ptio自由基清除法

DPPH法测定黄芩黄酮的抗氧化活性

抗氧化就是任何以低浓度存在就能有效抑制自由基的氧化反应的物质，其作用机理可以是直接作用在自由基，或是间接消耗掉容易生成自由基的物质，防止发生进一步反应。

目前对自由基清除剂的研究方法主要有2类，一类是体外模型，另一类是体内模型，其中DPPH法是体外模型中最常用的方法。

DPPH又称1,1-二苯基-2-三硝基苯肼，是一种很稳定的氮中心的自由基，他的稳定性主要来自共振稳定作用的3个苯环的空间障碍，使夹在中间的氮原子上不成对的电子不能发挥其应有的电子成对作用。它的无水乙醇溶液呈紫色，在517nm波长处有最大吸收，吸光度与浓度呈线性关系。。向其中加入自由基清除剂时，可以结合或替代DPPH·，使自由基数量减少，吸光度变小，溶液颜色变浅，借此可评价清除自由基的能力。即通过在517nm波长处检测样品清除DPPH·的效果，来计算抗氧化能力。

实验研究表明，黄芩黄酮中清除DPPH自由基活性的主要成分是黄芩苷[1]，黄芩苷中含有羧羟基和酚羟基能与DPPH反应，反应式如下：

O2NNN+O2NNO2H+NNHO2NDPPH与抗氧化剂反应原理

NO2

O2N

材料：DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）；无水乙醇； 仪器：分光

PTIO自由基清除：一个新颖而简单的体外抗氧化分析法

李熙灿（广州中医药大学，2017.10）

目前的体外抗氧化分析方法有数个局限性，经常导致不一致的结果。本研究通过使用PTIO自由基，建立了一种新的抗氧化实验。

经各种因素的调查后，实验方案的简述如下：在PTIO·和样品溶液中分别加入磷酸盐缓冲液（pH 7.4，50mM），分别在37°C 温育2小时，然后用分光光度法在557 nm处测定。基于20个纯化合物和30个冻干水提物的结果表明，PTIO·清除有良好的线性关系，稳定性和重现性。UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS分析提示，PTIO·遇到L-抗坏血酸时给出m/z 234。因此, 作为一种抗氧化分析法，PTIO·清除具有四种优点:（1）以氧为中心的自由基为自由基模型；（2）以生理缓冲液为溶液；（3）测量简单且直接；（4）干扰小。

它不仅可以用于评价氧化活性，还可以用于构效关系的分析。PTIO·清除过程，没有立体选择性，并且至少只涉及H +转移。

[参考文献]

Xican Li. 2-Phenyl-4,4,5,5-tetramethylimidazoline-1-oxyl 3?Oxide (PTIO?) Radical Scavengin

水杨酸法测定黄酮对羟自由基清除能力的实验

一、实验原理

利用 Fenton 反应产生羟自由基：H2O2+Fe2+ =·OH+H2O+Fe3+在反应体系中加入水杨酸，Fenton 反应生成的羟自由基与水杨酸反应，生成于 510 nm 处有特殊吸收的 2,3- 二羟基苯甲酸，反应式如下：如果向反应体系中加入具有清除羟自由基功能的被测物，就会减少生成的羟自由基，从而使有色化合物的生成量相应减少。采用固定反应时间法， 在 510 nm 处测量含被测物反应液的吸光度，并与空白液比较，以测定被测物对羟自由基的清除作用。

其清除率计算公式为：羟自由基清除率(%)=A0－(Ax－Ax0) /A0·100

其中 A0 为空白对照的吸光值， Ax 为加样品的吸光值， Ax0 为不加显色剂 H2O2

二、实验步骤

各溶液的加入量按照表 1 所示，在比色管中依次先加入 9 mmol / L FeSO4， 9 mmol / L 乙醇 - 水杨酸，接着加入适量去离子水，最后加入 8.8 mmol / LH2O2 后摇匀，37℃水浴加热 15 min 后取出，测其吸光度 A0。A0 测定时，参比溶液为不加双氧水的体系。 按上述方法，加入表 1 所示的各溶液，来测

自由基的来源

(关键词：自由基的来源；电子转移；氧化还原；放射线照射；过氧化物；生物体；活性氧；氧的毒性；生成性质；超氧化物自由基；超氧化物歧化酶；维生素C；过氧化氢；过氧化氢酶；谷胱甘肽过氧化物酶；过氧化脂类；单线态分子氧；氢氧自由基 ) 第二节 自由基的来源 一、概念

大多数化学键由双电子形成。这种键断裂时有二种可能：一种是异裂反应，成键的两个电子分给两种分裂产物之一，生成物为离子。另一种是均裂反应，两个电子均分给两个产物，此过程中产生的分裂物称为自由基（free-radical），在溶液中呈均一状态。自由基是指分子、原子或基团中有未配对电子的一类物质，如下述反应中的A·和B·，还有NO、NO2、I·及Na·等均具有未配对电子。绝大多数自由基寿命短，生成后不稳定，易被周围环境吸收。在化学反应机理的研究中，发现自由基参与的反应占相当大比例。

二、自由基的来源

机体在代谢中不断地产生自由基，在酶催化的电子转移及氧化还原反应中，有许多自由基中间体参与；某些药物在体内以自由基中间体的活性形式发挥作用；在光化学反应及放射中多以自由基发挥作用。生物体的自由基可通过下面几种方式产生。 （一）放射线照射

放射性可直接或间接地对生物体发生作用，α-射线

自由基的来源

(关键词：自由基的来源；电子转移；氧化还原；放射线照射；过氧化物；生物体；活性氧；氧的毒性；生成性质；超氧化物自由基；超氧化物歧化酶；维生素C；过氧化氢；过氧化氢酶；谷胱甘肽过氧化物酶；过氧化脂类；单线态分子氧；氢氧自由基 ) 第二节 自由基的来源 一、概念

大多数化学键由双电子形成。这种键断裂时有二种可能：一种是异裂反应，成键的两个电子分给两种分裂产物之一，生成物为离子。另一种是均裂反应，两个电子均分给两个产物，此过程中产生的分裂物称为自由基（free-radical），在溶液中呈均一状态。自由基是指分子、原子或基团中有未配对电子的一类物质，如下述反应中的A·和B·，还有NO、NO2、I·及Na·等均具有未配对电子。绝大多数自由基寿命短，生成后不稳定，易被周围环境吸收。在化学反应机理的研究中，发现自由基参与的反应占相当大比例。

二、自由基的来源

机体在代谢中不断地产生自由基，在酶催化的电子转移及氧化还原反应中，有许多自由基中间体参与；某些药物在体内以自由基中间体的活性形式发挥作用；在光化学反应及放射中多以自由基发挥作用。生物体的自由基可通过下面几种方式产生。 （一）放射线照射

放射性可直接或间接地对生物体发生作用，α-射线

DPPH自由基清除法

李熙灿/Xican Li （广州中医药大学）

[文献] Xican Li, Jing Lin, Yaoxiang Gao, Weijuang Han, Dongfeng Chen. Antioxidant activity and mechanism of Rhizoma Cimicifugae. Chemistry Central Journal. 2012; 6(1):140.

[原理] DPPH（1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical）即1,1-二苯基-2-苦基肼基自由基。分子中，由于存在多个吸电子的-NO2和苯环的大π键，所以，氮自由基能稳定存在。

O2NNNO2NNO2

当DPPH自由基被清除，其最大吸收波长519nm处的吸光度A值随之减小。DPPH这种稳定的自由基为清除自由基活性的检测提供了一个理想而又简单的药理模型。 [实验步骤]

1.1 DPPH测试液的配制

取DPPH 1mg溶于约20mL溶剂（乙醇、95乙醇或甲醇）中，超声5min，充分振摇，务使上下各部分均匀。取1mL 该DPPH溶液，在519nm处测A值，使A＝1.2-1.3之间最佳。该DPPH溶液最好避光保存

自由基聚合引发剂

百科名片

偶氮二异丁腈结构简式

自由基引发剂，简称引发剂。指一类容易受热分解成自由基（即初级自由基）的化合物，可用于引发烯类、双烯类单体的自由基聚合和共聚合反应，也可用于不饱和聚酯的交联固化和高分子交联反应。自由基聚合是研究最早、工业化应用最广泛的聚合反应。与其他聚合历程相比，自由基聚合具有单体来源广泛、工艺简单、价格低廉、产品丰富的特点，因而一直受到人们的重视。自由基聚合的不足在于对聚合物相对分子质量、分子质量分布、序列结构、立体结构的控制不如其他聚合历程理想。 目录

自由基聚合引发剂的分类 偶氮化合物类引发剂介绍 过氧化物引发剂介绍 自由基复合引发体系介绍 自由基引发剂研究进展 自由基聚合引发剂的分类 偶氮化合物类引发剂介绍 过氧化物引发剂介绍 自由基复合引发体系介绍 自由基引发剂研究进展 展开 编辑本段 自由基聚合引发剂的分类 自由基引发剂（initiators for free radical polymerization）的分类，有多种分类方法，按引发剂的分子结构，可以分为偶氮类、过氧类和氧化还原类。也可以按照其溶解性能分为水溶性引发剂（如无机类的过硫酸盐、过氧化氢、水溶偶氮引发剂等）和

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~

吾尝终日而思矣，不如须臾之所学也；吾尝而望矣，不如登高之博见也。

－－《荀子·劝学》

自由基的来源

(关键词：自由基的来源；电子转移；氧化还原；放射线照射；过氧化物；生物体；活性氧；氧的毒性；生成性质；超氧化物自由基；超氧化物歧化酶；维生素C；过氧化氢；过氧化氢酶；谷胱甘肽过氧化物酶；过氧化脂类；单线态分子氧；氢氧自由基 )

第二节

自由基的来源

一、概念

大多数化学键由双电子形成。这种键断裂时有二种可能：一种是异裂反应，成键的两个电子分给两种分裂产物之一，生成物为离子。另一种是均裂反应，两个电子均分给两个产物，此过程中产生的分裂物称为自由基（free-radical），在溶液中呈均一状态。自由基是指分子、原子或基团中有未配对电子的一类物质，如下述反应中的A·和B·，还有NO、NO2、I·及Na·等均具有未配对电子。绝大多数自由基寿命短，生成后不稳定，易被周围环境吸收。在化学反应机理的研究中，发现自由基参与的反应占相当大比例。

二、自由基的来源

机体在代谢中不断地产生自由基，在酶催化的电子转移及氧化还原反应中，有许多自由基中间体参与；某些药物在体内以自由基中间体的活性形式发挥作用；在光化学反应及放射中多以自由基发挥作用。生物体的

第16卷 第3期

1998年8月辐射研究与辐射工艺学报J.Radiat.Res.Radiat.Proces.Vol.16,No.3August1998

羟基肉桂酸衍生物清除超氧阴离子

自由基研究

钱素平 张加山 姚思德 王文锋 林念芸

(中国科学院上海原子核研究所辐射化学开放实验室 上海201800)

摘要 采用脉冲辐解技术,利用竞争动力学方法测定了中性条件下3种羟基肉桂酸衍生物(咖啡酸、阿魏酸和芥子酸)与超氧阴离子自由基的反应速率常数,结合稳态分析,探讨了相应的反应机理。

关键词 羟基肉桂酸衍生物,脉冲辐解,竞争动力学,产物分析,超氧阴离子自由基

自由基生物学和自由基医学研究表明,人体内产生的过剩氧自由基是造成心脑血管疾病、生物组织癌变及衰老的主要原因之一。羟基肉桂酸衍生物(HCAD)是一类从中草药中提取的天然抗氧化剂。研究发现,它是一种辐射保护剂,可有效清除羟基自由基,并可通过电荷转移反应快速修复DNA氧化性羟基加成自由基[1,2]。本文分别用苯醌和四硝基甲烷与羟基肉桂酸衍生物竞争超氧阴离子自由基的竞争动力学方法,获得了超氧阴离子自由基和羟基肉桂酸衍生物(芥子酸、咖啡酸和阿魏酸)的反应速率常数。结合反应产物的紫外分光光度分析和高效

自由基生物学简史

已有1188 次阅读 2014-6-24 07:47 |个人分类:自由基简史|系统分类:科普集锦

一、从化学到生物学

1900年，俄裔学者有机化学教授Gomberg在密歇根大学博士后工作期间，证明了三苯甲基自由基能稳定存在，奠定了自由基化学的基础。也是人类第一次知道，自由基是可以独立存在的物质形式之一。但是发现自由基和生物之间也存在关系要等待半个世纪。

20世纪最伟大的科学进展主要是在物理学领域，尤其是量子力学和相对论的提出，称为20世纪科学史的标志。在20世纪初，伦琴发现的X射线是一个传奇，给随后的物理和化学研究带来重要影响。

X射线是波长介于紫外线和γ射线间的电磁辐射。X射线是一种波长很短的电磁辐射，其波长约为0.01~10nm之间。由德国物理学家W.K.伦琴于1895年发现，故又称伦琴射线。伦琴射线具有很高的穿透本领，能透过许多对可见光不透明的物质，如墨纸、木料等。

1895年11月8日晚，伦琴陷入了深深的沉思。他以前做过一次放电实验，为了确保实验的精确性，他事先用锡纸和硬纸板把各种实验器材都包裹得严严实实，并且用一个没有安装铝窗的阴极管让阴极射线透出。可是现在，他却惊奇地发现，对着阴极射线发射的一块涂有氰亚铂酸钡的屏幕（这个屏幕