蛋白质表达

班级：________________ 姓名：________________ 学号：________________ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _装_ _ _ _ _订_ _ _ _ _线_ _ _（装订线内禁止填写答案）_ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _ _____

一、单项选择题,（在备选答案中只有一个是正确的）(本大题共100小题,100分)

1. 维系蛋白质α-螺旋和β-折叠结构稳定的化学键是

A.氢键 B.离子键 C.二硫键 D.疏水作用 E.肽键

(4)氨基酸的疏水侧链很少埋在蛋白质分子的内部 A.1,2,3 B.1,3 C.2,4 D.4 E.1,2,3,4

11. 在电场中，蛋白质泳动速度取决于

A.蛋白质颗粒的大小 B.蛋白质颗粒的形状 C.带净电荷的多少

D.A+C

E.蛋白质所带电荷的多少，分子量的大小

第五章 蛋白质（Protein) 本章主要内容（Content）

蛋白质的一般性质（General aspects)

■ 结构 ■ 蛋白质-水相互作用，影响蛋白质水溶性的因素 ■ 蛋白质-脂的相互作用 蛋白质的变性（Denaturation）

■ 蛋白质变性产生的效应 ■ 导致蛋白质变性的物理因素 ■ 导致蛋白质变性的化学因素

蛋白质的功能性质（Functional Properties） 定义与分类

水化性质 溶解度与粘度、凝胶作用

组织化 热凝结和形成、纤维的形成热塑挤压、面团 乳化性质 乳化能力与乳化稳定性 起泡作用 起泡性与泡沫稳定性 ?蛋白质的营养特性（Nutritional properties） ?蛋白质的开发利用（Utilization）

植物蛋白质和动物蛋白质：浓缩蛋白质与分离蛋白质利用微生物生产蛋白质——单细胞蛋白 第一节 引言（Introducti

■ 蛋白质是构成生物体的基本物质。

病毒，细菌，激素，植物和动物细胞原生 质都是以蛋白质为基

1

础的。

■ 酶是蛋白质 已经发现数以千计的酶。 ■ 蛋白质是由20种氨基酸构成的聚合物 一、蛋白质的分类： （一）根据组成分类

? 简单蛋白质（

蛋白质 (Protein)

组成（Composition）

?生物大分子（Macromolecule） ?构件分子—氨基酸 (Amino acid)

氨基酸 (Amino acids) R—基团

对氨基酸性质影响强烈

?非极性、疏水性。 ?极性、电中性。

?极性、负电荷、碱性。 ?极性、正电荷、酸性。

水溶液中的氨基酸 两性电解质

水溶液中的氨基酸 酸性氨基酸

水溶液中的氨基酸 碱性氨基酸

分类（Classification）

?非极性、疏水性的 ?极性、电中性的

?极性、带负电荷、碱性的 ?极性、带正电荷、酸性的

?植物蛋白与动物蛋白在氨基酸组成上

的差异——

?人体必须氨基酸——

8种氨基酸

?蛋白质的生物学效价（PER） ?转基因植物蛋白

?各种氨基酸配比的蛋白食品

一级结构（Primary structure）

?氨基酸——氨基+羧酸基 ?肽键(Peptide bond)

一级结构（Primary structure）

?线性结构(Linear polymer of amino

acids) ?氨基酸序列（Sequence）——蛋白质分子

?氨基末端（N-terminal） ?羧酸基末端（C-terminal）

?氨基酸残基(Amin

1- 蛋白质化学

名词解释

（一） 两性离子（dipolarion）与两性化合物 （二） 等电点(isoelectric point,pI)与等离子点 （三） 必需氨基酸（essential amino acid） （四） 稀有氨基酸(rare amino acid)

（五） 非蛋白质氨基酸(nonprotein amino acid) （六） 构型(configuration)与构象(conformation) （七） 肽键、肽平面、肽单位、多肽 （八） N末端与C末端

（九） 蛋白质的一级结构(protein primary structure) （十） 蛋白质的二级结构(protein secondary structure) （十一） 蛋白质的α－螺旋结构 （十二） 蛋白质的β－折叠结构 （十三） 结构域(domain)

（十四） 超二级结构(super-secondary structure) （十五） 蛋白质的三级结构(protein tertiary

第十二章 蛋白质代谢

一：填空题

1.蛋白质的生物合成是以________________作为模板，________________作为运输氨基酸的工具，________________作为合成的场所。 2.细胞内多肽链合成的方向是从________________端到________________端，而阅读mRNA的方向是从________________端到________________端。

3.核糖体上能够结合tRNA的部位有________________部位、________________部位和________________部位。 4.ORF是指________________，已发现最小的ORF只编码________________个氨基酸。

5.蛋白质的生物合成通常以________________作为起始密码子，有时也以________________作为起始密码子，以________________、________________和________________作为终止密码子。

6.SD序列是指原核细胞mRNA的5′-端富含________________碱基的序列

蛋白质纯化

一．可溶性蛋白的纯化

方法 AC IEX GF 粗分离 + + - 中度纯化 + + - 精细纯化 - + + 1. 盐析

硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。盐浓度通常用饱和度来表示。硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。 硫酸铵分级沉淀的方法其实很简单，一般就是用浓度从低到高的硫酸铵去沉淀蛋白，可以直接在液体里加固体的硫酸铵就可以，到一定的浓度离心沉淀，上清继续加硫酸铵，再离心，上清再加硫酸铵，然后用电泳检测或者活性检测沉淀的效果。

2. 亲和纯化

Tag His GST MBP Strep(II) Flag

Size (aa) 6 218 396 8 8 Capacity (mg/ml) 40 10 10 6 0.6 MW (kDa) 1 26 42.5 1 1 Cleavage TEV/ Thrombin Thr

一、单选题

1. 蛋白质分子中的大多数氨基酸属于下列哪一项？

(A) L-β- 氨基酸 (B) D-β- 氨基酸 (C) L-α- 氨基酸 (D) D-α- 氨基酸 (E) L 、 D-α- 氨基酸 2. 属于碱性氨基酸的是

(A) 天冬氨酸 (B) 异亮氨酸 (C) 组氨酸 (D) 苯丙氨酸 (E) 半胱氨酸 3. 280nm 波长处有吸收峰的氨基酸为

(A) 丝氨酸 (B) 谷氨酸 (C) 蛋氨酸 (D) 色氨酸 (E) 精氨酸 4. 维系蛋白质二级结构稳定的化学键是

(A) 盐键 (B) 二硫键 (C) 肽键 (D) 疏水键 (E) 氢键 5. 维系蛋白质一级结构的化学键是

①盐键 ②二硫键 ③疏水键 ④肽键 ⑤氢键 6. 关于蛋白质二级结构错误的描述是

(A) 蛋白质局部或某一段肽链有规则的重复构象 (B) 二级结构仅指主链的空间构象

(C) 多肽链主链构象由每个肽键的二个二面角所确定 (D) 整条多肽链中全部氨基酸的空间位置

(E) 无规卷曲也属二级结构范畴

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《命的化学 ) 0 1年 2生 20 l卷 2期

文章编号：∞一36 2 0 )r D5 - 1 O 13{ 0 1 0 a16 0 2 2

蛋白质芯片李民周宗灿

北京大学公共卫生学院毒理学系，北京 10 8 0 0 3)

关键词：白质芯片；白质相互作用蛋蛋中图分类号：Q 3 T 97

随着人类基因组计划 ( P)利实施， HG顺以生命活动的执行者—蛋白质为研究对象的蛋白质组学蛋白质芯片越来越显得重要…,构想和发展了快捷、效、并高并行、通量的蛋白质组检测新技术—高技术。 1 .蛋白质芯片的基本构成用于蛋白质组分析的抗体茜片

圈 1抗体蛋白质芯片的设计应用流程

蛋白质芯片是高通量、型化和自动化的蛋白微质分析技术。目前蛋白质芯片主要分两种：种 一

类似于 DN A芯片，即在固相支持物表面高密度排列的探针蛋白点阵，可特异地捕获样品中的靶蛋白，然后通过检测器对靶蛋白进行定性或定量分析 (图如 1:另一种就是微型化的凝胶电泳板。在电场作用 )下，品中的蛋白质通过芯片上的孔道分离开来，样经

要比 D A芯片复杂得多， N并且定位于固体表面的蛋白质易于改变空问构象，去生物活性。芯片制作失过程中保持蛋白质的生物活性 .为限制蛋白质芯成片发展的瓶颈技术。 C

一、 是非题

1. 两条单独肽链经链间二硫键交联组成蛋白质分子，这两条肽链是该蛋白质的两个亚基。

2. 蛋白质是两性电解质。当溶剂pH在其等电点以上时，蛋白质带负电，而pH在其等电点以下时则带正电。

3. 所有α-氨基酸的α碳原子都是一个不对称碳原子。

4. 构成蛋白质的氨基酸只有个别氨基酸为D型，其他均为L型氨基酸。 5. 凝胶过滤法可用于测定蛋白质的分子量，分子量小的蛋白质先从柱上流出，分子量大的后流出。

6. 蛋白质中α-螺旋结构的最大破坏者是Pro。

7. 在水溶液中，蛋白质溶解度最小时的pH值通常就是它的等电点。 8. 蛋白质的亚基（或称亚单位）和肽链是同义词。

9. 蛋白质中一个氨基酸残基的改变，必定引起蛋白质结构的显著变化。 氨基酸为氨基取代的羧酸，可直接用碱酸滴定法进行定量测定。 10.肽平面内与α碳原子形成的键能以任一角度自由旋转，形成稳定的蛋白 质构象。

11. 在溶液的 pH 为 7 时，赖氨酸在电场中向正极方向移动。

12. 蛋白质由于带有电荷和水膜，因此在水溶液中形成稳定的胶体。蛋白质变性后沉淀都是因为中和电荷和去水膜所引起的。

13. 氨基酸在水溶液中或晶态时主要以两性离子形式存在。

14.蛋白质肽链的折叠完全由

当前位置：第一章 蛋白质化学-例题分析

例题1:某氨基酸溶于pH7的水中，所得氨基酸溶液的pH为6，问此氨基酸的pI是大于6、等于6还是小于6?

解析：氨基酸在固体状态时以两性离子形式存在。某氨基酸溶于pH 7的水中，pH从7下降到6，说明该氨基酸溶解于水的过程中放出了质子，溶液中有如下平衡存在：

为了使该氨基酸达到等电点，只有加些酸使上述平衡向左移动，因此氨基酸的pI小于6。

例题2:计算下列肽的等电点 (1)天冬氨酰甘氨酸(末端C00HpK＝2.10，末端NH3pK＝9.07，β-COOHpK＝4.53) (2)谷胱甘肽(G1u末端C00HpK＝2.12，G1y α-C00HpK＝3.53，末端NH3pK＝8.66，SHpK＝9.62)

解析：解析：计算解离情况不很复杂的寡肽等电点的原则和计算氨基酸等电点一样，可先写出其解离式，然后找出其两性离子的形式。这两性离子形式两侧的两个pK的平均值就是这个寡肽的等电 点。至于多肽和蛋白质。由于其侧链基团多，解离情况比较复杂，

一般就不能简单地套用上述的计算模式。 (1)Asp-Gly二肽的解离情况如下：

+

+

pI===3.3

(2)谷胱甘肽中Glu的γ-羧基形成γ-肽键，解离情况如下：