Gateway重组反应

河南农业大学牧医工程学院

Gateway 基因克隆

Gateway 基因克隆是由Invitrogen公司在二十世纪九十年代末发明并应用于分子生物学基因克隆的一项专利技术。该技术利用专有的重组序列使得DNA片段能够更有效地被转入质粒当中，可应用于大片段的基因克隆，并且在保持正确阅读框的前提下让不同表达载体间的DNA转移成为可能。

这一技术在插入的目的DNA片段两端整合att L1和att L2两个侧端重组序列，来构建一个类似通道的结构并称之为“入门克隆”（Gateway Entry Clone）。据Invitrogen宣称Gateway技术使用99%有效且可逆的一小组重组反应，如此使得基因克隆不同于传统的限制性内切酶方法，避免了目的片段内存在切点的问题而使得大片段DNA保持其完整性，大大提高了克隆效率，常应用于大规模的DNA片段整合进同一种表达载体，因此又称之为高通量基因克隆技术（Gateway Cloning Technology）。

一、Gateway 基因克隆的原理及机制

Gateway被视为一种克隆操作平台：把目的基因克隆到入门载体（Entry Vector）后，就不用依赖限制性内切酶，而靠载体上存在的特定重组位点和重组酶，高效、快速地

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Gateway 基因克隆

Gateway 基因克隆是由Invitrogen公司在二十世纪九十年代末发明并应用于分子生物学基因克隆的一项专利技术。该技术利用专有的重组序列使得DNA片段能够更有效地被转入质粒当中，可应用于大片段的基因克隆，并且在保持正确阅读框的前提下让不同表达载体间的DNA转移成为可能。

这一技术在插入的目的DNA片段两端整合att L1和att L2两个侧端重组序列，来构建一个类似通道的结构并称之为“入门克隆”（Gateway Entry Clone）。据Invitrogen宣称Gateway技术使用99%有效且可逆的一小组重组反应，如此使得基因克隆不同于传统的限制性内切酶方法，避免了目的片段内存在切点的问题而使得大片段DNA保持其完整性，大大提高了克隆效率，常应用于大规模的DNA片段整合进同一种表达载体，因此又称之为高通量基因克隆技术（Gateway Cloning Technology）。

一、Gateway 基因克隆的原理及机制

Gateway被视为一种克隆操作平台：把目的基因克隆到入门载体（Entry Vector）后，就不用依赖限制性内切酶，而靠载体上存在的特定重组位点和重组酶，高效、快速地

北京资产评估有限责任公司 证券评估机构

并购重组

企业并购重组是搞活企业、盘活国企资产的重要途径。现阶段我国企业并购融资多采用现金收购或股权收购支付方式。随着并购数量的剧增和并购金额的增大，已有的并购融资方式已远远不足，拓宽新的企业并购融资渠道是推进国企改革的关键之一。

目前，我国现行的并购融资方式可分为现金收购、证券（股票、债券）收购、银行信贷等。但这些融资支付方式局限性较大，无法满足重大并购的复杂情况和资金需求：

1．仅仅依赖收购方自有资金，无法完成巨大收购案例。 2．银行贷款要受到企业和银行各自的资产负债状况的限制。

3．发行新股或实施配股权是我国企业并购常用的融资方式，但它却受股市扩容规模限制及公司上市规则限制，许多公司无此条件。发行公司债券，包括可转换债券，也是可使用的融资方式，但发行公司债券的主体的资产规模、负债、偿债能力方面均达到一定要求，方有资格发债。上述并购单一融资方式显然制约了多数并购重组的进行。在此情况下，杠杆收购融资方式就成了我国并购市场亟待探讨和开拓的融资方式。

杠杆收购的资金来源组合可因各国具体金融环境而异，并不一定完全照抄美国模式。例如，

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EBS INTEGRATED SOA GATEWAY实施指南

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[第一组]

1、 对市场竞争和格局产生根本性影响的的（B）（出卷人：都兰） A、 全球公司 B、并购 C、资本扩张 D、发达国家 2、 公司成功并购的重要前提是什么？（B）（出卷人：都兰） A、 并购公司 B、并购方向 C、并购绩效 D、并购方自己 3、 公司并购的最终支付方式取决于（B）（出卷人：都兰） A、 公司利润 B、双方协商 C、资金周转情况 D、企业结构 4、公司并购的效应分析不包括（D）（出卷人：都兰）

A、经营协同效应 B、财务协同效应 C、市场份额效应 D、企业发展效应

5.（ B ）下面哪类并购不是按行业相互关系划分的？ （P11 出题人：周军） A．横行并购 B整体并购 C混合并购 D纵向并购 6、公司合并会计的方法不包括（D）（出卷人：都兰） A、 联营法 B、购买法 C、新主体法 D、并购法

7、以下（C）并购不属于企业并购整合中的有形整合。（出题人：戴徐聪） A、资产整合 B 、财务整合 C、企业文化整合 D、人力资源整合 8、以下（D）不属于公司并购后人力资源整合的原则。（出题人：戴徐聪）

A、保护组织资本原则 B、整合顺序原则 C、快速整合原则 D、结构匹配原则 9、以下 ( B)是

一、期考典测——他山之石 1．（北京市西城区2013-2014学年度第一学期七年级语文期末质量检测）结合语境，将下列句子填入横线处，顺序最恰当的一项是（ ）（2分）

北京市政府2014年将在改善市民居住条件、发展公共交通、优化生态环境等方面加大工作力度。如 。

①从而不断提高市民的生活质量 ②实现地铁7号线等建成通车 ③筹集保障性住房7万套 ④建成市级生态绿道200公里 A．③④②① B．①④②③ C．①②④③ D．③②④① 【答案】D 2．（重庆市枫叶国际学校2013-2014年下学期七年级语文期中测试 ）在下面语段的空白处填入恰当的语句，正确的一项是（ ）（2分）。

映日荷花，接天莲叶，亭亭莲蓬，柔嫩玉藕，无不牵惹诗情，引人遐思。让我们学做荷花的事业吧，__________；让我们学做莲叶的事业吧，_____________；让我们学做莲子的事业吧，___________；让我们学做莲藕的事业吧，_____________。

①把寂寞留给自己 ②把芬芳献给他人 ③以苦心孕育未来 ④以宽阔拥护生活

A．②④③① B．①④③②

重组句子教案

（06江西卷）.以“地上的狮、虎”为开头，重组下面的句子。（可适当增删词语，但不能增减信息）（4分）

天鹅在水中为王，是凭着一切足以缔造太平世界的所有美德，如高尚、尊严、仁厚等等；而地上的狮、虎，空中的鹰、鹫就不是这样，都只以善战称雄，以逞强行凶统治群众。

答：地

上

的

狮

、

虎

【答案】：空中的鹰、鹫，都只以善战称雄，以逞强行凶统治群众，而天鹅就不是这样，它在水中为王，是凭着一切足以缔造太平世界的所有美德，如高尚、尊严、仁厚等等。

1999年全国考题

用“儒、道、佛”作开头，重组下面这个句子，不得改变原意。

苏轼的生活与创作充满了矛盾，因为他曾受到儒、道、佛各方面的影响，思想比较复杂。

解题思路：原句中有“因为”一词，抓住这一因果关系，即可找到重组语句的主干。儒、道、佛各方面对苏轼都有影响，使得他生活与创作充满了矛盾，思想比较复杂。此答案把“思想比较复杂”放在“生活与创作充满了矛盾”之后，位置不当。因为“生活与创作”应受“思想”的支配。

答案：儒、道、佛各方面对苏轼都有影响，使得他思想比较复杂，生活与创作充满了矛盾。

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重组句子教案

（06江西卷）.以“地上的狮、虎”为开头，重组下面的句子。（可适当增删词语，但不能增减信息）（4分）

天鹅在水中为王，是凭着一切足以缔造太平世界的所有美德，如高尚、尊严、仁厚等等；而地上的狮、虎，空中的鹰、鹫就不是这样，都只以善战称雄，以逞强行凶统治群众。

答：地

上

的

狮

、

虎

【答案】：空中的鹰、鹫，都只以善战称雄，以逞强行凶统治群众，而天鹅就不是这样，它在水中为王，是凭着一切足以缔造太平世界的所有美德，如高尚、尊严、仁厚等等。

1999年全国考题

用“儒、道、佛”作开头，重组下面这个句子，不得改变原意。

苏轼的生活与创作充满了矛盾，因为他曾受到儒、道、佛各方面的影响，思想比较复杂。

解题思路：原句中有“因为”一词，抓住这一因果关系，即可找到重组语句的主干。儒、道、佛各方面对苏轼都有影响，使得他生活与创作充满了矛盾，思想比较复杂。此答案把“思想比较复杂”放在“生活与创作充满了矛盾”之后，位置不当。因为“生活与创作”应受“思想”的支配。

答案：儒、道、佛各方面对苏轼都有影响，使得他思想比较复杂，生活与创作充满了矛盾。