hoechst
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hoechst PI染色
标签:文库时间:2025-02-14
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2008/11/09 09:55PI、Hoechst33342均可与细胞核DNA(或RNA)结合。但是PI不能通过正常的细胞膜,Hoechst则为膜通透性的荧光染料,故细胞在处于坏死或晚期调亡时细胞膜被破坏,这时可为PI着红色。正常细胞和中早期调亡细胞均可被Hoechst着色,但是正常细胞核的Hoechst着色的形态呈圆形,淡兰色,内有较深的兰色颗粒;而调亡细胞的核由于浓集而呈亮兰色,或核呈分叶,碎片状,边集。
故PI着色为坏死细胞;亮兰色,或核呈分叶状,边集的Hoechst着色的为调亡细胞。电子天平准确称取1mg 碘化丙啶(propidium iodide,PI)溶于10ml PBS(PH 7.2),成100ug/ml的储备液,用前等量混合(注意避光)
protocol:
1、收集细胞,数量需1-2×10E6个(悬浮细胞直接吹起即可,对于贴壁细胞用胰酶消化时,最好用DMEM+胰酶消化,且消化过程中不要去移动瓶子,防止消化所形成的细胞团影响后面的染色及分析),离心,11,000rpm,5min。
2、 用1ml 冰冷的PBS重悬后,离心:11,000rpm,5min。
3、用200μl冰冷的PBS重悬后,用加样器混匀后,缓慢的加入含有4m