植物组织MDA含量的测定

植物组织MDA含量测定

一、目的要求

1．掌握植物组织MDA含量测定的原理及具体测量步骤；

2．深化理解MDA与逆境和衰老的关系，理解植物组织MDA含量测定的意义； 3．了解膜脂过氧化、氧自由基和MDA形成的关系；

4．能够根据待测材料的具体情况设计实验步骤测定MDA含量； 5．学习分光光度计，低温离心机等仪器的使用方法。

二、实验原理

植物遭受逆境胁迫或衰老时，体内会发生一系列生理生化变化，如核酸和蛋白质含量下降、叶绿素降解、光合作用降低，活性氧平衡失调及内源激素平衡失调等。活性氧代谢失调直接导致植物体内活性氧的大量积累，从而引发或加剧膜脂过氧化作用，造成细胞膜系统的损伤，严重时会导致植物细胞死亡。

膜脂过氧化的产物有二烯轭合物、脂类过氧化物、丙二醛、乙烷等。其中丙二醛（Malondialdehyde，MDA）是膜脂过氧化最重要的产物之一，它的产生还能加剧膜的损伤。因此在植物衰老生理和抗性生理研究中，MDA含量是一个常用指标，可通过测定MDA了解膜脂过氧化的程度，以间接测定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。

MDA在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸（TBA）反应，产生红棕色的产物3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮（Trimet—nine）

实验设计（一）

题目：植物组织内丙二醛（MDA）含量的测定——比色法 组数：第七组 组长：杨曼 学校：南通大学 年级：13级 专业：生物工程131

实验目的

1，根据待测植物的抗逆生理，掌握对待测植物做逆境处

理的方法

2，比较同种胁迫逆境处理对待测植物不同部位生长的影响

3，比较不同胁迫逆境处理对待测植物生长的影响 4，了解植物组织内MDA积累水平对植物生理状态的影响

5，掌握比色法测定植物组织内MDA含量的方法和步骤

实验原理

1，植物抗逆是植物对抗不良环境，比如抗旱、抗盐碱、抗涝、抗风、抗冻、抗病虫害等的能力.

在自然界条件下，由于不同的地理位置和气候条件以及人类活动等多方面原因，造成了各种不良环境，超出了植物正常生长、发育所能忍受的范围，致使植物受到伤害甚至死

亡。这些对植物产生伤害的环境称为逆境（stress）或胁迫。而植物对不良环境的适应性和抵抗力为抗逆性（stress resistance）或抗性.

逆境的种类多种多样，包括物理的、化学的、生物因素等，可分为生物逆境和非生物逆境两大类。对植物产生重要影响的非生物逆境主要有水分（干旱和淹涝）、温度（高、低温）、盐碱、

植物组织中丙二醛含量的测定

一、原理

植物器官衰老或在逆境下遭受伤害，往往发生膜脂过氧化作用，丙二醛(malondialdehydeMDA)是膜脂过氧化作用的产物之一，其含量可以反映植物遭受逆境伤害的程度。

丙二醛在酸性和高温条件，可以与硫代巴比妥酸(TBA)反应,形成在532nm波长处有最大光吸收的有色三甲基复合物，该复合物的吸光系数为155????????/(??·????)，并且在600nm处有最小光吸收。可按公式：

??532－??600=155000×??×??①

算出MDA浓度??(????????/??)，进一步算出单位质量组织中 MDA 含量(????????/??)。式中A532和A600分别表示532nm和600nm处的吸光度值。??为比色杯厚度(???? )。

需要指出的是，植物组织中糖类物质对MDA-TBA反应有干扰作用。为消除这种干扰，经试验，可用下列公式消除由蔗糖引起的误差。

??(????????/??)=6.45(??532－??600)?0.56??450 ②

式中： A450、A532和A600分别表示450nm、532nm 和600nm波长下的吸光度值。用公式②算出植物样品提取液中MDA的浓度后

植物中抗坏血酸含量测定

学 校 院 系 专 业 姓 名 学 号 指导教师

吉首大学 生物资源与环境科学学院 生物工程 向丰标 20144074032 李朝阳

植物中抗坏血酸含量测定

摘要：维生素C又称为抗坏血酸，一般水果,蔬菜中维生素C的含量均较高，不同的水果，蔬菜品种，以及同一种在不同栽培条件，不同成熟等情况下，其维生素C的含量都有所不同。维生素C的含量可以作为果蔬品质的衡量指标之一。而且高温会破坏维生素C的活性，会使维生素C丧失一部分。维生素C是人体不可缺少的物质，每天人体从外界摄取的维生素C的量为50~100毫克，如果人体长期缺少维生素C的补充，将引起坏血症。维生素C对人体的抵抗力、免疫力的功效都有相当重要的作用。 关键词：维生素C 维生素C含量 坏血病 高温

引言

维生素C又称抗坏血酸，一般水果、蔬菜中维生素C的含量均较高，不同的水果、蔬菜品种，以及同种在不同条件、不同成熟度等情况下，其维生素C的含量都有所不同。因此，维生素C的含量

丙二醛MDA、总抗氧化能力、超氧化物歧化酶（SOD）的

测定

丙二醛MDA测定

测试所需仪器设备：

可见光分光光度计，可调到95℃左右的恒温水浴箱（或者铝锅内放几个去掉盖子的易拉罐，将罐壁及底部穿数十个孔，以便水的进入，用来代替水浴箱）。离心机。

100Ｔ试剂盒组成与配制：

试剂一：液体20mL*1瓶，室温保存．（天冷时会凝固，每次测试前

适当水浴加温以加速溶解，直至透明方可应用）。

试剂二：液体12mL*1瓶，用时每瓶加340mL双蒸水混匀，4℃冷藏。 试剂三：粉剂*1支，4℃冷藏。

1. 按规范操作方法来配制MDA3号试剂：将1支100Ｔ的MDA3号粉剂倒入烧杯内加90℃～100℃的热蒸馏水64mL,充分溶解（溶解过程中可适当加热）。冷却后加冰醋酸60mL混匀。 2. 再将上述配好的MDA3号试剂用50％冰醋酸按2：1进行稀释，用多少配多少。

例如您需要用微量法测MDA需要试剂三为15mL，则可以取上述按规范操作法配好的试剂三10mL加冰醋酸5mL，混匀即可。配好的试剂避光4℃冰箱冷藏（冰醋酸自备）

注：因蒸馏水热胀冷缩，加热过程要蒸发，本应加60mL现多加4mL，冷却后在60mL。

50％冰醋酸的配制是50mL双蒸水加50mL冰醋酸

实验一 植物组织水势的测定（小液流法）

1、实验目的

了解植物组织中水分状况的一种表示方法及用于测定的方法及其优缺点。 2、实验原理

植物组织的水分状况可用水势来表示。植物体细胞之间、组织之间以及植物体与环境之间的水分移动方向都由水势差决定。将植物组织放在已知水势的一系列溶液中，如果植物组织的水势（Ψcell）小于某一溶液的水势（Ψout），则组织吸水，反之组织失水。若两者相等，水分交换保持动态平衡。组织的吸水或失水会使溶液的浓度、密度、电导率以及组织本身的体积与质量发生变化。根据这些参数的变化情况可确定与植物组织等水势的溶液。

液体交换法测定水势的方法有很多种，本实验练习用小液流法测定植物组织的水势，并初步观察其变化情况。

小液流法测定水势的原理

判据 △Ψ=Ψout-Ψcell

△Ψ>0 △Ψ<0 △Ψ=0 使用器材 适用的材料

3、仪器和试剂

试管，试管架，移液管，滴管，打孔机或单面刀片，镊子，解剖针，棉花，吸水纸； 0.05-0.4mol/L CaCl2溶液，甲烯蓝； 土豆 4、实验步骤

①将16支试管清洗干净，分为两组（实验组和对照组）按编号顺序倒置于试管架上，控净水分。

②配制一系列不同浓度的氯化钙溶液（0.05、0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.35

茶多酚的含量测定

高锰酸钾直接滴定法

目的：掌握高锰酸钾直接滴定法测定茶叶中茶多酚含量的原理及操作 原理

茶叶中茶多酚易溶于热水，在用靛红作指示剂的情况下，样液中能被高锰酸钾氧化的物质基本上都属于茶多酚物质。根据消耗1mL 0.318g/mL的高锰酸钾相当于5.82mg茶多酚的换算系数，可计算茶多酚的含量。

仪器与试剂

仪器：分析天平、电动磁力搅拌器、电热水浴锅、500mL白瓷皿。 试剂：

1、0.1%靛红溶液：称取靛红1g加入少量水搅匀后，再慢慢加入相对密度为1.84的浓硫酸50mL，冷却后用蒸馏水定容至1000mL，如果靛红不纯，可下法磺化处理是：称取靛红1g，加浓硫酸50mL，在80℃烘箱或水浴中加热磺化4~6h，用蒸馏水定容至1000mL，过滤后贮于棕色瓶中。 2、0.630%草酸溶液：准确称取草酸6.3034g，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。

3、高锰酸钾标准溶液：称取AR的高锰酸钾1.27g，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。准确吸取0.630%草酸溶液10mL，放入250ml锥形瓶中（平行3份），加入蒸馏水50mL，再加入相对密度为1.84的浓硫酸10mL，摇匀，在70~80℃水浴中保温5分钟，取出后用高锰酸钾进行滴定。开始

叶绿素含量的测定

一、 实验目的

1. 了解分光光度计的工作原理； 2. 掌握不同型号分光光度计的操作方计；

3. 通过本实验的学习掌握叶绿素含量测定的一种常见的方法------分光光度

法。

二、 实验原理

叶绿素是脂溶性色素，主要存在于以叶绿体为首的色素体中。在活体中，叶绿素与脂蛋白结合并受到还原系统的保护，对氧和光是稳定的。

叶绿素的80%丙酮提取液在波长663nm，645nm有吸收峰，叶绿素a和叶绿素b的浓度符合以下公式：

Ca=0.0127A663-0.00259A645

Cb=0.0229A645-0.00467A663 浓度单位是：g/L

Ca=12.7A663-2.59A645

Cb=22.9A645-4.67A663 浓度单位是：mg/L

叶绿素总浓度为： CT=Ca+Cb 若以试液中色素含量来表示，则

C(mg/L)?提取液总体积(ml)叶绿素含量（mg/g鲜样）?

样品重(g)?1000

三、 仪器、试剂和材料 1. 仪器

紫外-可见分光光度计、研体、25ml容量瓶、玻璃漏斗、玻璃棒、皮头滴管 2. 试剂

丙酮（分析纯）、85%丙酮、

茶多酚的含量测定

高锰酸钾直接滴定法

目的：掌握高锰酸钾直接滴定法测定茶叶中茶多酚含量的原理及操作 原理

茶叶中茶多酚易溶于热水，在用靛红作指示剂的情况下，样液中能被高锰酸钾氧化的物质基本上都属于茶多酚物质。根据消耗1mL 0.318g/mL的高锰酸钾相当于5.82mg茶多酚的换算系数，可计算茶多酚的含量。

仪器与试剂

仪器：分析天平、电动磁力搅拌器、电热水浴锅、500mL白瓷皿。 试剂：

1、0.1%靛红溶液：称取靛红1g加入少量水搅匀后，再慢慢加入相对密度为1.84的浓硫酸50mL，冷却后用蒸馏水定容至1000mL，如果靛红不纯，可下法磺化处理是：称取靛红1g，加浓硫酸50mL，在80℃烘箱或水浴中加热磺化4~6h，用蒸馏水定容至1000mL，过滤后贮于棕色瓶中。 2、0.630%草酸溶液：准确称取草酸6.3034g，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。

3、高锰酸钾标准溶液：称取AR的高锰酸钾1.27g，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。准确吸取0.630%草酸溶液10mL，放入250ml锥形瓶中（平行3份），加入蒸馏水50mL，再加入相对密度为1.84的浓硫酸10mL，摇匀，在70~80℃水浴中保温5分钟，取出后用高锰酸钾进行滴定。开始

-相当于标示量%的计算公式

片剂：V×F×T/W×平均片重/标示量×100% 针剂： V×F×T/W/标示量（g/ml） ×100%

-以重量/片计的计算公式：V×F×T/W×平均片重=重量/片 例1

司可巴比妥钠胶囊含量测定：精密称取内容物0.1385g，置碘量瓶中，加水10mL，振摇使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25 mL，再加盐酸5 mL，立即密塞并振摇1分钟，暗处静置15分钟后，加碘化钾试液10 mL，立即密塞，摇匀，用硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L，F=0.992）滴定，至近终点时加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正。已知：样品消耗硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）17.05 mL，空白试验消耗25.22mL，每1mL溴滴定液（0.05mol/L）相当于13.01mg的司可巴比妥钠。计算本品相当于标示量的百分含量（规格0.1g，20粒胶囊内容物重2.7506 g）？ (p.90－生成物滴定法) 司可巴比妥钠的滴定度计算 HHNaONaOOBrBrONN CH2CH2+Br2 (过量定量)NN OOCH3CH3CH3CH3 2KBr+I2Br2+2KI (剩余) 2NaI+Na2s4o