分子化合物高是，含最量丰的多糖 类富质物。

考思纤维素：是球上含地最丰量的富 多类物质糖，植每物产年生的维纤素 超过70亿吨但却不会在地球，大量 上积的，为累什？

么纤维能素土壤被某些中微物生分解 利用这，因为是它们能产生纤维够素。酶人可应类分用解维纤的微素生将秸物 秆等弃物转变成酒废，用纤维精素处酶理 服面料装。

棉花等是自界中然纤维含量素高的最然产天。物

一

.础知识 基.㈠维素与纤维素纤酶2.维素纤酶纤维素酶是一复种合，一酶般认它为少至包 三种括分组，C即酶1(外酶)切、C酶(内切X)酶和葡 萄糖苷酶前，种酶两纤使素分维成纤解 二糖维第，种酶将三维纤二分解成糖萄葡糖

纤。维素

1酶、Cx酶

纤C维糖

二葡糖苷酶

葡萄萄

糖一.

基知础识㈠.纤素维与纤维素酶 .纤维3的分解：素分解纤维的微素物生，各种细有、菌 真菌少和放线菌数。

实:纤验维素酶解分维纤的实素验①取支二02mL的试 管各②入一加张滤纸条③加各pH4.入，物质8为量.01om/lL 醋的酸-醋酸缓冲液1钠1ml1和m0 l④乙在试管中入加1Lm纤素酶维 ⑤两支管固定

麦康凯琼脂

麦康凯可能是世界上常用的一种鉴别培养基，它主要通过乳糖发酵鉴别肠道致病菌，还能抑制革兰氏阳性菌生长，发酵乳糖的细菌能使培养基变红，这是因为细菌发酵乳糖产酸而使培养基的PH值变成酸性的。不发酵乳糖的细菌没有颜色的变化。

麦康凯抑制阳性菌的生长，是因为其中加了结晶紫。 MACCONKEY AGAR

MacConkey agar is probably the most popular solid differential medium in the world. It is mainly used in identification of lactose fermenting, Gram-negative enteric pathogens and for inhibiting growth of Gram-positive organisms. Bacterial colonies that can ferment lactose turn the medium red. This red color is due to the pH indicators response to the acidic environment cre