抗磷脂酶A2受体抗体检测

火腿中肌肉磷脂酶的纯化其性质研究

国外一些研究者认为，在干腌火腿生产过程中，中性脂肪变化很小，而磷脂是脂肪水解的主要底物。我们对发酵干火腿加工过程中的脂肪水解状况进行了分析，也证实了这一观点，因此磷脂水解酶成为了研究干腌火腿脂肪水解机理的关键。

本研究利用阴、阳离子交换、亲和层析等多种纯化手段相结合获得了2种电泳纯的磷脂水解酶。由于某些脂酶也具有水解磷脂的能力，我们首先需要弄清楚本研究中以磷脂为底物获得的磷脂水解酶是属于脂酶还是磷脂酶？如果是磷脂酶，和已从其它组织中纯化出来的磷脂酶有什么关系？另外，腌制剂、加工工艺条件等对该酶活有什么影响？为此，本研究对已纯化的磷脂水解酶的基本性质进行了鉴定，旨在为发酵干火腿生产过程中与脂肪水解氧化等有关的风味化合物的产生机理及其控制提供技术参考。

1 材料与方法

1.1 磷脂水解酶的分离

按汪家政等（2002）方法进行。 1.2 磷脂水解酶活性的测定

用同位素标记底物法对纯化的酶活进行测定 具体操作流程：

0.2 ml 粗酶液 + 5 μl磷脂底物

反应（37℃, 20分钟）

冰浴并向反应体系中加入2 ml甲苯、三氯甲烷和甲醇的混合物

（1:0.5:1.2

磷脂综合症相关抗体检测（抗心磷脂；抗β2糖蛋白I）

检验科免疫室

抗心磷脂抗体（AC L），抗β2糖蛋白I抗体（Anti-β2GPI）等自身抗体与机体心脑血管、下肢深静脉、肾静脉、视网膜静脉以及胎盘等部位血栓的发生密切相关，抗β2GPI抗体是和血栓形成相关性最强的抗体并且偏向与静脉血栓相关，而ACL偏向与动脉血栓相关。

本室开展 ACL-IgG ACL-IgM ACL-IgA

β2GP I-IgG

β2GP I-IgM 等项目，适用于对以下疾病的诊断或监测：

1 抗磷脂抗体综合征（APS） 表现为反复的动脉、静脉血栓、习惯性流产和血小板减少症等症状，多见于中年女性患者。

2 系统性红斑狼疮 SLE患者抗磷脂抗体阳性者更易发生高血压、神经系统症状和肾炎，医生需定期筛查其抗磷脂抗体水平，若发现持续阳性状态，则建议预防性服用羟化氯喹和低剂量阿司匹林。对于无SLE和血栓病史的，若抗磷脂抗体阳性同时还存在其他血栓高危因素，则建议长期服用低剂量阿司匹林以预防血栓的发生。

3 脑梗塞 抗磷脂抗体的存在除了与偏头痛、休克、短暂性脑缺血等症状相关外，ACL等抗体

具有抗炎、抗过敏活性磷脂酶

抑制剂的研究进展*

王 寅 朱再明

(辽宁师范大学化学系 大连 116029)

刘 彦

(大连医科大学生化教研室 大连 116027)

摘 要 磷脂酶参与细胞跨膜信息传递，磷脂酶A2还是机体炎症、过敏介质产生的关键酶。因此，磷脂酶抑制剂的合成研究对研究细胞表达某种功能的信息传递机制及与磷脂酶A2激活相关的疾病治疗机制和药物研究具有重要意义。本文主要综述了近期有关磷脂酶A2抑制剂的合成、结构、抑效性能、构效关系及应用前景等,对磷脂酶C和磷脂酶D的抑制剂作了简要介绍。

关键词 磷脂酶A2 磷脂酶C 磷脂酶D 磷脂酶抑制剂

Recent Advances in Phospholipase Inhibitors

Wang Yin Zhu Zaiming

(Department of Chemistry, Liaoning Normal University, Dalian 116029,

China) Liu Yan

（Department of Biochemistry， Dalian Medical University, Dalian 116027,

China) Abstract Phospholipase A2,

几种常用的抗体检测方法

(1)免疫酶技术

免疫酶技术是将抗原抗体反应的特异性和酶对底物显色反应的高效催化作用有机结合而成的免疫学技术。由于它特异性强，灵敏度高，现已广泛用于筛选和鉴定单抗。 A、器材和试剂 a. 包被缓冲液：

碳酸盐缓冲液：取0.2mol/L Na2CO3 8ml，0.2mol/L NaHCO3 17ml混合，再加75ml蒸馏水，调PH至9.6。

Tris-HCl缓冲液（PH8.0，0.02mol/L）：取0.1mol/L Tris 100ml，0.1mol/L HCl 58.4ml混合，加蒸馏水至1000ml。

b. 洗涤缓冲液（PH7.2的PBS）：KH2PO4 0.2g，KCl 0.2g，Na2HPO4&S226;12H2O 2.9g，NaCl 8.0g，Tween-20 0.5ml，加蒸馏水至1000ml。

c. 稀释液和封闭液：牛血清白蛋白（BSA）0.1g，加洗涤液至100ml；或用洗涤液将小牛血清配成5-10%使用。

d. 酶反应终止液（2mol/L H2SO4）：取蒸馏水178.3ml，滴加浓硫酸（98%）21.7ml。 e. 底物缓冲液（PH5.0，磷酸盐-柠檬酸缓冲液）：取0.2mol/L Na2HPO4

1. 自身抗体

（1） 检验项目：抗核抗体(ANA)、抗平滑肌抗体(ASMA)、抗线粒体抗体(AMA)

（2） 标本采集：3ml 新鲜血于无抗凝管（红色）;可与特定蛋白检测合抽一管血，共3ml。

（3） 检验方法：间接免疫荧光法

（4） 仪器：荧光显微镜NIKON--50i

（5） 试剂：欧蒙试剂

（6） 临床意义：

ANA：对自身免疫病有重要诊断价值。如SLE、硬质病、类风关、干燥综合症等疾病，滴度大都在>1:100，而活动性SLE 阳性率几乎100%。抗核抗体阳性的疾病有：结缔组织病，如皮肌炎、盘状红斑狼疮；消化道疾病，如慢活肝、溃疡性结肠炎；造血系统病，如巨球蛋白血症、淋巴瘤、恶性贫血等。其它疾病，如药物反应、淋巴细胞性甲状腺炎、恶性肿瘤、结核菌、血管炎、重症肌无力等。但这些疾病滴度往往过低。我院大都是肝炎病人，起始滴度为1：100。如果发现阳性病人，则会作进一步的稀释试验。正常的老年人约有2-4%者呈低滴度阳性。

AMA：在慢性肝炎、肝硬化病人，可有30%阳性率；在原发性胆汁性肝硬变，可有90%阳性；正常人无此抗体。

ASMA：此抗体为非特异性抗体。当肝炎病人肝细胞严重损害时，肝细胞胞浆中，肌球蛋白和肌纤维收缩蛋白，释放到血液中产生抗体。抗平滑肌

一、抗核抗体

抗核抗体（antinuclearantibodies，ANA）泛指抗各种核成分的抗体，是一种广泛存在的自身抗体。ANA的性质主要是IgG，也有IgM和IgA，甚至IgD和IgE。ANA可以与不同来源的细胞核起反应，无器官特异性和种属特异性。ANA主要存在于血清中，也可存在于其他体液如滑膜液、胸水和尿液中。

ANA在SIE患者的滴度较高，但也出现在其他许多自身免疫病中，在许多研究报告中，都将检出ANA作为自身免疫甚至自身免疫病存在的依据。这种现象的机制尚未明了，有待于进一步研究。（一）ANA的类型及意义

由于细胞核成分的复杂性，不同成分的抗原性也不同；因此就会有多种不同的ANA。

1．抗核蛋白抗体核蛋白抗原（DNP）由DNA和组蛋白组成。由于DNP抗原存在不溶性和可溶性两个部分，可分别产生相应的抗体。不溶性DNP抗体通常不完全被DNA和组蛋白所吸收，它是形成狼疮细胞的因子；可溶性抗原存在于各种关节炎病人的滑膜液中，其相应抗体也出现于RA病人的滑膜液中。

2．抗DNA抗体可以分为两大类：①抗天然DNA（nDNA）抗体，或称抗双链DNA（dsDNA）抗体；②抗变性DNA抗体，或称抗单链DNA（ssDNA）抗体。抗dsDNA抗体对SLE有较高的特

红细胞血型不规则抗体是导致免疫性溶血性输血反应、新生儿溶血病、自身免疫性溶血性贫血等的原因,平常多在ABO正反定型不符、交叉配血异常、新生儿溶血、溶血性贫血时经血型血清学试验被发现。对以往的不规则抗体检测情况进行分析,可以大致了解本地区人群中的不规则抗体分布特点,为今后的血型血清学和输血工作提供帮助与参考。

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中国实验诊断学

20年 5 07月第 l卷 1

第5期

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[] 5孙

芾，林

宏，王厚芳，呼吸系统感染性疾病快速诊断技术等.

[] 6赵林清，渊，钱王之棵， .等呼吸道合胞病毒检测方法比较[] J.临床儿科杂志， O,1 1: . 2 32 () 2 O 3

的应用[]现代检验医学杂志， 0,94: . J. 2 41()1 0 3

(收稿日期：06 8 0 20—0—1)文章编号：07 2720 )一08—0 10—4 8(Of 7 63 2

红细胞血型不规则抗体检测结果分析关亮，郑朝晖(台州市中心血站，浙江台州 380) 1 0 0

红细胞血型不规则抗体是导致免疫性溶血性输

13操作方法 .

盐水法、球蛋白法、抗吸收放散试

血反应、新生儿溶血病、自身免疫性溶血性贫血等的原因

慢性荨麻疹患者甲状腺自身抗体检测及自体血清皮肤试验的意义 胡小平1 ,谢谦2 ,于波1 ,邵勇1，张杰1，钟绮丽1 ,马刚1

（1 北京大学深圳医院皮肤科；2 北京大学深圳医院内分泌科广东深圳 518036）

[摘要] 目的:通过检测指标分析慢性荨麻疹和甲状腺功能亢进的关系，探讨甲状腺自身抗体在慢性荨麻疹发病中的作用和自体皮肤血清试验的意义。方法:研究对象包括100例慢性荨麻疹患者，68例甲亢合并慢性荨麻疹患者，60例甲状腺功能亢进患者和60例健康人群，回顾性分析四组患者的临床资料，检测游离甲状腺素（FT3、FT4）、高敏促甲状腺素（sTSH），甲状腺自身抗体（TGAb、TPOAb、TRAb），并进行自体血清皮肤试验（ASST），比较各组指标间的差异性。结果:慢性荨麻疹组TGAb、TPOAb、TRAb和ASST阳性率均显著高于对照组；甲亢合并慢性荨麻疹组TGAb、TPOAb、TRAb阳性率均显著高于慢性荨麻疹组，两组ASST阳性率有显著性差异；甲亢组TGAb、TPOAb阳性率和甲亢合并慢性荨麻疹组差异无显著性，TRAb和ASST阳性率有显著性差异；慢性荨麻疹组sTSH水平和对照组有显著性差异。结论:甲状腺自身抗体在慢性荨麻疹发病中可能起一定

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浅谈抗核抗体谱检测的临床意义

作者：陈琳 杜国梅

来源：《维吾尔医药》2013年第08期

摘要：自身抗体 抗核抗体 抗核抗体谱 抗DNA抗体 抗组蛋白抗体 抗非组蛋白 抗体 抗核仁抗体

自身抗体是指抗自身组织，器官、细胞及细胞成分的抗体。人体的生长、发育和生存有完整的自身免疫耐受机制的维持，正常的免疫反应有保护性防御作用，即对自身组织、成分不发生反应。—旦自身耐受的完整性遭到破坏，则机体视自身组织、成分为“异物”，而发生自身免疫反应，产生自身抗体。正常人体血液中可以有低滴度的自身抗体，但不会发生疾病，但如果自身抗体的滴度超过某—水平，就可能对身体产生损伤，诱发疾病。 抗细胞内抗原的抗体包括：

1、抗细胞核成分的抗体（抗核抗体）。

2、抗细胞浆内成分的抗体（抗中性粒细胞及其他细胞胞浆抗体、抗线粒体抗体、抗核糖体抗体等）。

3、抗细胞表面抗原的抗体。

抗核抗体（antinuclear antibody，ANA）：又称抗核酸抗原抗体，是一组将自身真核细胞的各种成分

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研究报告

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摘要关键词

抗!"#$嵌合抗体的表达与活性检测

师明磊胡显文#陈惠鹏高丽华李世崇

（军事医学科学院生物工程研究所

北京

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表达了基因重组抗$%&"嵌合抗体并对其生物学活性进行了初步鉴定。设计合成轻、重链

可变区序列；提取血液’()，通过’*+,$’得到人!、重链恒定区序列。运用重叠延伸-./!的轻、连接可变区与恒定区，将轻、重链基因连接至0-’12双表达载体。将质粒以阳离子脂质体转,$’，

共获得#株表达较高的克隆，表达量约为&6.75。扩大培养阳染$34细胞，15-2)挑选阳性克隆，性克隆89:;+$%&"+!<=，收获上清，以蛋白)进行亲和层析纯化表达蛋白。2%2+,)/1检测表明纯

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